接合型质粒pls20解旋酶基因的鉴定及有效接合时间的确定
：质粒接合介导的基因水平转移不仅在微生物种群进化中扮演了很重要的角色，更在抗性基因以及致病因子的传播上发挥着主要的作用。接合系统存在于许多质粒和染色体整合元件之中，被称为ICEs（整合和接合元件）。其中存在于革兰氏阴性细菌中接合系统调控路线已经被研究的相当详细，但是在革兰氏阳性细菌中的接合质粒pLS20中的相关功能基因还不为人们所知。pLS20介导的质粒接合并不是由受体菌产生的信息素激活，而是受质粒上编码的相关蛋白所调节。本文通过总结之前的工作，鉴定了与接合相关的基因，并确定了接合的有效时间范围。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 前言 1
1.1 枯草芽孢杆菌简介 1
1.1.1 枯草芽孢杆菌的简介 1
1.1.2 枯草芽孢杆菌168菌株 1
1.1.3 芽抱杆菌表达系统的特点 2
1.2 质粒pLS20简介 2
1.3 接合系统中mob基因简介 2
2 材料与方法 3
2.1 实验材料与试剂 3
2.2 实验方法 3
2.2.1 同源重组双交换敲除27c与JXM基因 3
2.2.2 27c（抑制解旋基因）与JXM（解旋酶基因）敲除验证 4
2.2.3 感受态细胞的培养与转化 4
2.2.4 试剂盒法提取质粒 5
2.2.5 供体与受体接合 5
2.2.6 27cQC有效结合时间的确定 5
2.2.7 mob基因与接合之间的探索实验 5
2.2.8 高效感受态细胞的制备和转化 5
3 结果与分析 6
3.1 27c与JXM基因的完全敲除验证 6
3.1.1 27c基因的完全敲除验证 6
3.1.2 JXM基因的完全敲除验证 7
3.2 27c与JXM基因敲除后接合实验 7
3.2.1 对照组（CK）接合实验 7
3.2.2 27c基因敲除后接合实验 8
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3.2.3 JXM基因敲除后接合实验 8
3.3 27cQC有效接合时间实验 8
3.3.1 对照组（CK）的有效接合时间（预实验） 8
3.3.2 27cQC有效接合时间 8
3.4 质粒pT2mob的构建 10
4 讨论 11
4.1 27c与JXM基因的完全敲除及其功能验证 11
4.2 27cQC有效接合时间的确定 12
4.3 质粒pT2mob的构建 12
致谢 12
参考文献 12
附录 13
接合性质粒pLS20解旋酶基因的鉴定及有效接合时间的确定
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 前言 1
1.1 枯草芽孢杆菌简介 1
1.1.1 枯草芽孢杆菌的简介 1
1.1.2 枯草芽孢杆菌168菌株 1
1.1.3 芽抱杆菌表达系统的特点 2
1.2 质粒pLS20简介 2
1.3 接合系统中mob基因简介 2
2 材料与方法 3
2.1 实验材料与试剂 3
2.2 实验方法 3
2.2.1 同源重组双交换敲除27c与JXM基因 3
2.2.2 27c（抑制解旋基因）与JXM（解旋酶基因）敲除验证 4
2.2.3 感受态细胞的培养与转化 4
2.2.4 试剂盒法提取质粒 5
2.2.5 供体与受体接合 5
2.2.6 27cQC有效结合时间的确定 5
2.2.7 mob基因与接合之间的探索实验 5
2.2.8 高效感受态细胞的制备和转化 5
3 结果与分析 6
3.1 27c与JXM基因的完全敲除验证 6
3.1.1 27c基因的完全敲除验证 6
3.1.2 JXM基因的完全敲除验证 7
3.2 27c与JXM基因敲除后接合实验 7
3.2.1 对照组（CK）接合实验 7
3.2.2 27c基因敲除后接合实验 8
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3.2.3 JXM基因敲除后接合实验 8
3.3 27cQC有效接合时间实验 8
3.3.1 对照组（CK）的有效接合时间（预实验） 8
3.3.2 27cQC有效接合时间 8
3.4 质粒pT2mob的构建 10
4 讨论 11
4.1 27c与JXM基因的完全敲除及其功能验证 11
4.2 27cQC有效接合时间的确定 12
4.3 质粒pT2mob的构建 12
致谢 12
参考文献 12
附录 13
接合性质粒pLS20解旋酶基因的鉴定及有效接合时间的确定
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