添加不同碳源对瑞士乳杆菌mb21产胞外多糖的影响
摘要：本文旨在考察添加额外碳源（甘露糖、木糖醇、鼠李糖、菊糖、果糖、壳聚糖）对乳酸菌胞外多糖 (Exopolysaccharide,EPS)的性质结构的影响。实验采用三氯乙酸法去除上清液中的蛋白质，经离心、醇沉得到粗多糖。粗多糖利用DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化获得单一组分的中性多糖；通过高效液相色谱法测定多糖分子量和纯度；利用紫外全波长扫描考察是否含有核酸及蛋白质；利用气相色谱法测单糖组成。测得的多糖分子量在1.5×104-1.0×105Da；多糖不含蛋白质及核酸；单糖组成为葡萄糖；多糖回收率为60.08%。添加不同碳源后多糖的单糖组成和分子量大小没有变化，但是分子量分布有差异。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.1.1 菌种 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 设备 2
1.2 实验方法 2
1.2.1 菌种活化 2
1.2.2 乳酸菌胞外多糖的制备 2
1.2.3 粗多糖的提取 3
1.2.4 DADECellulose52阴离子交换柱分离纯化 3
1.2.5 紫外光谱（UV）分析4
1.2.6 多糖组分的纯度鉴定和分子量测定 4
1.2.7 单糖组成分析 4
2 结果与分析 5
2.1 粗多糖的得率和提取率 5
2.2 DADECellulose52阴离子交换柱分离纯化 5
2.3 紫外光谱（UV）分析 6
2.4 多糖组分的纯度鉴定和分子量测定6
2.5单糖组成分析 8
3 讨论10
致谢11
参考文献11
添加不同碳源对瑞士乳杆菌MB21产胞外多糖的影响
引言
引言
多糖是构成人类生命机体的四大生命物质之一，是维持机体正常生理代谢活动的重要物质[1
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
,2]。多糖来源广泛，主要存在于植物、动物和微生物中，所以多糖又可以分为植物多糖、动物多糖和微生物多糖[3,4]。多糖可以增强机体免疫功能，能够调节控制细胞的生长、分化、代谢和衰老的过程，广泛参与机体免疫调节、细菌感染、细胞癌变、细胞识别等一系列的生理活动，现代多糖研究这一学科已经成为目前生物科学领域中最为活跃的项目之一，是食品功能因子和现代医学药物研究普遍关注的焦点[5,6]。
与植物多糖、动物多糖相比，乳酸菌胞外多糖（Exopolysaccharide, EPS）虽有许多的不足，但他却有着其独特的优良特性。例如，在细微的剪切力下即能增加酸奶的流变性，当剪切力消失，其粘性又能较快恢复；较低浓度的EPS本身多为中性多糖或酸性多糖，所以其在酸性环境中能保持较好的特性，稳定性强；最重要的一点是，由于乳酸菌自身即是被人们普遍接受的有益菌群，具有多种益生功能，所以作为益生菌的代谢产物，EPS正逐渐被人们接受，关于它的研究也越来越受到追捧。
适当的添加葡萄糖或乳糖碳源有利于EPS的合成。Cerning等研究了半乳糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖和蜜二糖对干酪乳杆菌CG11产胞外多糖的影响，发现该菌的最适合碳源是葡萄糖[7]。顾瑞霞报道在LCX基本液培养基，添加葡萄糖或乳糖都有利于唾液链球菌嗜热亚种的生产和EPS的合成[8]。
因此，本论文选取实验室自己分离出的瑞士乳杆菌MB21为EPS的来源，通过对MB21多糖的提取、分离纯化、组成分析及生理活性的研究，为将来研制出益生功能明确、保健功能突出的新型保健发酵品和多糖类药物提供坚实的理论基础和技术支持，对于推动我国高科技的发展具有重大的意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌种
L.helveticus MB21：从新疆赛里木酸奶中筛选到的一株具有产EPS的瑞士乳杆菌MB21。
1.1.2 试剂
无水乙醇、浓硫酸、苯酚、冰乙酸、葡萄糖、氢氧化钠、氯化钠、盐酸、壳聚糖、鼠李糖、木糖醇、果糖、甘露糖、菊糖、EDTA二钠、三氯乙酸、酵母膏、蛋白胨、正丁醇、肌醇、乙酸酐、盐酸羟胺、考马斯亮蓝G520和牛血清白蛋白均为国产分析纯试剂。DEAECellulose 52为英国Waterman公司产品；透析袋MD34为北京索莱宝科技有限公司产品。
1.1.3 设备
SHBIII 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪 德国Heidolph公司
TMBL2003电子天平 上海民桥精密科学仪器有限公司
Anke TDL5低速离心机 上海安亭科学仪器厂
电热恒温鼓风干燥箱DHG9140A 型 上海一恒科技有限公司
DK8 D型电热恒温水槽 上海森信实验仪器有限公司
722可见分光光度计 上海菁华科技仪器有限公司
冷冻干燥机 Alpha 12 英国LABCONCO公司
HL2B 数显恒流泵 上海沪西分析仪器厂
DBS100 自动部分收集器 上海沪西分析仪器厂
层析柱(2.6×30 cm) 上海亚荣生化仪器有限公司
二氧化碳培养箱（Model3111型） Thermo Fisher Scientific公司
Agilent 1200型高效液相色谱仪 美国Agilent公司
Agilent 6890 N型气相色谱仪 美国Agilent公司
1.2 实验方法
1.2.1 菌种活化
将L.helveticus MB21菌种接于乳清粉培养基中，先活化两代，然后发酵32 h得到EPS发酵液。
1.2.2 乳酸菌胞外多糖的制备
甘油保藏的菌种接于乳清培养基中活化两次，每次20h，随后进行扩培，接入添加有不同碳源的乳清粉中发酵。对照组为7%乳清粉+9g/L乳清粉；实验组为7%乳清粉+9g/L
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 实验材料 2
1.1.1 菌种 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 设备 2
1.2 实验方法 2
1.2.1 菌种活化 2
1.2.2 乳酸菌胞外多糖的制备 2
1.2.3 粗多糖的提取 3
1.2.4 DADECellulose52阴离子交换柱分离纯化 3
1.2.5 紫外光谱（UV）分析4
1.2.6 多糖组分的纯度鉴定和分子量测定 4
1.2.7 单糖组成分析 4
2 结果与分析 5
2.1 粗多糖的得率和提取率 5
2.2 DADECellulose52阴离子交换柱分离纯化 5
2.3 紫外光谱（UV）分析 6
2.4 多糖组分的纯度鉴定和分子量测定6
2.5单糖组成分析 8
3 讨论10
致谢11
参考文献11
添加不同碳源对瑞士乳杆菌MB21产胞外多糖的影响
引言
引言
多糖是构成人类生命机体的四大生命物质之一，是维持机体正常生理代谢活动的重要物质[1
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
,2]。多糖来源广泛，主要存在于植物、动物和微生物中，所以多糖又可以分为植物多糖、动物多糖和微生物多糖[3,4]。多糖可以增强机体免疫功能，能够调节控制细胞的生长、分化、代谢和衰老的过程，广泛参与机体免疫调节、细菌感染、细胞癌变、细胞识别等一系列的生理活动，现代多糖研究这一学科已经成为目前生物科学领域中最为活跃的项目之一，是食品功能因子和现代医学药物研究普遍关注的焦点[5,6]。
与植物多糖、动物多糖相比，乳酸菌胞外多糖（Exopolysaccharide, EPS）虽有许多的不足，但他却有着其独特的优良特性。例如，在细微的剪切力下即能增加酸奶的流变性，当剪切力消失，其粘性又能较快恢复；较低浓度的EPS本身多为中性多糖或酸性多糖，所以其在酸性环境中能保持较好的特性，稳定性强；最重要的一点是，由于乳酸菌自身即是被人们普遍接受的有益菌群，具有多种益生功能，所以作为益生菌的代谢产物，EPS正逐渐被人们接受，关于它的研究也越来越受到追捧。
适当的添加葡萄糖或乳糖碳源有利于EPS的合成。Cerning等研究了半乳糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖和蜜二糖对干酪乳杆菌CG11产胞外多糖的影响，发现该菌的最适合碳源是葡萄糖[7]。顾瑞霞报道在LCX基本液培养基，添加葡萄糖或乳糖都有利于唾液链球菌嗜热亚种的生产和EPS的合成[8]。
因此，本论文选取实验室自己分离出的瑞士乳杆菌MB21为EPS的来源，通过对MB21多糖的提取、分离纯化、组成分析及生理活性的研究，为将来研制出益生功能明确、保健功能突出的新型保健发酵品和多糖类药物提供坚实的理论基础和技术支持，对于推动我国高科技的发展具有重大的意义。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 菌种
L.helveticus MB21：从新疆赛里木酸奶中筛选到的一株具有产EPS的瑞士乳杆菌MB21。
1.1.2 试剂
无水乙醇、浓硫酸、苯酚、冰乙酸、葡萄糖、氢氧化钠、氯化钠、盐酸、壳聚糖、鼠李糖、木糖醇、果糖、甘露糖、菊糖、EDTA二钠、三氯乙酸、酵母膏、蛋白胨、正丁醇、肌醇、乙酸酐、盐酸羟胺、考马斯亮蓝G520和牛血清白蛋白均为国产分析纯试剂。DEAECellulose 52为英国Waterman公司产品；透析袋MD34为北京索莱宝科技有限公司产品。
1.1.3 设备
SHBIII 循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司
Heidolph Laborota 4000真空旋转蒸发仪 德国Heidolph公司
TMBL2003电子天平 上海民桥精密科学仪器有限公司
Anke TDL5低速离心机 上海安亭科学仪器厂
电热恒温鼓风干燥箱DHG9140A 型 上海一恒科技有限公司
DK8 D型电热恒温水槽 上海森信实验仪器有限公司
722可见分光光度计 上海菁华科技仪器有限公司
冷冻干燥机 Alpha 12 英国LABCONCO公司
HL2B 数显恒流泵 上海沪西分析仪器厂
DBS100 自动部分收集器 上海沪西分析仪器厂
层析柱(2.6×30 cm) 上海亚荣生化仪器有限公司
二氧化碳培养箱（Model3111型） Thermo Fisher Scientific公司
Agilent 1200型高效液相色谱仪 美国Agilent公司
Agilent 6890 N型气相色谱仪 美国Agilent公司
1.2 实验方法
1.2.1 菌种活化
将L.helveticus MB21菌种接于乳清粉培养基中，先活化两代，然后发酵32 h得到EPS发酵液。
1.2.2 乳酸菌胞外多糖的制备
甘油保藏的菌种接于乳清培养基中活化两次，每次20h，随后进行扩培，接入添加有不同碳源的乳清粉中发酵。对照组为7%乳清粉+9g/L乳清粉；实验组为7%乳清粉+9g/L
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