酵母双杂交检测pep12和vac1与pi3k复合体亚基的互作
Pep12是内体进行运输和融合时靶膜上的受体，参与囊泡在高尔基复合体和液泡之间的转运，调节小泡进入液泡前体囊腔。Vac1是一个能够通过使囊泡高度保真的停留和融合来参与囊泡介导的液泡蛋白分选的多价调节蛋白，它是确保囊泡靶向内体的必不可少的蛋白之一。在囊泡运输过程中，Vps21与PI3K复合物以及其下游的一系列效应物进行互作，调控早期内体到后期内体的成熟。研究发现Vps21也参与细胞自噬。已知Pep12和Vac1是Vps21的下游效应物，并且实验发现，敲除PEP12和VAC1之后，细胞自噬也受到影响，产生与敲除VPS21相似的细胞自噬表型。本论文通过酵母双杂交检测Pep12和Vac1是否与PI3K复合物互作来探讨他们参与细胞自噬的可能机制。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract. 3
Key words 3
1 材料与方法 4
1．1 菌株、质粒 4
1．2 重组质粒的构建 4
1．2．1 酵母菌DNA的提取 5
1．2．2 扩增PEP12基因片段 5
1．2．3 大肠杆菌中载体的提取 6
1．2．4 目的基因和载体的酶切 6
1．2．5 目的基因和载体的酶连 7
1．3 重组质粒转化到大肠杆菌中 7
1．4 含重组质粒的大肠杆菌阳性克隆的鉴定 7
1．4．1 菌落PCR筛选阳性克隆 7
1．4．2 阳性克隆菌落质粒的酶切验证 8
1．5 重组质粒的测序 8
1．6 重组质粒的功能验证 8
1．6．1 检测重组质粒能否回补突变体表型 8
1．6．2 检测突变体回补后的温敏感性 9
1．6．3 检测重组质粒的蛋白表达 9
1．7 酵母双杂交检测蛋白之间的相互作用 9
1．8 在二倍体菌落中分别检测蛋白是否表达 10
2 结果与分析 10
2．1 目的基因的重组和扩增 10
2．2 重组质粒的组成结构与生物学功能的正确性的验证 11
2．3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
酵母双杂交和Western Blot验证Pep12和Vac1与PI3K复合物亚基的相互作用 13
3 讨论 14
3．1 pGADT7PEP12 对其突变体的表型回补不完全，并且对细胞正常形态有影响 14
3．2 pGADT7PEP12#1和pGADT7PEP12#3对突变体的回补效果不一致 15
3．3 酵母双杂交的结果并不完全准确 15
致谢 15
参考文献： 15
附录 16
附录一Western Blot的步骤 16
附录二 常见的培养基、溶液的配置 17
附录三 常用仪器 21
酵母双杂交检测Pep12和Vac1与PI3K复合体亚基的互作
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract. 3
Key words 3
1 材料与方法 4
1．1 菌株、质粒 4
1．2 重组质粒的构建 4
1．2．1 酵母菌DNA的提取 5
1．2．2 扩增PEP12基因片段 5
1．2．3 大肠杆菌中载体的提取 6
1．2．4 目的基因和载体的酶切 6
1．2．5 目的基因和载体的酶连 7
1．3 重组质粒转化到大肠杆菌中 7
1．4 含重组质粒的大肠杆菌阳性克隆的鉴定 7
1．4．1 菌落PCR筛选阳性克隆 7
1．4．2 阳性克隆菌落质粒的酶切验证 8
1．5 重组质粒的测序 8
1．6 重组质粒的功能验证 8
1．6．1 检测重组质粒能否回补突变体表型 8
1．6．2 检测突变体回补后的温敏感性 9
1．6．3 检测重组质粒的蛋白表达 9
1．7 酵母双杂交检测蛋白之间的相互作用 9
1．8 在二倍体菌落中分别检测蛋白是否表达 10
2 结果与分析 10
2．1 目的基因的重组和扩增 10
2．2 重组质粒的组成结构与生物学功能的正确性的验证 11
2．3 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
酵母双杂交和Western Blot验证Pep12和Vac1与PI3K复合物亚基的相互作用 13
3 讨论 14
3．1 pGADT7PEP12 对其突变体的表型回补不完全，并且对细胞正常形态有影响 14
3．2 pGADT7PEP12#1和pGADT7PEP12#3对突变体的回补效果不一致 15
3．3 酵母双杂交的结果并不完全准确 15
致谢 15
参考文献： 15
附录 16
附录一Western Blot的步骤 16
附录二 常见的培养基、溶液的配置 17
附录三 常用仪器 21
酵母双杂交检测Pep12和Vac1与PI3K复合体亚基的互作
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/swgc/swgc/628.html
