南通小方柿组织快繁技术研究
本研究以涩柿（Diospyros kaki Linn）品种南通小方柿（Diospyros kaki Linn. cv.Nantongxiaofangshi）为材料，以当年生枝条上的休眠芽为外植体较系统的研究建立了该品种的外植体初代、继代增殖培养等技术体系，以期为小方柿的生理生化及遗传转化方面的研究等奠定技术基础，同时也也为我国唯一的矮生型柿品种-南通小方柿的快速繁育和生产推广提供了技术途径。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 试验材料2
2 试验方法 2
2.1 外植体的接种前处理2
2.2不同基本培养基对南通小方柿组培苗初代的影响 2
2.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响2
2.4 不同浓度赤霉素对南通小方柿继代增殖影响 3
3 培养条件3
4 数据分析方法3
5结果与分析3
5.1不同消毒方法对南通小方柿初代影响 3
5.2不同基本培养基对南通小方柿休眠芽初代影响 3
5.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响 4
5.4不同浓度GA3(赤霉素)对南通小方柿继代增殖影响 5
6．研究结果6 7．讨论 6
致谢8
参考文献8
南通小方柿组织快繁技术研究
引言
引言:柿树通常为高79米的落叶乔木。传统上主要采用君迁子、油柿、野柿等优良砧木进行嫁接繁殖[1]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[2]。1982年江苏省进行果树资源调查时，在南通市发现了具有矮生性状的地方品种 南通小方柿（Diosp rus kaki Linn. cv.Nantongxiaofangshi）(当地俗称小方柿、四丫红)。该品种的树高、冠径、新梢长度、粗长比以及节间长度均显著地小于同龄大方柿和朱砂红，表现出明显的矮生树结构特性[3]。南通小方柿树体矮小，早果性好，且丰产稳定，果实色艳、无核、质优，能自然脱涩，是矮化密植栽培的优良 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
柿品种[4]。对我国今后柿树的栽培管理、育种、果品生产及其发展产生深远的影响[5]。
本研究针对柿树传统的繁殖方法是砧木嫁接移栽成活率和嫁接后存活率都较其他果树低，在前人研究的基础上，建立了矮生型树品种南通小方柿的组培快繁技术。以休眠芽为外植体的初代培养和继代增殖培养的基本规律，筛选出适合南通小方柿组培苗生长的初代、继代培养基基本解决了南通小方柿初代褐化严重的问题，初代成活率达到80%。通过添加适量赤霉素以及筛选特定的基础培养基，解决了南通小方柿继代增殖问题。促进了矮生型柿品种南通小方柿的快速繁育和生产推广工作。南通小方柿快繁技术的研究，为快速获得大量苗木提供可能，促进了矮生型柿树种产业在我国的推广和快速发展。同时，小方柿组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究其矮化机理性状等奠定了基础。
1 试验材料
1．1 南通小方柿一年生枝条于2012年11月取自江苏省东台市农业示范园内，树龄约为3年。
1．2在0.05mg/LNAA+(1/2N)MS+1mg/LZT的培养基上继代了35代的南通小方柿组培苗作为继代增殖培养试验的的材料。
2 试验方法
2．1外植体的灭菌及接种前处理
南通小方柿休眠芽从枝条上切下剥去芽的外部23片鳞片，在肥皂水中洗涤芽23遍，流水冲洗2小时减轻外植体表面微生物污染程度。
用75%酒精表面灭菌30s， 分别按以下三种方法进行后续消毒：（1）在含有10%H2O2溶液中分别浸泡10min、20min，浸泡过程中要不时摇动，使双氧水分解产生大量氧气起到杀菌作用。最后用无菌水冲洗35次;（2）在含有0.1%吐温80的5%NaClO(安替福民)溶液中浸泡10min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗35次;(3) 在含有0.1%吐温80的0.1%HgCl:(升汞)溶液中浸泡10min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗35次。将经过不同方法消毒的休眠芽接种于含有500mg/LPVP(聚乙烯毗咯烷酮)不添加生长素和细胞分裂素的基本培养基上，每个处理60瓶，2周后统计成活率。
2.2不同基本培养基对南通小方柿组培苗初代的影响
萌动生长的休眠芽分别接种在含有ZT1.0mg/L+NAA0.05mg/L的MS、1/2MS、MS(1/2N)培养基上培养2代后观察统计组培苗的生长情况及植株高度，比较基本培养基对南通小方柿组培苗初代生长的影响。
2.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响
基本培养基、激素的种类及浓度对休眠芽萌动生长的影响，采用L9（34）正交试验设计，其因素水平如表1。
表1 基本培养基、激素的种类及浓度的因素水平
Table 1 The basic culture medium, the factors of kinds and concentrations of hormone levels
水平
因素
基本培养基
ZT(mg/L)
NAA(mg/L)
1
(1/2N)MS
1
0.05
2
1/2MS
2
0.1
3
MS
4
0.3
2.4不同浓度赤霉素对南通小方柿继代增殖影响
将组培苗接种到含有0.0，0.05，0.1GA3的（1/2N）MS+ZT1.0mg/L+0.1mg/LIAA的培养基中生长2代后，统计组培苗的生长情况，比较赤霉素在组培苗生长中的作用。
3 培养条件
试验所用培养基中的蔗糖浓度为3%，琼脂浓度均为0.6%，PVP(聚乙烯毗咯烷酮)500mg/L，pH值为5.75.8；培养基经121℃(0.1050.12MPa)高温湿热灭菌15min，组培苗培养温度均为25℃左右，光照时间16h/d，在光照强度为15002000lx的白炽灯下培养。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 试验材料2
2 试验方法 2
2.1 外植体的接种前处理2
2.2不同基本培养基对南通小方柿组培苗初代的影响 2
2.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响2
2.4 不同浓度赤霉素对南通小方柿继代增殖影响 3
3 培养条件3
4 数据分析方法3
5结果与分析3
5.1不同消毒方法对南通小方柿初代影响 3
5.2不同基本培养基对南通小方柿休眠芽初代影响 3
5.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响 4
5.4不同浓度GA3(赤霉素)对南通小方柿继代增殖影响 5
6．研究结果6 7．讨论 6
致谢8
参考文献8
南通小方柿组织快繁技术研究
引言
引言:柿树通常为高79米的落叶乔木。传统上主要采用君迁子、油柿、野柿等优良砧木进行嫁接繁殖[1]。但是常规繁育方法周期长，成活率低，嫁接良种树形高大、结果较晚、为管理带来不便[2]。1982年江苏省进行果树资源调查时，在南通市发现了具有矮生性状的地方品种 南通小方柿（Diosp rus kaki Linn. cv.Nantongxiaofangshi）(当地俗称小方柿、四丫红)。该品种的树高、冠径、新梢长度、粗长比以及节间长度均显著地小于同龄大方柿和朱砂红，表现出明显的矮生树结构特性[3]。南通小方柿树体矮小，早果性好，且丰产稳定，果实色艳、无核、质优，能自然脱涩，是矮化密植栽培的优良 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
柿品种[4]。对我国今后柿树的栽培管理、育种、果品生产及其发展产生深远的影响[5]。
本研究针对柿树传统的繁殖方法是砧木嫁接移栽成活率和嫁接后存活率都较其他果树低，在前人研究的基础上，建立了矮生型树品种南通小方柿的组培快繁技术。以休眠芽为外植体的初代培养和继代增殖培养的基本规律，筛选出适合南通小方柿组培苗生长的初代、继代培养基基本解决了南通小方柿初代褐化严重的问题，初代成活率达到80%。通过添加适量赤霉素以及筛选特定的基础培养基，解决了南通小方柿继代增殖问题。促进了矮生型柿品种南通小方柿的快速繁育和生产推广工作。南通小方柿快繁技术的研究，为快速获得大量苗木提供可能，促进了矮生型柿树种产业在我国的推广和快速发展。同时，小方柿组培苗再生体系的建立为生理研究及分子方面研究其矮化机理性状等奠定了基础。
1 试验材料
1．1 南通小方柿一年生枝条于2012年11月取自江苏省东台市农业示范园内，树龄约为3年。
1．2在0.05mg/LNAA+(1/2N)MS+1mg/LZT的培养基上继代了35代的南通小方柿组培苗作为继代增殖培养试验的的材料。
2 试验方法
2．1外植体的灭菌及接种前处理
南通小方柿休眠芽从枝条上切下剥去芽的外部23片鳞片，在肥皂水中洗涤芽23遍，流水冲洗2小时减轻外植体表面微生物污染程度。
用75%酒精表面灭菌30s， 分别按以下三种方法进行后续消毒：（1）在含有10%H2O2溶液中分别浸泡10min、20min，浸泡过程中要不时摇动，使双氧水分解产生大量氧气起到杀菌作用。最后用无菌水冲洗35次;（2）在含有0.1%吐温80的5%NaClO(安替福民)溶液中浸泡10min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗35次;(3) 在含有0.1%吐温80的0.1%HgCl:(升汞)溶液中浸泡10min，浸泡过程中要不时摇动，最后用无菌水冲洗35次。将经过不同方法消毒的休眠芽接种于含有500mg/LPVP(聚乙烯毗咯烷酮)不添加生长素和细胞分裂素的基本培养基上，每个处理60瓶，2周后统计成活率。
2.2不同基本培养基对南通小方柿组培苗初代的影响
萌动生长的休眠芽分别接种在含有ZT1.0mg/L+NAA0.05mg/L的MS、1/2MS、MS(1/2N)培养基上培养2代后观察统计组培苗的生长情况及植株高度，比较基本培养基对南通小方柿组培苗初代生长的影响。
2.3基本培养基、 ZT和NAA组合对休眠芽初代培养的影响
基本培养基、激素的种类及浓度对休眠芽萌动生长的影响，采用L9（34）正交试验设计，其因素水平如表1。
表1 基本培养基、激素的种类及浓度的因素水平
Table 1 The basic culture medium, the factors of kinds and concentrations of hormone levels
水平
因素
基本培养基
ZT(mg/L)
NAA(mg/L)
1
(1/2N)MS
1
0.05
2
1/2MS
2
0.1
3
MS
4
0.3
2.4不同浓度赤霉素对南通小方柿继代增殖影响
将组培苗接种到含有0.0，0.05，0.1GA3的（1/2N）MS+ZT1.0mg/L+0.1mg/LIAA的培养基中生长2代后，统计组培苗的生长情况，比较赤霉素在组培苗生长中的作用。
3 培养条件
试验所用培养基中的蔗糖浓度为3%，琼脂浓度均为0.6%，PVP(聚乙烯毗咯烷酮)500mg/L，pH值为5.75.8；培养基经121℃(0.1050.12MPa)高温湿热灭菌15min，组培苗培养温度均为25℃左右，光照时间16h/d，在光照强度为15002000lx的白炽灯下培养。
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