hplc法测定消炎止痛糖浆中绿原酸的含量(附件)
摘 要消炎止痛糖浆是由板蓝根、蒲公英、连翘、紫花地丁、甘草、金银花等多味药材制成的复方制剂。金银花为本方中的君药，所含成分绿原酸具有抗菌、抗病毒的药理活性，是其发挥抗菌消炎、抗病毒的主要有效水溶性成分。因此选择测定样品中绿原酸的含量作为控制消炎止痛糖浆质量的重要参数，利用HPLC法测定消炎止痛糖浆中绿原酸的含量。从消炎止痛糖浆中提取分离绿原酸，采用不同方法处理消炎止痛糖浆作为供试品，优选绿原酸提取率最高的最佳处理方法。调整合适的色谱条件，然后用HPLC法对提取到的绿原酸分别进行专属性试验、线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率实验测定消炎止痛糖浆中绿原酸的含量。本实验可操作性强，实验结果具良好的稳定性，为该中成药的质量标准研究奠定了理论和技术基础。目 录
1 绪论 1
1.1课题意义 1
1.2研究现状 1
1.2.1HPLC法的概述 1
1.2.2金银花药材简介 2
2 实验内容及结果 6
2.1实验材料 6
2.1.1主要仪器 6
2.1.2实验药品与试剂 6
2.1.3主要试剂的配制 6
2.2方法与结果 7
2.2.1色谱条件及系统适用性 7
2.2.2专属性试验 7
2.2.3线性关系考察 8
2.2.4精密度试验 9
2.2.5提取溶媒的选择 9
2.2.6稳定性试验 10
2.2.7重复性试验 10
2.2.8加样回收率 11
2.2.9样品测定 12
3 讨论与分析 14
结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1 课题意义
中药质量标准是国家对中药质量及其检验方法所做的技术规定。凡正式批准生产的中药包括药材饮片及其制剂、辅料和基质都要制定质量标准[1]。制定中药质量标准时，必须坚持质量量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理”的原则，用来确保中药的有效性、稳定性、安全性和可控性。研究和制定规范化的中药质量标准，是促进中药向全世界发
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谢 19
1 绪论
1.1 课题意义
中药质量标准是国家对中药质量及其检验方法所做的技术规定。凡正式批准生产的中药包括药材饮片及其制剂、辅料和基质都要制定质量标准[1]。制定中药质量标准时，必须坚持质量量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理”的原则，用来确保中药的有效性、稳定性、安全性和可控性。研究和制定规范化的中药质量标准，是促进中药向全世界发展的重要条件。
中成药是中药的重要组成部分，中成药组成复杂、剂型多样、检测指标建立较难等特点给中成药的质量控制增加了难度。再加上许多的中成药没有质量标准，也没有适宜的检测方法，从而影响了中成药的产品质量和用药安全，也限制了其在世界范围内的推广使用。因此，制定与提高中成药质量鉴定标准，增强其可控性，推进中成药现代化与标准化成为中成药发展的重要任务。
本课题样品消炎止痛糖浆由金银花、大青叶、板蓝根、蒲公英及连翘等药味组成。金银花为方中君药，所含成分绿原酸具有抗菌、抗病毒的药理活性，是其发挥抗菌消炎、抗病毒的主要有效水溶性成分。因此选择测定样品中绿原酸的含量作为控制消炎止痛糖浆质量的重要参数。
1.2研究现状
1.2.1HPLC法的概述
近些年来随着科学技术的进步，我国在医学药物分析方面的检测技术和检测设备都得到了快速的发展[2]。高效液相色谱法简称HPLC，是近年来迅速发展起来的一种快速高效的新型分析分离技术。HPLC是以液体溶剂作为流动相的色谱技术，它联合了经典液相色谱法与气相色谱法的分析分离原理，并对其进一步发展使其迅速成长为新型液相色谱法。此法具有分离效能高和分析速度快等优点，并且不受样品挥发性的限定。对于高沸点、热不稳定性差、相对分子质量大的有机物,都可用高效液相色谱法来进行分离、分析[3]。HPLC法在《中国药典》1985年版刚规定使用时，只有8个品种规定使用HPLC方法检测,而到1995年版已达113个品种[4]，2000版药典的应用达到了282次，在药典所有分析方法中它是发展最快的一种分析方法。
随着科学技术的进步，高效液相色谱仪与不同的检测器联用技术也逐步完善。将不同的检测器一起联用可以在一次进样分析中得到更多、更准确的信息，此外HPLC还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点这使高效液相色谱检测技术在药物分析与药物质量控制方面具有不可替代的作用[5]。
1.2.2金银花药材简介
金银花（lonicera japonica Thund）别名忍冬，因为金银花初开为白色，后转为黄色，故得名金银花。药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。主产于我国河南、山东等地，日本和朝鲜也有分布。夏初花开放前采收，干燥。生用，炒用或制成露剂使用。本品性寒，味甘，归肺、心、胃经[6]，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风、疏散风热的功效，主治痈肿疔疮、温病发热、热毒血痢等症。
1.2.2.1化学成分
金银花的主要组成为黄酮类物质、三萜类物质、无机元素、有机酸和挥发油。对于黄酮类物质而言，金银花中主要含有忍冬苷、木犀草素等多种黄酮类物质，同时再有机酸的方面，金银花主要含有绿原酸、棕榈酸、咖啡酸以及异绿原酸等有机酸类物质。在三萜类物质方面，金银花种含有3种能够起到保肝效果的三萜类皂苷，同时在近年来从金银花中能够得到一种全新的化合物为新长春皂苷F，也是一种三萜类物质。在无机元素方面，金银花种主要含有钙、铁、磷等15种微量元素[7]。而对于金银花而言，最为重要的一种有效成分就是金银花中含有的挥发油，同时也含有多种有机化合物。
绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分,包括绿原酸、异绿原酸和咖啡酸。其中异绿原酸为一混合物，它的异构体有7种，分别为4, 5二咖啡酸奎尼酸、3, 4二咖啡酸酰奎尼酸、3, 5二咖啡酸酰奎尼酸、1, 3二咖啡酸酰、3, 5二咖啡3阿魏酰奎尼酸、4阿魏奎尼酸、5阿魏奎尼酸。同时测定3个化合物含量，结果显示：绿原酸含量为3.5%～5.5%, 用高效液相色谱测的奎尼酸含量为2.4%～6.6%, 咖啡酸含量为0.006%～0.057%[8]。
1.2.2.2药理作用
清热解毒作用：中医临床主要用于治疗温病发热。因为金银花解毒作用颇佳，并且具有轻宣舒散之效，常用于治疗外感风热、温病及疮疡肿等热毒症[9]。著名治疗风热感冒的“银翘饮”即以金银花为主药。通过临床试验得知金银花的对角叉菜等提取物能明显提高鼠腹腔巨噬细胞吞噬巨红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,从而证明临床作用为清热解毒, 治疗感染性疾病主要是通过调节机体免疫功能而实现的[10]。
抗菌消炎作用：金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用，体外试验证明：金银花对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌等均有一定的抑制作用, 对肺炎球菌、脑膜炎双球菌、铜绿假单胞菌、结核杆菌亦有效[11]。水浸剂比煎剂作用强，叶煎剂比花煎剂作用强。金银花对变形链球菌，具有较好的抑菌杀菌作用，金银花与青霉素合用，能加强青霉素对耐药金黄色葡萄糖球菌的抗菌作用，两者具有协同作用。金银花对铁锈色小芽胞癣菌、星形奴卡菌等皮肤霉菌产生绿晕现象[12]。
抗肿瘤作用：金银花有提高免疫功能的作用, 煎剂能增加白细胞、炎性细胞的吞噬能力。有研究表明金银花具有细胞类抗肿瘤作用,诱导癌细胞分化，抗癌侵袭、转移作用，抗信息传递，转移肿瘤的多药耐药性，抑制端粒酶活性，作为抗癌性增效剂以及抗
1 绪论 1
1.1课题意义 1
1.2研究现状 1
1.2.1HPLC法的概述 1
1.2.2金银花药材简介 2
2 实验内容及结果 6
2.1实验材料 6
2.1.1主要仪器 6
2.1.2实验药品与试剂 6
2.1.3主要试剂的配制 6
2.2方法与结果 7
2.2.1色谱条件及系统适用性 7
2.2.2专属性试验 7
2.2.3线性关系考察 8
2.2.4精密度试验 9
2.2.5提取溶媒的选择 9
2.2.6稳定性试验 10
2.2.7重复性试验 10
2.2.8加样回收率 11
2.2.9样品测定 12
3 讨论与分析 14
结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1 课题意义
中药质量标准是国家对中药质量及其检验方法所做的技术规定。凡正式批准生产的中药包括药材饮片及其制剂、辅料和基质都要制定质量标准[1]。制定中药质量标准时，必须坚持质量量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理”的原则，用来确保中药的有效性、稳定性、安全性和可控性。研究和制定规范化的中药质量标准，是促进中药向全世界发
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谢 19
1 绪论
1.1 课题意义
中药质量标准是国家对中药质量及其检验方法所做的技术规定。凡正式批准生产的中药包括药材饮片及其制剂、辅料和基质都要制定质量标准[1]。制定中药质量标准时，必须坚持质量量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理”的原则，用来确保中药的有效性、稳定性、安全性和可控性。研究和制定规范化的中药质量标准，是促进中药向全世界发展的重要条件。
中成药是中药的重要组成部分，中成药组成复杂、剂型多样、检测指标建立较难等特点给中成药的质量控制增加了难度。再加上许多的中成药没有质量标准，也没有适宜的检测方法，从而影响了中成药的产品质量和用药安全，也限制了其在世界范围内的推广使用。因此，制定与提高中成药质量鉴定标准，增强其可控性，推进中成药现代化与标准化成为中成药发展的重要任务。
本课题样品消炎止痛糖浆由金银花、大青叶、板蓝根、蒲公英及连翘等药味组成。金银花为方中君药，所含成分绿原酸具有抗菌、抗病毒的药理活性，是其发挥抗菌消炎、抗病毒的主要有效水溶性成分。因此选择测定样品中绿原酸的含量作为控制消炎止痛糖浆质量的重要参数。
1.2研究现状
1.2.1HPLC法的概述
近些年来随着科学技术的进步，我国在医学药物分析方面的检测技术和检测设备都得到了快速的发展[2]。高效液相色谱法简称HPLC，是近年来迅速发展起来的一种快速高效的新型分析分离技术。HPLC是以液体溶剂作为流动相的色谱技术，它联合了经典液相色谱法与气相色谱法的分析分离原理，并对其进一步发展使其迅速成长为新型液相色谱法。此法具有分离效能高和分析速度快等优点，并且不受样品挥发性的限定。对于高沸点、热不稳定性差、相对分子质量大的有机物,都可用高效液相色谱法来进行分离、分析[3]。HPLC法在《中国药典》1985年版刚规定使用时，只有8个品种规定使用HPLC方法检测,而到1995年版已达113个品种[4]，2000版药典的应用达到了282次，在药典所有分析方法中它是发展最快的一种分析方法。
随着科学技术的进步，高效液相色谱仪与不同的检测器联用技术也逐步完善。将不同的检测器一起联用可以在一次进样分析中得到更多、更准确的信息，此外HPLC还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点这使高效液相色谱检测技术在药物分析与药物质量控制方面具有不可替代的作用[5]。
1.2.2金银花药材简介
金银花（lonicera japonica Thund）别名忍冬，因为金银花初开为白色，后转为黄色，故得名金银花。药材金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花。主产于我国河南、山东等地，日本和朝鲜也有分布。夏初花开放前采收，干燥。生用，炒用或制成露剂使用。本品性寒，味甘，归肺、心、胃经[6]，具有清热解毒、抗炎、补虚疗风、疏散风热的功效，主治痈肿疔疮、温病发热、热毒血痢等症。
1.2.2.1化学成分
金银花的主要组成为黄酮类物质、三萜类物质、无机元素、有机酸和挥发油。对于黄酮类物质而言，金银花中主要含有忍冬苷、木犀草素等多种黄酮类物质，同时再有机酸的方面，金银花主要含有绿原酸、棕榈酸、咖啡酸以及异绿原酸等有机酸类物质。在三萜类物质方面，金银花种含有3种能够起到保肝效果的三萜类皂苷，同时在近年来从金银花中能够得到一种全新的化合物为新长春皂苷F，也是一种三萜类物质。在无机元素方面，金银花种主要含有钙、铁、磷等15种微量元素[7]。而对于金银花而言，最为重要的一种有效成分就是金银花中含有的挥发油，同时也含有多种有机化合物。
绿原酸类化合物是金银花的主要有效成分,包括绿原酸、异绿原酸和咖啡酸。其中异绿原酸为一混合物，它的异构体有7种，分别为4, 5二咖啡酸奎尼酸、3, 4二咖啡酸酰奎尼酸、3, 5二咖啡酸酰奎尼酸、1, 3二咖啡酸酰、3, 5二咖啡3阿魏酰奎尼酸、4阿魏奎尼酸、5阿魏奎尼酸。同时测定3个化合物含量，结果显示：绿原酸含量为3.5%～5.5%, 用高效液相色谱测的奎尼酸含量为2.4%～6.6%, 咖啡酸含量为0.006%～0.057%[8]。
1.2.2.2药理作用
清热解毒作用：中医临床主要用于治疗温病发热。因为金银花解毒作用颇佳，并且具有轻宣舒散之效，常用于治疗外感风热、温病及疮疡肿等热毒症[9]。著名治疗风热感冒的“银翘饮”即以金银花为主药。通过临床试验得知金银花的对角叉菜等提取物能明显提高鼠腹腔巨噬细胞吞噬巨红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,从而证明临床作用为清热解毒, 治疗感染性疾病主要是通过调节机体免疫功能而实现的[10]。
抗菌消炎作用：金银花对多种致病菌均有一定的抑制作用，体外试验证明：金银花对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、痢疾杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌等均有一定的抑制作用, 对肺炎球菌、脑膜炎双球菌、铜绿假单胞菌、结核杆菌亦有效[11]。水浸剂比煎剂作用强，叶煎剂比花煎剂作用强。金银花对变形链球菌，具有较好的抑菌杀菌作用，金银花与青霉素合用，能加强青霉素对耐药金黄色葡萄糖球菌的抗菌作用，两者具有协同作用。金银花对铁锈色小芽胞癣菌、星形奴卡菌等皮肤霉菌产生绿晕现象[12]。
抗肿瘤作用：金银花有提高免疫功能的作用, 煎剂能增加白细胞、炎性细胞的吞噬能力。有研究表明金银花具有细胞类抗肿瘤作用,诱导癌细胞分化，抗癌侵袭、转移作用，抗信息传递，转移肿瘤的多药耐药性，抑制端粒酶活性，作为抗癌性增效剂以及抗
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