鼎湖鳞伞菌多糖在体外消化模型中的消化作用研究
摘要：鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，是中国鳞伞属的特有种。近几年来的研究结果表明鼎湖鳞伞菌多糖具有多种活性。本研究采用液体发酵制备鼎湖鳞伞菌丝体，用水提、醇沉的方法获得胞内粗多糖(crude-PDP)，通过DEAE-凝胶阴离子交换柱进行初步的分离。采用体外模拟胃液、胃肠液模型与分析还原糖含量、分子质量变化，探讨了crude-PDP在体外模拟消化液中的变化。结果表明，crude-PDP的总糖含量为88.58%，含少量蛋白质和糖醛酸，还原糖含量为0.016%，分子量为2511.13kDa，由半乳糖、甘露糖、岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖6种单糖组成，物质的量比为9.91 :5.17 :13.77 : 3.65 : 9.05 : 52.9。crude-PDP在胃液和胃肠液中很少被消化，还原糖和分子量变化很小。由此我们可以认为，crude-PDP在两种消化液中耐消化。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1 材料4
1.2 仪器与设备 4
1.3 方法 5
1.3.1 鼎湖鳞伞菌胞内多糖的制备5
1.3.1.1 培养基5
1.3.1.2 培养方法5
1.3.1.3 粗多糖提取5
1.3.2 crudePDP的分离纯化5
1.3.2.1 DEAE凝胶阴离子交换柱初步分离5
1.3.2.2 苯酚硫酸法测定多糖含量6
1.3.3 crudePDP的体外消化6
1.3.2.1 模拟胃液对crudePDP的消化作用6
1.3.2.2 模拟胃肠液对crudePDP的消化作用6
2 结果与分析6
2.1 crudePDP的DEAE凝胶柱分离6
2.2 crudePDP的理化性质7
2.3 crudePDP的体外消化8
2.3.1 体外消化产物的还原糖含量8
2.3.2 crudePD
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
P消化产物分子量的变化9
3 讨论 10
致谢11
参考文献11
鼎湖鳞伞菌多糖在体外模型中的消化作用研究
引言
鼎湖鳞伞（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，位于广东鼎湖山附近[1]。该品种是中国特有[2]。在我国，食药用真菌已经有很长的历史，早在东汉末年，世界上第一本药物专著《神农本草经》中就有关于木耳、茯苓、猪苓等菌类药用功效的记载[3]。近年来，人们越来越倾向于在自然资源中寻找保健品及药物成分，对于食药用真菌的研究开发也越来越多。我国的食药用真菌资源丰富，具有很好的开发前途，但是由于研究程度和提取技术不高，食药用真菌开发的产品并没有得到广泛应用。
多糖是由几十、几百乃至数千个相同或不同的单糖及单糖衍生物以糖苷键相连形成的高聚物，在全球各种各样的生物中广泛存在，近年来有许多研究表明，多糖具有多种生理活性，其中包括抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血压、免疫调节等，并且在作用机体的同时毒副作用很小[46 ]。多糖的研究历史并不久远，研究程度也远不及蛋白质、核酸等物质。在CUMMINGS J H[7]等的研究中表明，大部分的多糖可以被肠道中的微生物分解代谢，产生气体和短链脂肪酸。在体外人粪样厌氧发酵模型中，多糖能有效促进有益微生物如双歧杆菌、乳酸菌等的生长，提高肠道SCFA的量，具有较好的肠道益生功能[810]。近年来，人们致力于研究多糖在人体当中的作用机制，提高多糖在药物等方面的应用程度。但是，人体是一个极复杂的体系，难以直接测定多糖在人体内的消化情况。近年来，利用体外消化模型来探究物质在消化液中的作用的方法得到广泛使用，该方法具有简单易行、成本低廉、重复性好等优点[1112]。
本实验室对于鼎湖麟伞已有较长时间的研究， GAN D，李作美等[1314]的研究结果表明，鼎湖鳞菌丝体多糖具有显著的抗肿瘤、抗氧化以及免疫调节等多种生物活性。除此之外，鼎湖鳞伞菌的胞外多糖在体外三种模拟消化液中也具有耐消化的特点[15]。然而，尚未见有关鼎湖鳞伞菌胞内多糖体外消化的研究报道。因此，本实验利用体外模拟胃液、胃肠液模型探讨鼎湖鳞伞菌胞内多糖消化情况，为进一步研究鼎湖鳞伞菌胞内多糖对肠道微生物的调节作用提供理论基础。
1 材料与方法
1．1 材料
鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）来源于广东省微生物研究所菌种保藏中心。
葡萄糖、蛋白胨、酵母膏等均为国产分析纯试剂；
甘露糖、半乳糖醛酸、阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、乙腈美国Sigma公司；土豆采购于苏果超市（江苏，南京）；岩藻糖阿拉丁试剂、鼠李糖（上海）有限公司；DEAE Sepharose Fast Flow美国GE Healthcare公司；透析袋（14000 Da）上海绿鸟科技发展有限公司；3,5二硝基水杨酸（3,5dinitrosalicylicacid，DNS） 国药集团化学试剂有限公司；胃脂肪酶、胰酶、胃蛋白酶北京索莱宝科技有限公司； 麦芽购于三九药店（江苏，南京）；
1．2 仪器与设备
HYGA型全温摇瓶柜
太仓市华美生化仪器厂
722S型可见分光光度计
Agilent 1100高效液相色谱仪
上海菁华科技仪器有限公司美国Agilent公司
DHG9140A型电热恒温鼓风干燥箱
上海一恒科技有限公司
层析柱(2.6×60 cm)
上海亚荣生化仪器有限公司
SWCJ1BU型洁净工作台
苏州安泰空气技术有限公司
DBS100A型电脑全自动部份收集器
Heidolph Laborota 4000 efficient真空旋转蒸发 仪
SHBIII型循环水式真空泵
Power dry LL3000型冷冻干燥机
上海沪西分析仪器厂
德国Heidolph公司
郑州长城科工贸有限公司
美国Heto公司
1．3 方法
1．3．1 鼎湖鳞伞菌胞内多糖的制备
1．3．1. 1 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：200 g土豆切成1 cm2左右的小块煮至软烂（2030 min），四层纱布过滤，加葡萄糖、琼脂各20 g，加热熔化并搅拌均匀，稍冷加水至1000 mL，分装试管，加塞、包扎，于121°C灭菌20 min，摆成斜面，冷凝备用。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1 材料4
1.2 仪器与设备 4
1.3 方法 5
1.3.1 鼎湖鳞伞菌胞内多糖的制备5
1.3.1.1 培养基5
1.3.1.2 培养方法5
1.3.1.3 粗多糖提取5
1.3.2 crudePDP的分离纯化5
1.3.2.1 DEAE凝胶阴离子交换柱初步分离5
1.3.2.2 苯酚硫酸法测定多糖含量6
1.3.3 crudePDP的体外消化6
1.3.2.1 模拟胃液对crudePDP的消化作用6
1.3.2.2 模拟胃肠液对crudePDP的消化作用6
2 结果与分析6
2.1 crudePDP的DEAE凝胶柱分离6
2.2 crudePDP的理化性质7
2.3 crudePDP的体外消化8
2.3.1 体外消化产物的还原糖含量8
2.3.2 crudePD
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
P消化产物分子量的变化9
3 讨论 10
致谢11
参考文献11
鼎湖鳞伞菌多糖在体外模型中的消化作用研究
引言
鼎湖鳞伞（Pholiota dinghuensis Bi）是一种大型真菌，位于广东鼎湖山附近[1]。该品种是中国特有[2]。在我国，食药用真菌已经有很长的历史，早在东汉末年，世界上第一本药物专著《神农本草经》中就有关于木耳、茯苓、猪苓等菌类药用功效的记载[3]。近年来，人们越来越倾向于在自然资源中寻找保健品及药物成分，对于食药用真菌的研究开发也越来越多。我国的食药用真菌资源丰富，具有很好的开发前途，但是由于研究程度和提取技术不高，食药用真菌开发的产品并没有得到广泛应用。
多糖是由几十、几百乃至数千个相同或不同的单糖及单糖衍生物以糖苷键相连形成的高聚物，在全球各种各样的生物中广泛存在，近年来有许多研究表明，多糖具有多种生理活性，其中包括抗肿瘤、抗氧化、降血糖、降血压、免疫调节等，并且在作用机体的同时毒副作用很小[46 ]。多糖的研究历史并不久远，研究程度也远不及蛋白质、核酸等物质。在CUMMINGS J H[7]等的研究中表明，大部分的多糖可以被肠道中的微生物分解代谢，产生气体和短链脂肪酸。在体外人粪样厌氧发酵模型中，多糖能有效促进有益微生物如双歧杆菌、乳酸菌等的生长，提高肠道SCFA的量，具有较好的肠道益生功能[810]。近年来，人们致力于研究多糖在人体当中的作用机制，提高多糖在药物等方面的应用程度。但是，人体是一个极复杂的体系，难以直接测定多糖在人体内的消化情况。近年来，利用体外消化模型来探究物质在消化液中的作用的方法得到广泛使用，该方法具有简单易行、成本低廉、重复性好等优点[1112]。
本实验室对于鼎湖麟伞已有较长时间的研究， GAN D，李作美等[1314]的研究结果表明，鼎湖鳞菌丝体多糖具有显著的抗肿瘤、抗氧化以及免疫调节等多种生物活性。除此之外，鼎湖鳞伞菌的胞外多糖在体外三种模拟消化液中也具有耐消化的特点[15]。然而，尚未见有关鼎湖鳞伞菌胞内多糖体外消化的研究报道。因此，本实验利用体外模拟胃液、胃肠液模型探讨鼎湖鳞伞菌胞内多糖消化情况，为进一步研究鼎湖鳞伞菌胞内多糖对肠道微生物的调节作用提供理论基础。
1 材料与方法
1．1 材料
鼎湖鳞伞菌（Pholiota dinghuensis Bi）来源于广东省微生物研究所菌种保藏中心。
葡萄糖、蛋白胨、酵母膏等均为国产分析纯试剂；
甘露糖、半乳糖醛酸、阿拉伯糖、核糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、乙腈美国Sigma公司；土豆采购于苏果超市（江苏，南京）；岩藻糖阿拉丁试剂、鼠李糖（上海）有限公司；DEAE Sepharose Fast Flow美国GE Healthcare公司；透析袋（14000 Da）上海绿鸟科技发展有限公司；3,5二硝基水杨酸（3,5dinitrosalicylicacid，DNS） 国药集团化学试剂有限公司；胃脂肪酶、胰酶、胃蛋白酶北京索莱宝科技有限公司； 麦芽购于三九药店（江苏，南京）；
1．2 仪器与设备
HYGA型全温摇瓶柜
太仓市华美生化仪器厂
722S型可见分光光度计
Agilent 1100高效液相色谱仪
上海菁华科技仪器有限公司美国Agilent公司
DHG9140A型电热恒温鼓风干燥箱
上海一恒科技有限公司
层析柱(2.6×60 cm)
上海亚荣生化仪器有限公司
SWCJ1BU型洁净工作台
苏州安泰空气技术有限公司
DBS100A型电脑全自动部份收集器
Heidolph Laborota 4000 efficient真空旋转蒸发 仪
SHBIII型循环水式真空泵
Power dry LL3000型冷冻干燥机
上海沪西分析仪器厂
德国Heidolph公司
郑州长城科工贸有限公司
美国Heto公司
1．3 方法
1．3．1 鼎湖鳞伞菌胞内多糖的制备
1．3．1. 1 培养基
马铃薯葡萄糖琼脂培养基：200 g土豆切成1 cm2左右的小块煮至软烂（2030 min），四层纱布过滤，加葡萄糖、琼脂各20 g，加热熔化并搅拌均匀，稍冷加水至1000 mL，分装试管，加塞、包扎，于121°C灭菌20 min，摆成斜面，冷凝备用。
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