新疆芜菁多糖体内免疫活性研究
摘要： 目的：研究新疆芜菁多糖（BLP-2-2）的体内免疫活性；方法：采用环磷酰胺（Cy）诱导的方法，构建免疫抑制的SPF级BALB/c小鼠模型；建立空白组、Cy-模型组、阳性对照组以及低（100 mg/kg(d）、中（200 mg/kg(d）、高（400 mg/kg(d）剂量BLP-2-2组，对随机分组的小鼠进行为期14天的培养；通过测定相关指标，包括：小鼠免疫器官指数、血清中溶血素水平、溶菌酶活性以及抗氧化酶系的酶活力，利用方差分析与Duncan检验，分析数据是否具有显著性；结果：小鼠免疫抑制模型构建成功；阳性对照组及BLP-2-2组数据，相对Cy-模型组数据，具有显著性(P < 0.05)，且反映出BLP-2-2对免疫抑制小鼠具有修复功能，甚至是增强功效。结论：新疆芜菁多糖（BLP-2-2）具有一定的体内免疫调节与促进作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1 原料 2
1.2 材料与试剂 2
1.3 仪器与设备2
1.4 试验方法2
1.4.1新疆芜菁多糖BLP的制备2
1.4.2新疆芜菁多糖（BLP22）的制备3
1.4.3动物试验设计 3
1.4.4新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠免疫器官指数的影响3
1.4.5新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清溶血素水平的影响3
1.4.6新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清中溶菌酶活性的影响 4
1.4.7新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清中NO释放量的影响4
1.4.8新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠肝脏抗氧化酶系酶活力的影响 4
1.4.9统计分析 4
2结果与分析4
2.1 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠胸腺指数的影响4
2.2 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠脾脏指数的影响5
2.3 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
清溶血素水平的影响5
2.4 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血清溶菌酶活性的影响6
2.5 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血清NO释放量的影响6
2.6 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠肝脏中抗氧化酶系酶活力的影响7
3讨论8
致谢10
参考文献11
新疆芜菁多糖体内免疫活性研究
引言
现如今，癌症是危害人们生命健康主要原因[1]。大量的抗癌药物被运用到临床治疗过程中，虽然功效强大,但也会损害人体的防御机制，致使免疫抑制和细胞毒性效应。环磷酰胺(Cy)具有较强的抗癌能力[2]，被广泛运用到癌症治疗过程中。环磷酰胺的代谢产物具有细胞毒性，能够防止细胞复制，抑制癌细胞增殖。另一代谢产物丙烯醛则具有毒副作用[3]。环磷酰胺诱导产生的免疫抑制和氧化应激没有有效的应对措施。
而从天然产物中提取的各种多糖，由于各项恢复能力强大，且毒性较低，吸引了科研工作者的关注[4]。研究表明，在降低化疗产生的一系列副作用的同时，与多糖相结合的化疗过程能使机体获得一定程度上的恢复[5]。
芜菁(Brassica rapa L.) 也叫蔓菁、莞根，十字花科，芸苔属，两年生草本，全国各地均有栽培，种子或根为其药用部分[6]。新疆人民更视芜菁为真主赐给他们的保肺壮身之佳品。目前，对芜菁多糖活性的研究主要集中在抗氧化[7]、降血糖[8]等方面。因此，本实验的开展，主要针对环磷酰胺诱导产生的免疫抑制和氧化应激，通过测定相关指标，包括，脏器指数、溶血素水平、溶菌酶含量、NO释放量、抗氧化酶酶系酶活，研究新疆芜菁多糖（BLP22）是否具有免疫调节和修复过氧化造成的损伤作用，对丰富新疆芜菁多糖免疫活性的研究有一定意义。
1 材料与方法
试验原料
新疆芜菁
SPF级BALB/c小鼠，6周龄，体重（BW）22 ± 2g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司；
材料与试剂
DEAE纤维素52凝胶、葡聚糖G100凝胶、牛血清蛋白标准品；
环磷酰胺（Cy）与盐酸左旋咪唑（LM）购于上海瑞永生物科技有限公司；NO释放量、溶菌酶、总超氧化物歧化酶（TSOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、过氧化氢酶（CAT）以及总抗氧化能力（TAOC）检测试剂盒购于南京建成生物试剂生物工程研究所；2%绵羊红细胞（SRBC）购于南京森贝伽生物科技有限公司；氢氧化钠、盐酸、氯化钠、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G250、无水乙醇等为常规分析纯试剂。
仪器与设备
名称
型号/规格
产地
台式离心机
TDZ5WS
长沙湘智离心机仪器有限公司
数显恒温水浴锅
HH6
常州普天仪器制造公司
恒温鼓风干燥箱
DHG9140A
上海一恒科技有限公司
电子天平
AY120
日本SHIMADZU公司
层析柱
2.6 × 30 cm，1.6 × 100 cm
上海亚荣生化仪器有限公司
透析袋
3500Da，14000Da
上海绿鸟科技发展有限公司
自动收集器
BS100A
上海青浦沪西仪器厂
电脑数显恒流泵
BHLB
上海青浦沪西仪器厂
立式压力蒸汽灭菌锅
LDZX50KBS
上海申安医疗器械厂
真空旋转蒸发仪
OSB2100
日本EYELA公司
冻干机
Lyo 50
西班牙TELSTAR公司
酶标仪
Synergy2
美国Biotek公司
细胞培养板
美国Thermo
试验方法
1．4．1 新疆芜菁粗多糖（BLP）的提取
新疆芜菁多糖的提取方法按李雅双[9]等人的方法稍作改动。将新疆芜菁洗净，切块，干燥。将干燥后的芜菁块根粉碎，乙醇回流，以除去大部分脂类物质。取一定量制备好的芜菁粉末，置于烧杯中，加入30倍体积的蒸馏水，共两次，水浴锅中80 ℃热水浸提1.5 h，，抽滤。收集滤液，浓缩至1/3体积，离心。醇沉上清液，离心，去上清，即得新疆芜菁粗多糖（BLP）样品，冻干备用。
1．4．2 新疆芜菁多糖（BLP22）的制备
新疆芜菁多糖（BLP22）的制备方法按李雅双[9]等人的方法稍作改动。
称取一定量的粗多糖样品，制成约6%的粗多糖溶液，4000 r/min离心5 min，取上清。每次取10 mL溶液进行上样，经DEAE纤维素52色谱柱（2.6 × 30 cm）分离纯化，分别用0、0.1、0.3及0.5 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速约2 mL/min，使用自动收集器收集，每管10 mL。采用苯酚硫酸法测定出含有纯化多糖的试管，收集不同梯度的纯化组分，旋蒸浓缩，透析，再浓缩，冻干，即得BLP1、BLP2、BLP3、BLP4共4组初步纯化多糖样品。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1 原料 2
1.2 材料与试剂 2
1.3 仪器与设备2
1.4 试验方法2
1.4.1新疆芜菁多糖BLP的制备2
1.4.2新疆芜菁多糖（BLP22）的制备3
1.4.3动物试验设计 3
1.4.4新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠免疫器官指数的影响3
1.4.5新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清溶血素水平的影响3
1.4.6新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清中溶菌酶活性的影响 4
1.4.7新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠血清中NO释放量的影响4
1.4.8新疆芜菁多糖（BLP22）对BALB/c小鼠肝脏抗氧化酶系酶活力的影响 4
1.4.9统计分析 4
2结果与分析4
2.1 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠胸腺指数的影响4
2.2 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠脾脏指数的影响5
2.3 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
清溶血素水平的影响5
2.4 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血清溶菌酶活性的影响6
2.5 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠血清NO释放量的影响6
2.6 新疆芜菁多糖（BLP22）对BALA/c小鼠肝脏中抗氧化酶系酶活力的影响7
3讨论8
致谢10
参考文献11
新疆芜菁多糖体内免疫活性研究
引言
现如今，癌症是危害人们生命健康主要原因[1]。大量的抗癌药物被运用到临床治疗过程中，虽然功效强大,但也会损害人体的防御机制，致使免疫抑制和细胞毒性效应。环磷酰胺(Cy)具有较强的抗癌能力[2]，被广泛运用到癌症治疗过程中。环磷酰胺的代谢产物具有细胞毒性，能够防止细胞复制，抑制癌细胞增殖。另一代谢产物丙烯醛则具有毒副作用[3]。环磷酰胺诱导产生的免疫抑制和氧化应激没有有效的应对措施。
而从天然产物中提取的各种多糖，由于各项恢复能力强大，且毒性较低，吸引了科研工作者的关注[4]。研究表明，在降低化疗产生的一系列副作用的同时，与多糖相结合的化疗过程能使机体获得一定程度上的恢复[5]。
芜菁(Brassica rapa L.) 也叫蔓菁、莞根，十字花科，芸苔属，两年生草本，全国各地均有栽培，种子或根为其药用部分[6]。新疆人民更视芜菁为真主赐给他们的保肺壮身之佳品。目前，对芜菁多糖活性的研究主要集中在抗氧化[7]、降血糖[8]等方面。因此，本实验的开展，主要针对环磷酰胺诱导产生的免疫抑制和氧化应激，通过测定相关指标，包括，脏器指数、溶血素水平、溶菌酶含量、NO释放量、抗氧化酶酶系酶活，研究新疆芜菁多糖（BLP22）是否具有免疫调节和修复过氧化造成的损伤作用，对丰富新疆芜菁多糖免疫活性的研究有一定意义。
1 材料与方法
试验原料
新疆芜菁
SPF级BALB/c小鼠，6周龄，体重（BW）22 ± 2g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司；
材料与试剂
DEAE纤维素52凝胶、葡聚糖G100凝胶、牛血清蛋白标准品；
环磷酰胺（Cy）与盐酸左旋咪唑（LM）购于上海瑞永生物科技有限公司；NO释放量、溶菌酶、总超氧化物歧化酶（TSOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、过氧化氢酶（CAT）以及总抗氧化能力（TAOC）检测试剂盒购于南京建成生物试剂生物工程研究所；2%绵羊红细胞（SRBC）购于南京森贝伽生物科技有限公司；氢氧化钠、盐酸、氯化钠、苯酚、硫酸、考马斯亮蓝G250、无水乙醇等为常规分析纯试剂。
仪器与设备
名称
型号/规格
产地
台式离心机
TDZ5WS
长沙湘智离心机仪器有限公司
数显恒温水浴锅
HH6
常州普天仪器制造公司
恒温鼓风干燥箱
DHG9140A
上海一恒科技有限公司
电子天平
AY120
日本SHIMADZU公司
层析柱
2.6 × 30 cm，1.6 × 100 cm
上海亚荣生化仪器有限公司
透析袋
3500Da，14000Da
上海绿鸟科技发展有限公司
自动收集器
BS100A
上海青浦沪西仪器厂
电脑数显恒流泵
BHLB
上海青浦沪西仪器厂
立式压力蒸汽灭菌锅
LDZX50KBS
上海申安医疗器械厂
真空旋转蒸发仪
OSB2100
日本EYELA公司
冻干机
Lyo 50
西班牙TELSTAR公司
酶标仪
Synergy2
美国Biotek公司
细胞培养板
美国Thermo
试验方法
1．4．1 新疆芜菁粗多糖（BLP）的提取
新疆芜菁多糖的提取方法按李雅双[9]等人的方法稍作改动。将新疆芜菁洗净，切块，干燥。将干燥后的芜菁块根粉碎，乙醇回流，以除去大部分脂类物质。取一定量制备好的芜菁粉末，置于烧杯中，加入30倍体积的蒸馏水，共两次，水浴锅中80 ℃热水浸提1.5 h，，抽滤。收集滤液，浓缩至1/3体积，离心。醇沉上清液，离心，去上清，即得新疆芜菁粗多糖（BLP）样品，冻干备用。
1．4．2 新疆芜菁多糖（BLP22）的制备
新疆芜菁多糖（BLP22）的制备方法按李雅双[9]等人的方法稍作改动。
称取一定量的粗多糖样品，制成约6%的粗多糖溶液，4000 r/min离心5 min，取上清。每次取10 mL溶液进行上样，经DEAE纤维素52色谱柱（2.6 × 30 cm）分离纯化，分别用0、0.1、0.3及0.5 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，流速约2 mL/min，使用自动收集器收集，每管10 mL。采用苯酚硫酸法测定出含有纯化多糖的试管，收集不同梯度的纯化组分，旋蒸浓缩，透析，再浓缩，冻干，即得BLP1、BLP2、BLP3、BLP4共4组初步纯化多糖样品。
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