动物肉类中嘌呤类物质的分布规律研究(附件)
摘 要本实验比较动物肉类中嘌呤类物质的水解条件，通过从水解温度、高氯酸的浓度及用量选择最优的提取条件，并对色谱条件的检测波长、流动相的浓度及pH进行优化。运用最优水解条件及色谱条件对各种动物肉类及内脏进行嘌呤检测。结果表明，水解条件为3mL的10% 高氯酸溶液100 ℃水浴水解60分钟，此时嘌呤含量都较高，能检测并将四种嘌呤分离开来。此实验使用的HPLC检测每种嘌呤标准液在0.1~300mg/L的溶液浓度范围内的线性关系，相关系数都≥0.999。本实验确立的猪肉中嘌呤含量的测定其色谱条件为Agilent XDB-C18色谱柱；KH2PO4缓冲溶液的流动相为（7.0×10-3mol/L ，pH=4.0）；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL /min；进样量为20 μL；DAD检测波长为254nm。这四个嘌呤在18分钟内能较好的分离开来，动物肉类中嘌呤的分布规律为动物肉中的次黄嘌呤最高，黄嘌呤最低，肝脏中的鸟嘌呤和腺嘌呤高，心中腺嘌呤和鸟嘌呤含量相当。关键词 嘌呤，动物肉类，水解，高效液相色谱法
目录
1 引言 1
2 实验材料 2
2.1 实验仪器 2
2.2 实验试剂与材料 3
3 试验方法 3
3.1 样品采购与处理 3
3.2 样品水解条件的建立 3
3.3 色谱仪检测 4
3.4 色谱条件的选择 5
3.5 精密度实验 6
3.6 各种样品的检测 6
4结果与分析 6
4.1 线性实验 6
4.2 样品水解条件的建立 7
4.3 色谱条件的选择 9
4.4 精密度实验 14
4.5 不同动物肉类及其内脏的嘌呤含量分布分析 15
结 论 18
致 谢 19
参 考 文 献 20
1 引言
嘌呤是一类生物碱，它是嘧啶环和咪唑环组成，两性物质，易溶水和苯。人们身体里面的嘌呤由腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤和黄嘌呤构成，次黄嘌呤和黄嘌呤为腺嘌呤和鸟嘌呤中心产物[1]。
我们常常吃的动物肉类中猪肉、鸡肉和肝脏等含有许多嘌呤[2]。我们通过 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
饮食将这些嘌呤摄入体内里，但是它们几乎很少被人利用，肉类是主要的饮食必需品，所以，动物肉类中嘌呤含量一直是检测的重点。如果长时间摄取许多嘌呤含量高的食物，再和其余的诱导原因一起，就会致使人体内的尿酸太高，最后引起痛风[34]。
痛风已经是严重影响人类健康的常见疾病和多发病[5]，医学上除了药物治疗外，也同时用通过饮食来达到控制此疾病。痛风病人除了选用药物医治，也选用饮食的方法限定嘌呤的摄取来缩减尿酸的形成。某些专家认为痛风病人应该能按照病情来确定需要的嘌呤量，然后调节饮食，再根据饮食来确定食物中所需要的嘌呤含量[6]。对于痛风病人来说，知道每种食品里的嘌呤量，还有肉类中每种组织的嘌呤含量，就能够更加科学地选取所需要的食物[7]。
如今，食品的嘌呤根据总嘌呤的含量所测定，动物肉类为中嘌呤含量食物，肝脏、心脏等为高嘌呤食物。也有专家认为即使嘌呤类物质的组织类似，但对尿酸的贡献就有差别，研究[810]显示食物中腺嘌呤和次黄嘌呤的总含量会增加血尿酸的浓度，但鸟嘌呤和黄嘌呤的含量却不会导致浓度增高。很多食品里都含有嘌呤，还包含代谢产物尿酸，而尿酸进到机体里，就可能会引起血尿酸浓度的快速升高[11]。
而现在，国内外却没有一种统一的食品嘌呤含量的检测方法[1213]。因为嘌呤一般是以嘌呤碱基的方式而存在，所以应该先水解。当前检测样品的前处理方法主要有酸萃取和溶剂萃取，而提取嘌呤有酸水解、溶剂萃取和超声提取，最常用的为酸水解法[14]。
而嘌呤的测定包括GS[15]、HPLC[16和HPCE][17]。HPLC是使用频率最高的，本文对动物肉类及其内脏中四个嘌呤物质进行了定量检测，这对检测并治疗痛风患者有很大的帮助。四种嘌呤分别为腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤，且其结构式如下[18]。
腺嘌呤 鸟嘌呤
黄嘌呤 次黄嘌呤
本文将运用HPLC来确定动物肉类中嘌呤类物质，将样品中嘌呤类物质用高氯酸水解后，用高效液相色谱仪进行分离检测。对水解条件（水解温度、高氯酸的浓度和用量）和色谱条件（流动相的浓度、pH、检测的波长）进行选择。对常见动物肉类（猪肉、鸡肉、鸭肉及其心和肝脏）中的含量进行测定，对检测嘌呤有很大的用处[19]。
2 实验材料
2.1 实验仪器
仪器
型号
厂家
高效液相色谱仪
Agilent 1100
上海标本模型厂
台式离心机
TGL16G
盐城双圈实验器材有限公司
超声波清洗器
KQ5200B
盐城双圈实验器材有限公司
pH计
PHS3C
盐城双圈实验器材有限公司
电子分析天平
0.0001 g
盐城鼎和信实验器材有限公司
恒温水浴锅
Yamato BW 200
盐城双圈实验器材有限公司
高速组织捣碎机
DS1
盐城鼎和信实验器材有限公司
2.2 实验试剂与材料
四种嘌呤的纯度均≥99%；HClO4、H3PO4为优级纯；KOH、NaOH、KH2PO4为分析纯；实验用水都是超纯水
一次性无菌注射器(5 mL)，一次性水系针头滤器(0.45 μm)，0.45 μm水膜，10 mL螺口圆底离心管，1.5 mL EP管
0.2 g/L标准溶液：准确称取四种嘌呤标准品0.02 g，加入0.1 mol/L 10 mL的氢氧化钠溶液，将其溶解，用蒸馏水定容至100 mL，4 ℃保存。
吸取上述溶液，再用超纯水稀释，配制0.1、1、1.5、5、15、50、150、450 mg/L 的嘌呤混合标准液，保存于4 ℃冰箱中，使用前用0.45 μm的无机膜过滤。
3 试验方法
3.1 样品采购与处理
3.1.1 样品采购
目录
1 引言 1
2 实验材料 2
2.1 实验仪器 2
2.2 实验试剂与材料 3
3 试验方法 3
3.1 样品采购与处理 3
3.2 样品水解条件的建立 3
3.3 色谱仪检测 4
3.4 色谱条件的选择 5
3.5 精密度实验 6
3.6 各种样品的检测 6
4结果与分析 6
4.1 线性实验 6
4.2 样品水解条件的建立 7
4.3 色谱条件的选择 9
4.4 精密度实验 14
4.5 不同动物肉类及其内脏的嘌呤含量分布分析 15
结 论 18
致 谢 19
参 考 文 献 20
1 引言
嘌呤是一类生物碱，它是嘧啶环和咪唑环组成，两性物质，易溶水和苯。人们身体里面的嘌呤由腺嘌呤、鸟嘌呤、次黄嘌呤和黄嘌呤构成，次黄嘌呤和黄嘌呤为腺嘌呤和鸟嘌呤中心产物[1]。
我们常常吃的动物肉类中猪肉、鸡肉和肝脏等含有许多嘌呤[2]。我们通过 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
饮食将这些嘌呤摄入体内里，但是它们几乎很少被人利用，肉类是主要的饮食必需品，所以，动物肉类中嘌呤含量一直是检测的重点。如果长时间摄取许多嘌呤含量高的食物，再和其余的诱导原因一起，就会致使人体内的尿酸太高，最后引起痛风[34]。
痛风已经是严重影响人类健康的常见疾病和多发病[5]，医学上除了药物治疗外，也同时用通过饮食来达到控制此疾病。痛风病人除了选用药物医治，也选用饮食的方法限定嘌呤的摄取来缩减尿酸的形成。某些专家认为痛风病人应该能按照病情来确定需要的嘌呤量，然后调节饮食，再根据饮食来确定食物中所需要的嘌呤含量[6]。对于痛风病人来说，知道每种食品里的嘌呤量，还有肉类中每种组织的嘌呤含量，就能够更加科学地选取所需要的食物[7]。
如今，食品的嘌呤根据总嘌呤的含量所测定，动物肉类为中嘌呤含量食物，肝脏、心脏等为高嘌呤食物。也有专家认为即使嘌呤类物质的组织类似，但对尿酸的贡献就有差别，研究[810]显示食物中腺嘌呤和次黄嘌呤的总含量会增加血尿酸的浓度，但鸟嘌呤和黄嘌呤的含量却不会导致浓度增高。很多食品里都含有嘌呤，还包含代谢产物尿酸，而尿酸进到机体里，就可能会引起血尿酸浓度的快速升高[11]。
而现在，国内外却没有一种统一的食品嘌呤含量的检测方法[1213]。因为嘌呤一般是以嘌呤碱基的方式而存在，所以应该先水解。当前检测样品的前处理方法主要有酸萃取和溶剂萃取，而提取嘌呤有酸水解、溶剂萃取和超声提取，最常用的为酸水解法[14]。
而嘌呤的测定包括GS[15]、HPLC[16和HPCE][17]。HPLC是使用频率最高的，本文对动物肉类及其内脏中四个嘌呤物质进行了定量检测，这对检测并治疗痛风患者有很大的帮助。四种嘌呤分别为腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤，且其结构式如下[18]。
腺嘌呤 鸟嘌呤
黄嘌呤 次黄嘌呤
本文将运用HPLC来确定动物肉类中嘌呤类物质，将样品中嘌呤类物质用高氯酸水解后，用高效液相色谱仪进行分离检测。对水解条件（水解温度、高氯酸的浓度和用量）和色谱条件（流动相的浓度、pH、检测的波长）进行选择。对常见动物肉类（猪肉、鸡肉、鸭肉及其心和肝脏）中的含量进行测定，对检测嘌呤有很大的用处[19]。
2 实验材料
2.1 实验仪器
仪器
型号
厂家
高效液相色谱仪
Agilent 1100
上海标本模型厂
台式离心机
TGL16G
盐城双圈实验器材有限公司
超声波清洗器
KQ5200B
盐城双圈实验器材有限公司
pH计
PHS3C
盐城双圈实验器材有限公司
电子分析天平
0.0001 g
盐城鼎和信实验器材有限公司
恒温水浴锅
Yamato BW 200
盐城双圈实验器材有限公司
高速组织捣碎机
DS1
盐城鼎和信实验器材有限公司
2.2 实验试剂与材料
四种嘌呤的纯度均≥99%；HClO4、H3PO4为优级纯；KOH、NaOH、KH2PO4为分析纯；实验用水都是超纯水
一次性无菌注射器(5 mL)，一次性水系针头滤器(0.45 μm)，0.45 μm水膜，10 mL螺口圆底离心管，1.5 mL EP管
0.2 g/L标准溶液：准确称取四种嘌呤标准品0.02 g，加入0.1 mol/L 10 mL的氢氧化钠溶液，将其溶解，用蒸馏水定容至100 mL，4 ℃保存。
吸取上述溶液，再用超纯水稀释，配制0.1、1、1.5、5、15、50、150、450 mg/L 的嘌呤混合标准液，保存于4 ℃冰箱中，使用前用0.45 μm的无机膜过滤。
3 试验方法
3.1 样品采购与处理
3.1.1 样品采购
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