crwn3蛋白调控拟南芥基因组dna甲基化模式的分子机理
DNA甲基化是表观遗传调控的重要标志。DNA甲基化通常是指胞嘧啶环上的甲基修饰，它广泛存在于原生生物到高等生物中，如黏菌、真菌、植物和动物[1, 2]。此外，高等生物中还存在着一个拮抗DNA甲基化的机制以维持基因组正常的甲基化状态，即DNA去甲基化[3]。与甲基化类似，DNA去甲基化也需要多种酶的参与，如已被确定的糖基化酶ROS1，DEMETER。拟南芥全基因组DNA甲基化水平分析结果表明，rip3-1/crwn3突变体中大量位点甲基化水平显著升高，并且与ros1-4的超甲基化位点部分重合，说明RIP3/CRWN3很可能参与了ROS1对这些位点的去甲基化的过程。为证实这一猜想我们采用酵母双杂交和双分子荧光互补技术来验证RIP3与ROS1之间是否存在互作，实验结果显示RIP3蛋白与ROS1蛋白间确实存在相互作用，RIP3/CRWN3是去甲基途径中的一个重要因子。
目录
摘 要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引 言 1
1 材料与方法 2
1.1材料 2
1.1.1菌种 2
1.1.2 植物 2
1.1.3常用培养基 2
1.1.4 主要试剂盒仪器设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 小量基因组DNA的提取—CTAB法 3
1.2.2 目的基因的扩增 3
1.2.3 表达载体的构建及鉴定 3
1.2.4 反转录PCR 4
1.2.5热激法转化大肠杆菌/农杆菌 4
1.2.6酵母双杂共转化验证 4
1.2.7双分子荧光互补分析 4
2 结果与分析 4
2.1 rip3突变体鉴定 4
2.1.1 Genotyping鉴定纯合体突变 4
2.1.2 RTPCR验证突变纯合体 5
2.2酵母双杂交验证RIP3与ROS1的互作 6
2.3双分子荧光互补验证RIP3与ROS1的互作 6
3 讨论 8
3.1纯合突变体鉴定及后续利用 8
3.2 ROS1与 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
RIP3蛋白互作分析 8
致谢 8
参考文献 9
CRWN3蛋白调控拟南芥基因组DNA甲基化模式的分子机理
目录
摘 要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引 言 1
1 材料与方法 2
1.1材料 2
1.1.1菌种 2
1.1.2 植物 2
1.1.3常用培养基 2
1.1.4 主要试剂盒仪器设备 3
1.2 方法 3
1.2.1 小量基因组DNA的提取—CTAB法 3
1.2.2 目的基因的扩增 3
1.2.3 表达载体的构建及鉴定 3
1.2.4 反转录PCR 4
1.2.5热激法转化大肠杆菌/农杆菌 4
1.2.6酵母双杂共转化验证 4
1.2.7双分子荧光互补分析 4
2 结果与分析 4
2.1 rip3突变体鉴定 4
2.1.1 Genotyping鉴定纯合体突变 4
2.1.2 RTPCR验证突变纯合体 5
2.2酵母双杂交验证RIP3与ROS1的互作 6
2.3双分子荧光互补验证RIP3与ROS1的互作 6
3 讨论 8
3.1纯合突变体鉴定及后续利用 8
3.2 ROS1与 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
RIP3蛋白互作分析 8
致谢 8
参考文献 9
CRWN3蛋白调控拟南芥基因组DNA甲基化模式的分子机理
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