养血柔肝汤对小鼠的镇静催眠作用(附件)
摘 要本实验基于“肝藏血”理论，来研究养血柔肝汤对小鼠的镇静催眠作用，最终为形成“养血柔肝法”治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的系统推广应用方案做实验基础。方法：将80只健康km小鼠随机分为6组，分别为阴性对照组，阳性对照组1，阳性对照组2和养血柔肝汤剂量组共6组，阴性对照组灌胃给予纯净水，阳性对照组1灌胃给药安定水溶液2.5mg/kg,阳性对照组2灌胃给药扶正化淤胶囊水溶液，养血柔肝汤剂量组给一定剂量的对应的养血柔肝汤溶液，所有小鼠均为每日灌胃给药一次，连续给药15天后，实验一：末次给药40分钟后皮下注射戊巴比妥钠50mg/kg，观察小鼠的睡眠潜伏期及睡眠持续时间。实验二：末次给药40分钟后，将小鼠放入小鼠自主活动记录仪，记录各组动物5分钟内的的自发活动次数。结果：实验一：皮下注射戊巴比妥钠后，安定组、中剂量、小剂量和大剂量组的睡眠持续时间明显高于阴性对照组，安定组的睡眠潜伏期明显低于阴性对照组，养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠有延长作用；实验二：安定组和大剂量组的自发活动次数明显低于阴性对照组，养血柔肝汤能够使小鼠的自发活动次数减少。结论：养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠有延长作用，养血柔肝汤能够减少小鼠的自发活动次数，养血柔肝汤对小鼠有一定的镇静催眠作用。目 录
1 引言
2 实验材料
2.1 实验动物 2
2.2 饲养条件 2
2.3 主要药品与试剂 2
2.4 仪器与设备 2
3 实验方法
3.1 制备养血柔肝汤 3
3.2 养血柔肝汤的急性毒性实验 3
4 实验项目
4.1 实验动物分组 6
4.2 实验药物的配置 6
4.2.1药物剂量的选择 6
4.2.2药物剂量的配制 6
4.3 动物给药 7
4.3.1养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠睡眠的延长作用 7
4.3.2养血柔肝汤对小鼠自发活动的影响 7
4.4 观察指标与检测 7
4.4.1睡眠潜伏期及睡眠时间的测定 7
4.4.2自发活动次数的测定 8
4.5 统计学方法 8
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> 4.2.2药物剂量的配制 6
4.3 动物给药 7
4.3.1养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠睡眠的延长作用 7
4.3.2养血柔肝汤对小鼠自发活动的影响 7
4.4 观察指标与检测 7
4.4.1睡眠潜伏期及睡眠时间的测定 7
4.4.2自发活动次数的测定 8
4.5 统计学方法 8
4.6 结果 8
4.6.1对小鼠戊巴比妥钠的延长作用 8
4.6.2对小鼠自发活动的影响 9
结论与讨论 11
参考文献 13
致谢 15
1 引言
肝纤维化是肝脏内纤维结缔组织异常增生，细胞外基质过度沉积的病理过程，是肝硬化的必经阶段，组织学上表现为肝细胞外基质成分异常增生和过度沉积[1]。是慢性肝病共有的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化发展恶化的重要中间环节，甚至原发性肝癌发展的中间环节。肝纤维化是继发与各种原因引起的肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应，是各种慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程[2]。
近年来随着对肝纤维化发生机制不断深入的研究发现，肝纤维化在未进入肝硬化之前是可能逆转的，而且代偿性肝硬化也是可逆的，为肝纤维化的治疗带来了希望[3]。因此逆转肝纤维化的形成和发展是防治慢性肝病和肝硬化的关键[4]。然而目前临床仍缺乏高效、无明显毒副反应的西药，难以满足临床对多证肝维化患者的治疗。因此中药近年已成为国内防止肝纤维化研究的热点[5]，国内许多学者致力于中医药肝纤维化研究并且取得了显著的疗效，目前多以活血化瘀、清热解毒、疏肝益气、温肾健脾等多种治则为准则为治则[6]，对肝纤维化进行辨证治疗，总结出了六大名方：中药复方861、八味抗纤方、强肝胶囊、扶正化淤胶囊、化肝纤冲剂、复方鳖甲软肝片[7]。因而成先生主任就以这些为基础并且再加上依据自己近40年临床对慢性病毒性肝炎肝纤维化的治疗经验，发现慢性病毒性肝炎肝纤维化患者多见于肝血虚损，瘀血阻络证型，从养血柔肝、软坚通络出发，独创出了“养血柔肝汤”治疗该病，临床疗效显著[8]。养血柔肝汤是由当归、熟地、川芎、白芍、阿胶、水蛭等14味药材组成，功效为养血柔肝，软坚通络。主治：慢性病毒性肝炎肝纤维化中医辨证属肝血虚损，瘀血阻络证，症见身困乏力，口干不欲饮，头晕目眩，四肢麻木，齿鼻衄血[9]，纳食减少或尚可，二便调，失眠多梦，舌质暗红苔薄白或薄黄或少苔，脉细弦或脉细弦涩。
本实验就以成东生先生的养血柔肝汤的方子为基础，以著名的扶正化淤胶囊和地西泮片为阳性药来研究治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的系统推广应用方案做实验基础。其中包括五个方面：养血柔肝汤的保肝作用、养血柔肝汤对肝纤维化的影响、养血柔肝汤对睡眠的改善作用、改善微循环的作用增强抗疲劳作用。但因时间等各方面的原因本实验就仅仅只做了养血柔肝汤对睡眠的改善作用这一个方面的研究。
2 实验材料
2.1 实验动物
急性毒性实验：取健康ICR小鼠40只，雌雄对半，体重1822g（购自西安交通大学医学院实验动物中心），许可证号：SCXK(陕)2012003.购入本实验室的动物适应性饲养一周后进行分组。
实验：健康KM小鼠80只，雌雄对半，体重1822g（购自西安交通大学实验动物中心），许可证号：SCXK(陕)2012003。购入本实验室的动物适应性饲养一周后进行分组。
2.2 饲养条件
室温（2224摄氏度）相对空气湿度为（50%60%），空调调温，自然光照，排气扇通风，每两天打扫鼠笼一次，用固体饲料饲养，自由饮水，光/暗时间为12/12小时。
2.3 主要药品与试剂
养血柔肝汤（其中14味药材均购于西安市北大街同仁堂药店，由陕西省中医药研究院中药研究所化学室李芳博士鉴定及提取）
地西泮片（以下称为安定）：由山东信谊制药有限公司生产；产品批号：140604；国药准字：H37023039
扶正化淤胶囊：由上海黄海制药有限责任公司生产；产品批号：140320；国药准字：Z20020073
戊巴比妥钠：由中国医药（集团）上海化学试剂公司生产；产品批号：F20020915
2.4 仪器与设备
自主活动仪：型号，YLS1A多功能小鼠自主活动仪；出厂日期，2004.03.03；出厂编号，000003505；生产厂家，山东省医学科学院设备站
电子天平：型号，YP1201N；准度级别，Ⅲ；生产厂家，上海精密科学仪器有限公司
烧杯，试管，玻璃棒，各种手术器械，灌胃针管，皮下注射针管
3 实验方法
3.1 制备养血柔肝汤
养血柔肝汤药味组成：当归、熟地、川芎、白芍、木瓜、酸枣仁、柴胡、五味子、鸡血藤、阿胶、鳖甲、水蛭等14味药材，其中阿胶备用；其余当归、熟地、川芎等加10倍量的水，提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，用滤液将阿胶烊化，滤液浓缩至相当于1g生药/ml。
3.2 养血柔肝汤的急性毒性实验
实验动物禁食过夜不禁水。
将40只小鼠分为四组，雌雄各半，分别为阴性对照组（雌）、阴性对照组（雄）、养血柔肝汤组（雌）、养血柔肝汤组（雄），每组10只。经预测养血柔肝汤的最大灌胃浓度为110%（可以抽动试管），灌胃
1 引言
2 实验材料
2.1 实验动物 2
2.2 饲养条件 2
2.3 主要药品与试剂 2
2.4 仪器与设备 2
3 实验方法
3.1 制备养血柔肝汤 3
3.2 养血柔肝汤的急性毒性实验 3
4 实验项目
4.1 实验动物分组 6
4.2 实验药物的配置 6
4.2.1药物剂量的选择 6
4.2.2药物剂量的配制 6
4.3 动物给药 7
4.3.1养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠睡眠的延长作用 7
4.3.2养血柔肝汤对小鼠自发活动的影响 7
4.4 观察指标与检测 7
4.4.1睡眠潜伏期及睡眠时间的测定 7
4.4.2自发活动次数的测定 8
4.5 统计学方法 8
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
> 4.2.2药物剂量的配制 6
4.3 动物给药 7
4.3.1养血柔肝汤对小鼠戊巴比妥钠睡眠的延长作用 7
4.3.2养血柔肝汤对小鼠自发活动的影响 7
4.4 观察指标与检测 7
4.4.1睡眠潜伏期及睡眠时间的测定 7
4.4.2自发活动次数的测定 8
4.5 统计学方法 8
4.6 结果 8
4.6.1对小鼠戊巴比妥钠的延长作用 8
4.6.2对小鼠自发活动的影响 9
结论与讨论 11
参考文献 13
致谢 15
1 引言
肝纤维化是肝脏内纤维结缔组织异常增生，细胞外基质过度沉积的病理过程，是肝硬化的必经阶段，组织学上表现为肝细胞外基质成分异常增生和过度沉积[1]。是慢性肝病共有的病理特征，也是慢性肝炎、肝硬化发展恶化的重要中间环节，甚至原发性肝癌发展的中间环节。肝纤维化是继发与各种原因引起的肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应，是各种慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程[2]。
近年来随着对肝纤维化发生机制不断深入的研究发现，肝纤维化在未进入肝硬化之前是可能逆转的，而且代偿性肝硬化也是可逆的，为肝纤维化的治疗带来了希望[3]。因此逆转肝纤维化的形成和发展是防治慢性肝病和肝硬化的关键[4]。然而目前临床仍缺乏高效、无明显毒副反应的西药，难以满足临床对多证肝维化患者的治疗。因此中药近年已成为国内防止肝纤维化研究的热点[5]，国内许多学者致力于中医药肝纤维化研究并且取得了显著的疗效，目前多以活血化瘀、清热解毒、疏肝益气、温肾健脾等多种治则为准则为治则[6]，对肝纤维化进行辨证治疗，总结出了六大名方：中药复方861、八味抗纤方、强肝胶囊、扶正化淤胶囊、化肝纤冲剂、复方鳖甲软肝片[7]。因而成先生主任就以这些为基础并且再加上依据自己近40年临床对慢性病毒性肝炎肝纤维化的治疗经验，发现慢性病毒性肝炎肝纤维化患者多见于肝血虚损，瘀血阻络证型，从养血柔肝、软坚通络出发，独创出了“养血柔肝汤”治疗该病，临床疗效显著[8]。养血柔肝汤是由当归、熟地、川芎、白芍、阿胶、水蛭等14味药材组成，功效为养血柔肝，软坚通络。主治：慢性病毒性肝炎肝纤维化中医辨证属肝血虚损，瘀血阻络证，症见身困乏力，口干不欲饮，头晕目眩，四肢麻木，齿鼻衄血[9]，纳食减少或尚可，二便调，失眠多梦，舌质暗红苔薄白或薄黄或少苔，脉细弦或脉细弦涩。
本实验就以成东生先生的养血柔肝汤的方子为基础，以著名的扶正化淤胶囊和地西泮片为阳性药来研究治疗慢性病毒性肝炎肝纤维化的系统推广应用方案做实验基础。其中包括五个方面：养血柔肝汤的保肝作用、养血柔肝汤对肝纤维化的影响、养血柔肝汤对睡眠的改善作用、改善微循环的作用增强抗疲劳作用。但因时间等各方面的原因本实验就仅仅只做了养血柔肝汤对睡眠的改善作用这一个方面的研究。
2 实验材料
2.1 实验动物
急性毒性实验：取健康ICR小鼠40只，雌雄对半，体重1822g（购自西安交通大学医学院实验动物中心），许可证号：SCXK(陕)2012003.购入本实验室的动物适应性饲养一周后进行分组。
实验：健康KM小鼠80只，雌雄对半，体重1822g（购自西安交通大学实验动物中心），许可证号：SCXK(陕)2012003。购入本实验室的动物适应性饲养一周后进行分组。
2.2 饲养条件
室温（2224摄氏度）相对空气湿度为（50%60%），空调调温，自然光照，排气扇通风，每两天打扫鼠笼一次，用固体饲料饲养，自由饮水，光/暗时间为12/12小时。
2.3 主要药品与试剂
养血柔肝汤（其中14味药材均购于西安市北大街同仁堂药店，由陕西省中医药研究院中药研究所化学室李芳博士鉴定及提取）
地西泮片（以下称为安定）：由山东信谊制药有限公司生产；产品批号：140604；国药准字：H37023039
扶正化淤胶囊：由上海黄海制药有限责任公司生产；产品批号：140320；国药准字：Z20020073
戊巴比妥钠：由中国医药（集团）上海化学试剂公司生产；产品批号：F20020915
2.4 仪器与设备
自主活动仪：型号，YLS1A多功能小鼠自主活动仪；出厂日期，2004.03.03；出厂编号，000003505；生产厂家，山东省医学科学院设备站
电子天平：型号，YP1201N；准度级别，Ⅲ；生产厂家，上海精密科学仪器有限公司
烧杯，试管，玻璃棒，各种手术器械，灌胃针管，皮下注射针管
3 实验方法
3.1 制备养血柔肝汤
养血柔肝汤药味组成：当归、熟地、川芎、白芍、木瓜、酸枣仁、柴胡、五味子、鸡血藤、阿胶、鳖甲、水蛭等14味药材，其中阿胶备用；其余当归、熟地、川芎等加10倍量的水，提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，用滤液将阿胶烊化，滤液浓缩至相当于1g生药/ml。
3.2 养血柔肝汤的急性毒性实验
实验动物禁食过夜不禁水。
将40只小鼠分为四组，雌雄各半，分别为阴性对照组（雌）、阴性对照组（雄）、养血柔肝汤组（雌）、养血柔肝汤组（雄），每组10只。经预测养血柔肝汤的最大灌胃浓度为110%（可以抽动试管），灌胃
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