不同温度对梨花粉管生长的影响
摘要：以不同品种花粉为试验材料，10℃、37℃作为试验温度进行花粉离体萌发并统计萌发率。以“砀山”为材料研究不同温度梯度下花粉管电解质的相对外渗率，以及高温胁迫下花粉管微丝骨架的变化；选择四种不同耐热性花粉作FDA染色鉴定。结果表明：“崇化大梨”、“甘谷香水”抗寒性好，“库尔勒香梨”花粉耐热性好，相对外渗率呈U形曲线，常温下外渗率最低；微丝骨架高温胁迫下并不解聚，而是出现花粉管尖端膨大；FDA染色不同耐热性花粉存在差异。
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 3
1 材料与方法 3
1．1 花粉离体萌发 3
1．1．1 材料 3
1．1．2 方法 3
1．2 电导率 3
1．2．1 材料 3
1．2．2 方法 3
1．3 FDA荧光染色 3
1．3．1 材料 3
1．3．2 方法 3
1．4 微丝骨架 3
1．4．1 材料 3
1．4．2 方法 3
2 结果与分析 4
2．1 花粉离体萌发 4
2．1．1 低温下花粉离体萌发情况 4
2．1．2 高温下花粉离体萌发情况 4
2．2 电导率 4
2．3 FDA荧光染色 5
2．4 微丝骨架 6
3 讨论 6
致谢 7
参考文献 8
不同温度对梨花粉管生长的影响
引言
引言 花粉萌发和花粉管生长是植物繁殖的必要步骤。这个过程受多个生物和非生物胁迫，其中温度的影响较大。如棉花25℃时花粉萌发率最高，10℃以下与45℃以上花粉均不萌发[1]；胡萝卜在33℃以上会明显抑制其活力[2]。对于梨来说，低温和高温对花粉管伸长的影响极显著[3]，而不同梨品种花粉离体萌发率以及花粉管长度也有显著差异[4]。微丝骨架可以视为细胞中的一个生物感知器,当外界环境发生变化,它也随之发生变化来响应环境对其造成的影响[5]，
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
它作为一些信号级联反应的下游效应器参与调节花粉管的生长[6]。荧光素二醋酸酯（FDA）被广泛应用于鉴定生活的花粉、培养细胞、原生质体，以及鉴定酶法分离的胚囊[7]。在低温或高温胁迫下，花粉萌发率以及花粉管长度会出现显著变化，而且花粉与花粉管会失活从而无法被FDA染色[8]。植物在温度胁迫下，原生质结构受到影响，原生质膜选择透性丧失，盐类或有机物从细胞中渗出，影响电导率[9]。通过研究梨在温度胁迫的条件下花粉生长的一些生理指标的变化，以期在实际生产中对于梨在授粉阶段的条件控制以及提高座果率等方面起到指导作用。
1 材料与方法
1．1 花粉离体萌发
1．1．1 材料 大学江浦农场不同品种干燥花粉
1．1．2 方法 25℃作为对照温度，10℃和37℃为处理温度进行离体培养，10℃使用固体培养基，37℃使用液体培养基，用显微镜观察花粉萌发情况，统计萌发率。
1．2 电导率
1．2．1 材料 “砀山”、“翠冠”、“丰水”、“满丰”的干燥花粉
1．2．2 方法 取一定量花粉加入一定量液体培养基中，25℃培养2 h，静置至常温后测其初始电导率V0。再用六个温度梯度（4℃、22℃、25℃、28℃、32℃、37℃）培养2 h，静置至常温，测其电导率V1。然后煮沸，静置至常温，测其煮沸电导率V2，用公式（V1 V0）/（V2 V0）* 100% 计算电解质的相对外渗率，不同温度进行比较。
1．3 FDA荧光染色
1．3．1 材料 “砀山”、“翠冠”、“丰水”、“满丰”的干燥花粉
1．3．2 方法 取少量花粉加入400 uL液体培养基中，25℃培养2 h，以37℃作为处理温度，25℃作为对照温度，培养2 h。 取出后加入1 uL FDA，静置15 min染色。离心30 s，去上清，加入液体培养基，摇匀后离心，倒出上清液，重复23遍，将多余FDA冲洗净。最后加入400 uL液体培养基，摇匀，取数滴花粉培养液与载玻片上，在荧光显微镜下观察，通过荧光下染色情况确定花粉及花粉管活性。
1．4 微丝骨架
1．4．1 材料 “砀山”的干燥花粉
1．4．2 方法 取一定量花粉加入200 uL液体培养基中，25℃培养2 h，以37℃作为处理温度，25℃作为对照温度，用氨基酸处理30 min，然后加入2 uL MBS培养8 min，离心，去上清，室温放置30 min。用200 uL PBS冲洗2遍，再加入100 uL PBS，1.5 uL 染料FITCPh，4℃过夜。取出后用200 uL PBS冲洗3遍，再加入20 uL PBS。取数滴花粉培养液与载玻片上，在甲蓝光、40倍镜下观察微丝染色结果。
2 结果与分析
2．1 花粉离体萌发
2．1．1 低温下花粉离体萌发情况 供试梨品种的花粉在低温下离体萌发率平均为16.6%，品种间差异较大。如表1所示，“崇化大梨”的萌发率最高，达到37.1%，而“红酥脆”和“满天红”的萌发率只有4.6%。供试品种中，萌发率在10%以下的有3种，占16.7%；10%20%的有10种，占55.5%；20%以上的有5种，占27.8%。
表1 10℃下梨18个品种花粉离体萌发率比较
Table 1 18 varieties of pear pollen germination rate in vitro at 10℃
品种
萌发率
品种
萌发率
品种
萌发率
Cultivar
Germination
rate (%)
Cultivar
Germination
rate (%)
Cultivar
Germination
rate (%)
大香水
18.2
目录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 3
1 材料与方法 3
1．1 花粉离体萌发 3
1．1．1 材料 3
1．1．2 方法 3
1．2 电导率 3
1．2．1 材料 3
1．2．2 方法 3
1．3 FDA荧光染色 3
1．3．1 材料 3
1．3．2 方法 3
1．4 微丝骨架 3
1．4．1 材料 3
1．4．2 方法 3
2 结果与分析 4
2．1 花粉离体萌发 4
2．1．1 低温下花粉离体萌发情况 4
2．1．2 高温下花粉离体萌发情况 4
2．2 电导率 4
2．3 FDA荧光染色 5
2．4 微丝骨架 6
3 讨论 6
致谢 7
参考文献 8
不同温度对梨花粉管生长的影响
引言
引言 花粉萌发和花粉管生长是植物繁殖的必要步骤。这个过程受多个生物和非生物胁迫，其中温度的影响较大。如棉花25℃时花粉萌发率最高，10℃以下与45℃以上花粉均不萌发[1]；胡萝卜在33℃以上会明显抑制其活力[2]。对于梨来说，低温和高温对花粉管伸长的影响极显著[3]，而不同梨品种花粉离体萌发率以及花粉管长度也有显著差异[4]。微丝骨架可以视为细胞中的一个生物感知器,当外界环境发生变化,它也随之发生变化来响应环境对其造成的影响[5]，
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它作为一些信号级联反应的下游效应器参与调节花粉管的生长[6]。荧光素二醋酸酯（FDA）被广泛应用于鉴定生活的花粉、培养细胞、原生质体，以及鉴定酶法分离的胚囊[7]。在低温或高温胁迫下，花粉萌发率以及花粉管长度会出现显著变化，而且花粉与花粉管会失活从而无法被FDA染色[8]。植物在温度胁迫下，原生质结构受到影响，原生质膜选择透性丧失，盐类或有机物从细胞中渗出，影响电导率[9]。通过研究梨在温度胁迫的条件下花粉生长的一些生理指标的变化，以期在实际生产中对于梨在授粉阶段的条件控制以及提高座果率等方面起到指导作用。
1 材料与方法
1．1 花粉离体萌发
1．1．1 材料 大学江浦农场不同品种干燥花粉
1．1．2 方法 25℃作为对照温度，10℃和37℃为处理温度进行离体培养，10℃使用固体培养基，37℃使用液体培养基，用显微镜观察花粉萌发情况，统计萌发率。
1．2 电导率
1．2．1 材料 “砀山”、“翠冠”、“丰水”、“满丰”的干燥花粉
1．2．2 方法 取一定量花粉加入一定量液体培养基中，25℃培养2 h，静置至常温后测其初始电导率V0。再用六个温度梯度（4℃、22℃、25℃、28℃、32℃、37℃）培养2 h，静置至常温，测其电导率V1。然后煮沸，静置至常温，测其煮沸电导率V2，用公式（V1 V0）/（V2 V0）* 100% 计算电解质的相对外渗率，不同温度进行比较。
1．3 FDA荧光染色
1．3．1 材料 “砀山”、“翠冠”、“丰水”、“满丰”的干燥花粉
1．3．2 方法 取少量花粉加入400 uL液体培养基中，25℃培养2 h，以37℃作为处理温度，25℃作为对照温度，培养2 h。 取出后加入1 uL FDA，静置15 min染色。离心30 s，去上清，加入液体培养基，摇匀后离心，倒出上清液，重复23遍，将多余FDA冲洗净。最后加入400 uL液体培养基，摇匀，取数滴花粉培养液与载玻片上，在荧光显微镜下观察，通过荧光下染色情况确定花粉及花粉管活性。
1．4 微丝骨架
1．4．1 材料 “砀山”的干燥花粉
1．4．2 方法 取一定量花粉加入200 uL液体培养基中，25℃培养2 h，以37℃作为处理温度，25℃作为对照温度，用氨基酸处理30 min，然后加入2 uL MBS培养8 min，离心，去上清，室温放置30 min。用200 uL PBS冲洗2遍，再加入100 uL PBS，1.5 uL 染料FITCPh，4℃过夜。取出后用200 uL PBS冲洗3遍，再加入20 uL PBS。取数滴花粉培养液与载玻片上，在甲蓝光、40倍镜下观察微丝染色结果。
2 结果与分析
2．1 花粉离体萌发
2．1．1 低温下花粉离体萌发情况 供试梨品种的花粉在低温下离体萌发率平均为16.6%，品种间差异较大。如表1所示，“崇化大梨”的萌发率最高，达到37.1%，而“红酥脆”和“满天红”的萌发率只有4.6%。供试品种中，萌发率在10%以下的有3种，占16.7%；10%20%的有10种，占55.5%；20%以上的有5种，占27.8%。
表1 10℃下梨18个品种花粉离体萌发率比较
Table 1 18 varieties of pear pollen germination rate in vitro at 10℃
品种
萌发率
品种
萌发率
品种
萌发率
Cultivar
Germination
rate (%)
Cultivar
Germination
rate (%)
Cultivar
Germination
rate (%)
大香水
18.2
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