茶多糖体外发酵及对肠道微生物的影响研究
茶叶是世界传统无酒精饮料，对人体有的很高的营养价值和保健作用。茶多糖是茶叶中的一种高分子化合物，茶多糖的突出的功效是降低血糖和血脂，从而防治糖尿病。茶多糖在抗凝、防血栓的构成，增强人体非免疫能力等方面均有功效，是一种很有价值的天然药物。茶多糖在生物体的代谢中起着重要作用、自然资源丰厚。科学合理地利用这一物质是一个值得重视的研究课题。因为多糖是自然界中含量最丰富的多聚物，而且大多数多糖对人是没有危害的。因此本论文对茶多糖的体外发酵以及对肠道微生物的影响进行了较为深入的研究。通过模拟大肠的消化体系得到发酵液，再利用16 s测序技术检测发酵后的肠道菌群的组成变化。本次实验旨在为茶多糖对人体的健康影响提供理论数据。
目录
摘要 4
关键词 4
Abstract. 4
Key words 4
1材料与方法 5
1.1材料 5
1.2方法 5
1.2.1多糖的提取 5
1.2.2模拟大肠消化 6
1.2.3样品分析 6
1.2.3.1对FBTPS化学性能的测定 6
1.2.3.2分子量分布测定 6
1.2.3.3单糖组成分析 6
1.2.3.4还原糖含量测定、残糖比例和pH值的变化 6
1.2.3.5短链脂肪酸的测定 6
1.2.3.6肠道菌群分析 6
1.2.4 统计分析 7
2结果与分析 7
2.1 FBTPS化学性质 7
2.2体外厌氧发酵 7
2.2.1体外厌氧发酵的监测 7
2.2.2 FBTPS对肠道菌群的影响 9
2.2.3 FBTPS对于生产短链脂肪酸的影响 10
3总结与讨论 12
致谢 12
参考文献 12
茶多糖的体外发酵及对肠道微生物的影响研究
引言
茶叶中含有很多的营养成分，有着许多重要用途。随着茶叶的研究与开发，人们对于茶叶的认识逐渐深刻，品茶鉴茶受到一定程度的追捧。由于人们对茶叶的需求日渐增加，茶叶方面的科学研究得到了极大的发展[1]。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
到目前为止，茶叶中的化学成分经检测出的化合物达到500 多种，在这些化合物中有机化合物有450 多种。与降血脂有关的主要化学成分是茶多糖、茶多酚、茶色素、皂苷类物质、氨基酸以及一些微量元素，研究表明这些成分都具有降血脂的功效[2]。
此外黑茶还具有减肥作用。通过分析黑茶水提物对营养性肥胖大鼠血脂水平、血清瘦素和神经肽蛋白含量、肝脏中与肥胖相关基因的表达水平，初步探讨茯砖茶减肥作用可能的机理。结果表明，黑茶水提物对人体具有一定的辅助降血脂功能，并能有效改善瘦素抵制作用，但对血清含量没有明显影响。通过以与脂质合成、氧化分解的基因为勒标，改善肥胖动物瘦素抵抗，并在不影响动物摄食量的基础上，减少机体对食物能量的摄取，以达到减少机体脂肪积累和减肥的效果[3]。
目前茶多糖的研究方面大致分为茶多糖的功效研究、茶多糖的提取、茶多糖的分离纯化工艺的研究等方面进行研究。在以前的报道中茶多糖组成差异被认为与所用茶叶原料和提取分离方法不同有关。但也可粗略看出，茶多糖的单糖组成是以半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖为主要成分，也含有木糖和甘露糖等单糖成分[4]。茶多糖的抗氧化活性随其茶叶的性质以及浓度有所变化。茶多糖的活性也分为高抗氧化活性和低抗氧化活性，对于活性的差异的原因也在研究中。至目前为止，茶已被报道有广泛的影响包括降低血压，减缓心跳，抗血凝血，抗肿瘤，抗艾滋病病毒，保护血相，增强人的非特异性免疫。茶多糖是一个主要负责的生物活性成分。所以研究茶多糖对人体的影响是很重要的。
本实验花费了大量时间摸索①体外模拟不同消化体系对FBTPS结构及构象变化影响及吸收、转运、代谢机制,运用体外模拟大肠消化模拟FBTPS在人体消化道中的消化过程；同时分析消化过程中FBTPS的相对分子质量、单糖组成（游离单糖）、还原糖含量的变化，确定FBTPS的可能的消化机制。
②厌氧发酵条件下不同组分FBTPS对肠道微生物菌群结构的影响研究利用体外厌氧粪样混合培养的方法对FBTPS各组分进行体外厌氧发酵，运用16s测序分析FBTPS各组分对肠道菌群结构和多样性的影响，并利用GC鉴定并定量分析FBTPS体外厌氧发酵过程中短链脂肪酸（SCFA）等代谢产物。
1材料与方法
1.1材料
茯砖茶是从湖南省购买。胃酶、胃蛋白酶、胰酶、PMP和标准单糖，包括核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖，这些是在Sigma公司购买的。海藻糖和鼠李糖是在阿拉丁化学试剂有限公司购买。胆盐是在上海Ryon生物科技有限公司购买。在这项工作中使用的所有其他化学试剂均为分析纯（A.R）并在国药集团化学试剂有限公司购买。
1.2方法
本实验将茯砖茶预处理后，进行多糖的提取、纯化。利用现有的实验方法模拟大肠消化后测定FBTPS的化学性能、样品分析、及肠道菌群分析。
1.2.1多糖的提取
根据我们以前的方法制备茯砖茶茶多糖[5]。干燥后的50g茶叶样品在10倍体积的85%乙醇中提取3次，温度为70℃，一次提取时间为8小时，以除去一些小分子，如单糖，低聚糖和色素。茶叶滤渣经空气干燥后，用蒸馏水（1:10，w / v）在70℃下提取3 h，提取三次。使用乙醇沉淀（95%，v/v），在4℃下放置过夜。将茶叶提取物离心（4000转，15分钟）后得到沉淀物，用蒸馏水将沉淀溶解。
使用Sevage法除去游离蛋白质，用氯仿和正丁醇去蛋白：配制4:1的氯仿和正丁醇的混合溶液，取样液加入比例为5：1的氯仿和正丁醇的混合溶液中，剧烈摇晃5分钟至混合液混合均匀。将混合液倒入分液漏斗中，静置、分层。打开开关，取下层液体倒入废液缸。反复重复以上操作10次，直至下层液体无白色絮状物的出现[6]。
目录
摘要 4
关键词 4
Abstract. 4
Key words 4
1材料与方法 5
1.1材料 5
1.2方法 5
1.2.1多糖的提取 5
1.2.2模拟大肠消化 6
1.2.3样品分析 6
1.2.3.1对FBTPS化学性能的测定 6
1.2.3.2分子量分布测定 6
1.2.3.3单糖组成分析 6
1.2.3.4还原糖含量测定、残糖比例和pH值的变化 6
1.2.3.5短链脂肪酸的测定 6
1.2.3.6肠道菌群分析 6
1.2.4 统计分析 7
2结果与分析 7
2.1 FBTPS化学性质 7
2.2体外厌氧发酵 7
2.2.1体外厌氧发酵的监测 7
2.2.2 FBTPS对肠道菌群的影响 9
2.2.3 FBTPS对于生产短链脂肪酸的影响 10
3总结与讨论 12
致谢 12
参考文献 12
茶多糖的体外发酵及对肠道微生物的影响研究
引言
茶叶中含有很多的营养成分，有着许多重要用途。随着茶叶的研究与开发，人们对于茶叶的认识逐渐深刻，品茶鉴茶受到一定程度的追捧。由于人们对茶叶的需求日渐增加，茶叶方面的科学研究得到了极大的发展[1]。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
到目前为止，茶叶中的化学成分经检测出的化合物达到500 多种，在这些化合物中有机化合物有450 多种。与降血脂有关的主要化学成分是茶多糖、茶多酚、茶色素、皂苷类物质、氨基酸以及一些微量元素，研究表明这些成分都具有降血脂的功效[2]。
此外黑茶还具有减肥作用。通过分析黑茶水提物对营养性肥胖大鼠血脂水平、血清瘦素和神经肽蛋白含量、肝脏中与肥胖相关基因的表达水平，初步探讨茯砖茶减肥作用可能的机理。结果表明，黑茶水提物对人体具有一定的辅助降血脂功能，并能有效改善瘦素抵制作用，但对血清含量没有明显影响。通过以与脂质合成、氧化分解的基因为勒标，改善肥胖动物瘦素抵抗，并在不影响动物摄食量的基础上，减少机体对食物能量的摄取，以达到减少机体脂肪积累和减肥的效果[3]。
目前茶多糖的研究方面大致分为茶多糖的功效研究、茶多糖的提取、茶多糖的分离纯化工艺的研究等方面进行研究。在以前的报道中茶多糖组成差异被认为与所用茶叶原料和提取分离方法不同有关。但也可粗略看出，茶多糖的单糖组成是以半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖为主要成分，也含有木糖和甘露糖等单糖成分[4]。茶多糖的抗氧化活性随其茶叶的性质以及浓度有所变化。茶多糖的活性也分为高抗氧化活性和低抗氧化活性，对于活性的差异的原因也在研究中。至目前为止，茶已被报道有广泛的影响包括降低血压，减缓心跳，抗血凝血，抗肿瘤，抗艾滋病病毒，保护血相，增强人的非特异性免疫。茶多糖是一个主要负责的生物活性成分。所以研究茶多糖对人体的影响是很重要的。
本实验花费了大量时间摸索①体外模拟不同消化体系对FBTPS结构及构象变化影响及吸收、转运、代谢机制,运用体外模拟大肠消化模拟FBTPS在人体消化道中的消化过程；同时分析消化过程中FBTPS的相对分子质量、单糖组成（游离单糖）、还原糖含量的变化，确定FBTPS的可能的消化机制。
②厌氧发酵条件下不同组分FBTPS对肠道微生物菌群结构的影响研究利用体外厌氧粪样混合培养的方法对FBTPS各组分进行体外厌氧发酵，运用16s测序分析FBTPS各组分对肠道菌群结构和多样性的影响，并利用GC鉴定并定量分析FBTPS体外厌氧发酵过程中短链脂肪酸（SCFA）等代谢产物。
1材料与方法
1.1材料
茯砖茶是从湖南省购买。胃酶、胃蛋白酶、胰酶、PMP和标准单糖，包括核糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、甘露糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖，这些是在Sigma公司购买的。海藻糖和鼠李糖是在阿拉丁化学试剂有限公司购买。胆盐是在上海Ryon生物科技有限公司购买。在这项工作中使用的所有其他化学试剂均为分析纯（A.R）并在国药集团化学试剂有限公司购买。
1.2方法
本实验将茯砖茶预处理后，进行多糖的提取、纯化。利用现有的实验方法模拟大肠消化后测定FBTPS的化学性能、样品分析、及肠道菌群分析。
1.2.1多糖的提取
根据我们以前的方法制备茯砖茶茶多糖[5]。干燥后的50g茶叶样品在10倍体积的85%乙醇中提取3次，温度为70℃，一次提取时间为8小时，以除去一些小分子，如单糖，低聚糖和色素。茶叶滤渣经空气干燥后，用蒸馏水（1:10，w / v）在70℃下提取3 h，提取三次。使用乙醇沉淀（95%，v/v），在4℃下放置过夜。将茶叶提取物离心（4000转，15分钟）后得到沉淀物，用蒸馏水将沉淀溶解。
使用Sevage法除去游离蛋白质，用氯仿和正丁醇去蛋白：配制4:1的氯仿和正丁醇的混合溶液，取样液加入比例为5：1的氯仿和正丁醇的混合溶液中，剧烈摇晃5分钟至混合液混合均匀。将混合液倒入分液漏斗中，静置、分层。打开开关，取下层液体倒入废液缸。反复重复以上操作10次，直至下层液体无白色絮状物的出现[6]。
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