白果糖蛋白糖链结构分析
白果是我国药食两用的特有坚果，有着良好的经济价值，但白果除具一定毒性以外,还存在食用易引起过敏的问题,使得白果及白果制品不宜多吃,限制了白果产业的发展。降低白果及白果制品致敏性、提高食用安全性成为是白果产业急需解决的问题之一。以往研究表明白果糖蛋白是白果致敏原之一，由于植物致敏糖蛋白上的糖链结构与其致敏性密切相关，因此研究分析白果糖蛋白的糖链结构将为降低白果致敏性提供理论依据。本研究将对白果糖蛋白糖链进行释放、分离、富集、标记并利用高灵敏的高效液相色谱联合质谱技术对白果蛋白N-连接糖链进行定性定量分析，并对我国十个主要产地的白果N-糖链的结构和含量进行了差异性分析，在其中检测到了14种不同的N-糖链的结构，扩充了白果的N-聚糖数据库，同时发现十种白果的N-聚糖含量与种类并未表现出地区性差异。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料2
1.1.1 原料2
1.1.2 主要试剂2
1.1.3 主要实验仪器2
1.2 方法描述2
1.2.1 蛋白提取物制备2
1.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析3
1.2.3 蛋白质印迹3
1.2.4 单糖分析4
1.2.5 N糖链释放和荧光标记5
1.2.6 超高效液相色谱仪（UPLC）分析5
1.2.7 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOFMS）分析6
1.2.8 统计学分析7
2 结果与分析7
2.1 SDSPAGE与蛋白质印迹分析7
2.2 单糖分析8
2.3 N糖链的UPLC图谱分析9
2.4 N糖链结构分析10
2.5 N糖链定量分析22
3 讨论24
致谢27
参考文献28
缩略词表
Glc *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
葡萄糖
Gal (G)
半乳糖
Man (M)
甘露糖
Fuc (F)
岩藻糖
Xyl (X)
木糖
Ara
阿拉伯糖
Rha
鼠李糖
GlcA
葡萄糖醛酸
GalA
半乳糖醛酸
GlcN
氨基葡萄糖
Api
芹菜糖
GlcNAc (Gn)
N乙酰葡糖胺
Hex
己糖
HexNAc
N乙酰己糖胺
白果糖蛋白糖链结构分析
引言
引言
白果中除了小分子类物质如酚醇类物质能够引起过敏反应，白果中的蛋白类物质也具有一定的致敏作用。杨剑婷从白果蛋白粗提物中发现了多种过敏蛋白参与了血清免疫球蛋白E（IgE）介导的过敏反应，其中含量最高的为白果32K糖蛋白[1]。根据现有文献，食源性蛋白过敏源多为糖蛋白，如大豆致敏蛋白，花生致敏糖蛋白Ara h1。同时有研究证明，糖蛋白上的糖链与IgE介导的过敏反应有关，如花生致敏糖蛋白Ara h1的糖链被证明是IgE抗体识别的重要抗原表位[2]。由此可见，白果致敏蛋白上糖链也是白果致敏研究的重要的研究对象之一。本研究将详细定性定量分析白果糖蛋白的糖链结构，并对来自十个主要白果产地的白果样品在N糖链结构与含量上的差异进行比较。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 原料
白果采购自国内十个主要白果产地，包括：江苏泰兴、江苏邳州、云南昆明、山东临沂、河北宿州、广西桂林、贵州六盘水、甘肃徽县、四川青川以及广东南雄。
1.1.2 主要试剂
三羟甲基氨基甲烷（Tris）：北京索莱宝科技有限公司
甲醇：广东光华科技股份有限公司
三氯甲烷：广东光华科技股份有限公司
2氨基苯甲酸胺（2AB）：天津希恩思生化科技有限公司
色谱纯乙腈：德国默克有限公司
色谱纯甲酸：德国默克有限公司
色谱纯氨水：德国默克有限公司
2,5一二羟基苯甲酸（DHB）：sigma公司
SupelcleanTM ENVICarbTM预装柱：sigma公司
PNGase H+：实验室自主表达
1.1.3 主要实验仪器
高速冷冻离心机（HemaTGL.16R）购于珠海黑马医学仪器有限公司
隔水式恒温培养箱（GRP1960）购于上海森信实验仪器有限公司
真空离心浓缩干燥机购于太仓市华利达实验设备有限公司
恒温混匀仪购于杭州龙杨科学仪器有限公司
超低温保存冰箱购于中国海尔集团
制冰机购于雪科电器有限公司
FA2004分析电子天平购于上海良平仪器仪表有限公司
Shimadzu Nexera超高压液相色谱仪（配有LC30AD泵、RF20Axs荧光检测器SIL30AC自动进样器、LCsolution工作站、HILIC高压柱）
MALDITOFMS（基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪）购于德国Bruker公司，配套含有数据处理软件Bruker Flexanalysis 3.3。
1.2 方法描述
1.2.1 蛋白提取物制备
1）蛋白浸提
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料2
1.1.1 原料2
1.1.2 主要试剂2
1.1.3 主要实验仪器2
1.2 方法描述2
1.2.1 蛋白提取物制备2
1.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）分析3
1.2.3 蛋白质印迹3
1.2.4 单糖分析4
1.2.5 N糖链释放和荧光标记5
1.2.6 超高效液相色谱仪（UPLC）分析5
1.2.7 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDITOFMS）分析6
1.2.8 统计学分析7
2 结果与分析7
2.1 SDSPAGE与蛋白质印迹分析7
2.2 单糖分析8
2.3 N糖链的UPLC图谱分析9
2.4 N糖链结构分析10
2.5 N糖链定量分析22
3 讨论24
致谢27
参考文献28
缩略词表
Glc *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
葡萄糖
Gal (G)
半乳糖
Man (M)
甘露糖
Fuc (F)
岩藻糖
Xyl (X)
木糖
Ara
阿拉伯糖
Rha
鼠李糖
GlcA
葡萄糖醛酸
GalA
半乳糖醛酸
GlcN
氨基葡萄糖
Api
芹菜糖
GlcNAc (Gn)
N乙酰葡糖胺
Hex
己糖
HexNAc
N乙酰己糖胺
白果糖蛋白糖链结构分析
引言
引言
白果中除了小分子类物质如酚醇类物质能够引起过敏反应，白果中的蛋白类物质也具有一定的致敏作用。杨剑婷从白果蛋白粗提物中发现了多种过敏蛋白参与了血清免疫球蛋白E（IgE）介导的过敏反应，其中含量最高的为白果32K糖蛋白[1]。根据现有文献，食源性蛋白过敏源多为糖蛋白，如大豆致敏蛋白，花生致敏糖蛋白Ara h1。同时有研究证明，糖蛋白上的糖链与IgE介导的过敏反应有关，如花生致敏糖蛋白Ara h1的糖链被证明是IgE抗体识别的重要抗原表位[2]。由此可见，白果致敏蛋白上糖链也是白果致敏研究的重要的研究对象之一。本研究将详细定性定量分析白果糖蛋白的糖链结构，并对来自十个主要白果产地的白果样品在N糖链结构与含量上的差异进行比较。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 原料
白果采购自国内十个主要白果产地，包括：江苏泰兴、江苏邳州、云南昆明、山东临沂、河北宿州、广西桂林、贵州六盘水、甘肃徽县、四川青川以及广东南雄。
1.1.2 主要试剂
三羟甲基氨基甲烷（Tris）：北京索莱宝科技有限公司
甲醇：广东光华科技股份有限公司
三氯甲烷：广东光华科技股份有限公司
2氨基苯甲酸胺（2AB）：天津希恩思生化科技有限公司
色谱纯乙腈：德国默克有限公司
色谱纯甲酸：德国默克有限公司
色谱纯氨水：德国默克有限公司
2,5一二羟基苯甲酸（DHB）：sigma公司
SupelcleanTM ENVICarbTM预装柱：sigma公司
PNGase H+：实验室自主表达
1.1.3 主要实验仪器
高速冷冻离心机（HemaTGL.16R）购于珠海黑马医学仪器有限公司
隔水式恒温培养箱（GRP1960）购于上海森信实验仪器有限公司
真空离心浓缩干燥机购于太仓市华利达实验设备有限公司
恒温混匀仪购于杭州龙杨科学仪器有限公司
超低温保存冰箱购于中国海尔集团
制冰机购于雪科电器有限公司
FA2004分析电子天平购于上海良平仪器仪表有限公司
Shimadzu Nexera超高压液相色谱仪（配有LC30AD泵、RF20Axs荧光检测器SIL30AC自动进样器、LCsolution工作站、HILIC高压柱）
MALDITOFMS（基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱仪）购于德国Bruker公司，配套含有数据处理软件Bruker Flexanalysis 3.3。
1.2 方法描述
1.2.1 蛋白提取物制备
1）蛋白浸提
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