菜豆根瘤菌cfn42中影响其接受共生岛的基因筛选
根瘤菌与豆科植物可以通过一系列复杂作用形成共生固氮体系。这种共生体系能够将大气中的N2还原为植物可利用的氮元素，同时促进土壤中的氮循环。研究中发现可结瘤的菌株中带有固氮基因及结瘤基因的共生岛可以通过水平转移的方式转入不能结瘤的菌株中，使之可以与植物形成固氮体系。本实验利用转座子插入失活的方式建立了Rhizobium etli CFN42突变子文库，将其作为受体菌，选用实验室中已经在共生岛间隔区插入kanamycin抗性基因的A. caulinodans ORS571（将其命名为Azc1）作为供体菌，通过二亲接合的方式筛选得到可以接受共生岛的Rhizobium etli CFN42突变株。经初步验证后，利用Arbitrary Primer PCR鉴定出了转座子插入到了基因RHE-RS01180的位置。最后构建了Rhizobium etli CFN42 △RHE-RS01180，与Azc1进行二亲接合以及测定了接合频率。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法5
1.1 菌株和质粒5
1.2 培养基和培养条件5
1.3 实验室所用抗生素6
1.4 酶和试剂6
1.5 实验室基本试验方法6
1.6 筛选流程8
1.7 构建Rhizobium etli CFN42 突变子文库8
1.8 Rhizobium etli CFN42突变株与Azc1二亲接合9
1.9 Arbitrary Primer PCR9
1.10 利用overlapping PCR方法RHERS01180基因两端的序列进行互补连接10
1.11重组质粒1180pEX18Gm的构建12
1.12电转化将酶连产物转入感受态细胞中13
1.13 Rhizobium etli CFN42 RHERS01180缺失株的构建14
1.14二亲结合测定共生岛水平转移频率14
2 结果与分析14
2.1 接合子初步验证14
2.2 转座子插入位点分析 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
15
2.3 Rhizobium etli CFN42 RHERS01180缺失株的构建16
2.4 接合频率测定18
3 讨论19
致谢20
参考文献21
附录 文中所用的略缩语22
菜豆根瘤菌CFN42中影响其接受共生岛的基因筛选
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法5
1.1 菌株和质粒5
1.2 培养基和培养条件5
1.3 实验室所用抗生素6
1.4 酶和试剂6
1.5 实验室基本试验方法6
1.6 筛选流程8
1.7 构建Rhizobium etli CFN42 突变子文库8
1.8 Rhizobium etli CFN42突变株与Azc1二亲接合9
1.9 Arbitrary Primer PCR9
1.10 利用overlapping PCR方法RHERS01180基因两端的序列进行互补连接10
1.11重组质粒1180pEX18Gm的构建12
1.12电转化将酶连产物转入感受态细胞中13
1.13 Rhizobium etli CFN42 RHERS01180缺失株的构建14
1.14二亲结合测定共生岛水平转移频率14
2 结果与分析14
2.1 接合子初步验证14
2.2 转座子插入位点分析 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
15
2.3 Rhizobium etli CFN42 RHERS01180缺失株的构建16
2.4 接合频率测定18
3 讨论19
致谢20
参考文献21
附录 文中所用的略缩语22
菜豆根瘤菌CFN42中影响其接受共生岛的基因筛选
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