朴菇多糖高产菌株产糖营养条件优化
目 录
1 引言 1
1.1 金针菇多糖概述 1
1.2 研究现状 2
1.3 研究目的与意义 3
2 实验所需的样品，设备及相关药品 3
2.1 样品来源 3
2.2 实验主要设备 3
2.3 所用主要药品及试剂 4
2.4 培养基 4
3 实验方法 5
3.1 实验流程图 5
3.2 液体发酵 5
3.2.1 斜面活化培养 5
3.2.2 液体种子制备 5
3.2.3 菌丝体的发酵培养 6
3.2.4 菌丝体干重测定 6
3.3 多糖的测定 6
3.3.1 总糖含量的测定-蒽酮硫酸法测定总的多糖含量： 6
3.3.2 还原糖测定-DNS法： 7
3.3.3 pH值的测定 7
3.3.4 胞外多糖的测定 7
3.3.5 胞内粗多糖的提取 7
3.4 实验方法 8
3.4.1 菌种活化 8
3.4.2 液体培养基中碳源的确定 8
3.4.3 液体发酵培养基中氮源的确定 8
3.4.4 发酵条件中最适温度的确定 8
3.4.5 发酵条件中最适初始pH值的确定 8
3.4.6 发酵条件中最适宜装液量的确定 8
3.4.7 发酵条件中最适的摇瓶转速 8
3.4.8 发酵条件中最佳的发酵时间 9
3.4.9 植物油对菌丝生长的影响 9
4 结果与分析 9
4.1 碳源筛选 9
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
4.2 氮源的筛选 10
4.3 发酵培养温度的筛选 11
4.4 培养基起始pH值的筛选 12
4.5 摇瓶装液量的筛选 13
4.6 摇床转速的筛选 14
4.7 发酵时间的筛选 15
4.8 植物油添加对金针菇生长的影响 16
结 论 18
致 谢 19
参考文献 20
1 引言
随着社会的进步和科技的发展，人们生活水平提高后对食品有了更高的要求，金针菇等食用菌，由于其具有部分疗效作用,营养丰富且没有公害的食品而日益受到青睐。金针菇氨基酸的含量非常丰富，高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量特别高，赖氨酸具有促进儿童智力发育的功能。金针菇可抑制血脂升高，降低胆固醇，防治心脑血管疾病。金针菇具有抵抗疲劳、抗菌消炎、消除重金属盐类物质、抗肿瘤、提高免疫力的生理活性物质，如多糖、多肽、生物碱、甙类等。经常食用金针菇，不仅可以预防和治疗肝脏病及胃、肠道溃疡，而且也适合高血压患者、肥胖者和中老年人食用，这主要是因为它是一种高钾低钠食品。因此，利用食用菌生产保健食品、功能食品，己为世人所瞩目，具有广阔的开发前景。
金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、朴菇、冬菇、朴菰、冻菌、金菇、智力菇等。金针菇在分类上从属于能形成子实体的大型真菌类食用菌，营养和医药价值较高；但由于它的培养周期较长，大大限制了对此真菌资源的开发利用。为了满足市场对金针菇的要求，近年来，以液体菌种替代固体菌种进行扩大繁殖成为了金针菇栽培规模化生产的发展方向。这样便可以在极短的时间内获得菌丝且不受季节和土地等因素的影响。
我国食用菌产业近年来发展迅速，而食用菌液体深层发酵培养的研究与应用又大大开创了我国食用菌产业新的纪元。因为深层发酵法是当今生产微生物产品的最新手段，它可以在短时间内使微生物菌丝体或其代谢产物增长迅速，是工业化生产食用菌菌丝体方法之一。
近年来人们对金针菇在中药中用于肝脏及胃肠道疾病的治疗效用进行了大量的研究,己从子实体中分离得到多种具有生物学活性的物质,其中金针菇多糖受到广泛关注,其主要作用表现为免疫调节与抗肿瘤[1]。为了更好的利用金针菇及其产生的次级代谢产物,本课题对金针菇进行了液体摇瓶培养的研究,通过对其培养基及培养条件的优化，来获得更多的多糖，为工厂化生产提供依据。
1.1 金针菇多糖概述
朴菇属担子菌目金钱菌属。朴菇不仅营养成分齐全，含有丰富的粗蛋白、碳合物、粗脂肪、粗纤维、烟酸、矿质元素如铁、钙、磷、钠等，还含有朴菇多糖、免疫调节蛋白、黄酮类、萜类等多种生物活性成分[2，3]。金针菇属于能形成子实体的大型真菌类食用菌,有较高的营养和医药价值,是人类可以利用的宝贵自然资源;但由于它的栽培周期长,限制了对此真菌资源的开发利用。为此金针菇的液体培养模式,不受季节和土地的限制,以深层发酵法在极短的时间内获得菌丝,另一方面,金针菇菌丝体发酵醪液一般为黄棕色稠状菌丝体悬浮液,不可忽视的是其中活性物质有一定种类和数量的积累,非常适宜于加工成天然复合饮料等食品。故而开发微生物蛋白、多糖类物质为代表的药品及功能食品,在医药的开发应用上具有广阔的发展空间,且市场上需求量大,应用前景看好。
金针菇多糖FVP是由数个多糖组分构成的混合多糖，其中主要是葡聚糖[4],它的生物活性是由多糖组成的空间结构决定的。实验证明, 金针菇多糖FVP能抑制肝脏进一步损伤 [5]。
1.2 研究现状
对于金针菇多糖的研究已屡见不鲜，从荆瑞勇等人的论文中了解到，从各参数的综合指示效果进行优化，得到生产金针菇多糖的最佳培养基[7]为:麸皮1.5%、蔗糖2% 、硝酸铵0.5%、MgS04.7H2O 0.05%、KH2PO4 0.2%、VB1 0.005%、VB2 0.005%。在饶玉鹏等人的研究中，得到金针菇菌丝体液体发酵的最适矿质元素为CaCO3、温度26℃、摇床转速110r /min、培养时间为5天 [8，9]。在22℃-26℃范围内, 伴随着温度的升高, 菌丝体干重逐渐增加, 在26℃时, 菌丝体干重达到最高, 超过26℃时, 菌丝体干重下降, 32℃菌丝干重急剧下降, 可能与菌丝出现自溶有关.故金针菇菌丝体液体发酵适宜的培养温度为22℃-26℃, 而26℃是金针菇液体培养的最适温度；当摇床转速过大时, 菌丝体难结块或成球,不利收集菌丝体;转速过小, 则菌丝体不能均匀分散于培养基中, 易结成较大的菌丝块, 不利于菌丝体的生长发育.实验表明:130r /m in时, 菌丝球的大小(小于3mm )较110 r /m in 时更适合做菌种, 可以作为固体栽培种和发酵罐扩大培养的种子。
除此之外还通过江玉姬的研究了解到种子菌龄、接种量、通气量对金针菇深层发酵菌丝体产量有显著的影响,以15%的接种量较为经济,控制其它最佳条件,可获得较高的菌丝体产量[10，11]。在贾建波关于桑黄多糖高产菌株的优化中得到启发，可以通过适量添加GMP来促使多糖的合成，使更多的碳源流向多糖合成[12]。加入植物油可使菌丝产量增加, 从而使胞内多糖产量增加[13]。以金针菇胞外多糖、生物量和还原糖为参数，可以采用正交试验设计对金针菇胞外多糖液体发酵培养基碳源、氮源、无机盐和生长因子等进行优化。
琼脂 BR
尿素 AR
葡萄糖 C6H12O6 AR 成都市科龙化工试剂厂
1 引言 1
1.1 金针菇多糖概述 1
1.2 研究现状 2
1.3 研究目的与意义 3
2 实验所需的样品，设备及相关药品 3
2.1 样品来源 3
2.2 实验主要设备 3
2.3 所用主要药品及试剂 4
2.4 培养基 4
3 实验方法 5
3.1 实验流程图 5
3.2 液体发酵 5
3.2.1 斜面活化培养 5
3.2.2 液体种子制备 5
3.2.3 菌丝体的发酵培养 6
3.2.4 菌丝体干重测定 6
3.3 多糖的测定 6
3.3.1 总糖含量的测定-蒽酮硫酸法测定总的多糖含量： 6
3.3.2 还原糖测定-DNS法： 7
3.3.3 pH值的测定 7
3.3.4 胞外多糖的测定 7
3.3.5 胞内粗多糖的提取 7
3.4 实验方法 8
3.4.1 菌种活化 8
3.4.2 液体培养基中碳源的确定 8
3.4.3 液体发酵培养基中氮源的确定 8
3.4.4 发酵条件中最适温度的确定 8
3.4.5 发酵条件中最适初始pH值的确定 8
3.4.6 发酵条件中最适宜装液量的确定 8
3.4.7 发酵条件中最适的摇瓶转速 8
3.4.8 发酵条件中最佳的发酵时间 9
3.4.9 植物油对菌丝生长的影响 9
4 结果与分析 9
4.1 碳源筛选 9
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
4.2 氮源的筛选 10
4.3 发酵培养温度的筛选 11
4.4 培养基起始pH值的筛选 12
4.5 摇瓶装液量的筛选 13
4.6 摇床转速的筛选 14
4.7 发酵时间的筛选 15
4.8 植物油添加对金针菇生长的影响 16
结 论 18
致 谢 19
参考文献 20
1 引言
随着社会的进步和科技的发展，人们生活水平提高后对食品有了更高的要求，金针菇等食用菌，由于其具有部分疗效作用,营养丰富且没有公害的食品而日益受到青睐。金针菇氨基酸的含量非常丰富，高于一般菇类，尤其是赖氨酸的含量特别高，赖氨酸具有促进儿童智力发育的功能。金针菇可抑制血脂升高，降低胆固醇，防治心脑血管疾病。金针菇具有抵抗疲劳、抗菌消炎、消除重金属盐类物质、抗肿瘤、提高免疫力的生理活性物质，如多糖、多肽、生物碱、甙类等。经常食用金针菇，不仅可以预防和治疗肝脏病及胃、肠道溃疡，而且也适合高血压患者、肥胖者和中老年人食用，这主要是因为它是一种高钾低钠食品。因此，利用食用菌生产保健食品、功能食品，己为世人所瞩目，具有广阔的开发前景。
金针菇学名毛柄金钱菌，又称毛柄小火菇、构菌、朴菇、冬菇、朴菰、冻菌、金菇、智力菇等。金针菇在分类上从属于能形成子实体的大型真菌类食用菌，营养和医药价值较高；但由于它的培养周期较长，大大限制了对此真菌资源的开发利用。为了满足市场对金针菇的要求，近年来，以液体菌种替代固体菌种进行扩大繁殖成为了金针菇栽培规模化生产的发展方向。这样便可以在极短的时间内获得菌丝且不受季节和土地等因素的影响。
我国食用菌产业近年来发展迅速，而食用菌液体深层发酵培养的研究与应用又大大开创了我国食用菌产业新的纪元。因为深层发酵法是当今生产微生物产品的最新手段，它可以在短时间内使微生物菌丝体或其代谢产物增长迅速，是工业化生产食用菌菌丝体方法之一。
近年来人们对金针菇在中药中用于肝脏及胃肠道疾病的治疗效用进行了大量的研究,己从子实体中分离得到多种具有生物学活性的物质,其中金针菇多糖受到广泛关注,其主要作用表现为免疫调节与抗肿瘤[1]。为了更好的利用金针菇及其产生的次级代谢产物,本课题对金针菇进行了液体摇瓶培养的研究,通过对其培养基及培养条件的优化，来获得更多的多糖，为工厂化生产提供依据。
1.1 金针菇多糖概述
朴菇属担子菌目金钱菌属。朴菇不仅营养成分齐全，含有丰富的粗蛋白、碳合物、粗脂肪、粗纤维、烟酸、矿质元素如铁、钙、磷、钠等，还含有朴菇多糖、免疫调节蛋白、黄酮类、萜类等多种生物活性成分[2，3]。金针菇属于能形成子实体的大型真菌类食用菌,有较高的营养和医药价值,是人类可以利用的宝贵自然资源;但由于它的栽培周期长,限制了对此真菌资源的开发利用。为此金针菇的液体培养模式,不受季节和土地的限制,以深层发酵法在极短的时间内获得菌丝,另一方面,金针菇菌丝体发酵醪液一般为黄棕色稠状菌丝体悬浮液,不可忽视的是其中活性物质有一定种类和数量的积累,非常适宜于加工成天然复合饮料等食品。故而开发微生物蛋白、多糖类物质为代表的药品及功能食品,在医药的开发应用上具有广阔的发展空间,且市场上需求量大,应用前景看好。
金针菇多糖FVP是由数个多糖组分构成的混合多糖，其中主要是葡聚糖[4],它的生物活性是由多糖组成的空间结构决定的。实验证明, 金针菇多糖FVP能抑制肝脏进一步损伤 [5]。
1.2 研究现状
对于金针菇多糖的研究已屡见不鲜，从荆瑞勇等人的论文中了解到，从各参数的综合指示效果进行优化，得到生产金针菇多糖的最佳培养基[7]为:麸皮1.5%、蔗糖2% 、硝酸铵0.5%、MgS04.7H2O 0.05%、KH2PO4 0.2%、VB1 0.005%、VB2 0.005%。在饶玉鹏等人的研究中，得到金针菇菌丝体液体发酵的最适矿质元素为CaCO3、温度26℃、摇床转速110r /min、培养时间为5天 [8，9]。在22℃-26℃范围内, 伴随着温度的升高, 菌丝体干重逐渐增加, 在26℃时, 菌丝体干重达到最高, 超过26℃时, 菌丝体干重下降, 32℃菌丝干重急剧下降, 可能与菌丝出现自溶有关.故金针菇菌丝体液体发酵适宜的培养温度为22℃-26℃, 而26℃是金针菇液体培养的最适温度；当摇床转速过大时, 菌丝体难结块或成球,不利收集菌丝体;转速过小, 则菌丝体不能均匀分散于培养基中, 易结成较大的菌丝块, 不利于菌丝体的生长发育.实验表明:130r /m in时, 菌丝球的大小(小于3mm )较110 r /m in 时更适合做菌种, 可以作为固体栽培种和发酵罐扩大培养的种子。
除此之外还通过江玉姬的研究了解到种子菌龄、接种量、通气量对金针菇深层发酵菌丝体产量有显著的影响,以15%的接种量较为经济,控制其它最佳条件,可获得较高的菌丝体产量[10，11]。在贾建波关于桑黄多糖高产菌株的优化中得到启发，可以通过适量添加GMP来促使多糖的合成，使更多的碳源流向多糖合成[12]。加入植物油可使菌丝产量增加, 从而使胞内多糖产量增加[13]。以金针菇胞外多糖、生物量和还原糖为参数，可以采用正交试验设计对金针菇胞外多糖液体发酵培养基碳源、氮源、无机盐和生长因子等进行优化。
琼脂 BR
尿素 AR
葡萄糖 C6H12O6 AR 成都市科龙化工试剂厂
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