绿卡色林的hplc分析
绿卡色林是一种5-HT2C受体激动剂类新型抗肥胖药物，本文建立了绿卡色林的HPLC的分析方法。色谱柱为Sunfire C18（250mm×4.6mm,5.0um），流动相为97%甲醇与3%磷酸盐缓冲液（pH=8,0.04mol/L）(V:V)混合液，流量为0.8mL/min，进样量20μL，检测波长220nm；柱温16℃。定量关系式为Y=46908X，相关系数R2=0.9999，精密度RSD=1.12%，重现性RSD=4.63%，检出限为0.01ppm。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
一、绪论1
1.1绿卡色林1
1.2高效液相色谱法4
二、材料与方法5
2.1仪器与样品 5
2.2实验方法 6
2.2.1色谱条件6
2.2.2样品溶液制备6
三、结果与分析6
3.1色谱条件的确定6
3.1.1流动相的选择6
3.1.2 pH的选择7
3.1.3 流动相比例的选择8
3.1.4磷酸盐浓度的选择8
3.1.5检测波长的选择9
3.2定量关系峰面积与浓度关系曲线9
3.3方法可靠性实验10
3.3.1精密度实验10
3.3.2重现性实验10
3.3.3检出限测定10
四、结论 10
致谢11
参考文献11
绿卡色林的HPLC分析
引言
一 绪论
随着社会经济的发展，物质生活水平的提高，肥胖已成为一个世界性问题，而由其引起的并发症也严重威胁着人类的身体健康[1]，因此能有效治疗肥胖的药物越来越受到人们的重视。绿卡色林盐酸盐(Lorcaserin)是 Arena制药公司开发的一类新型减肥药，它的作用机制是激动丘脑下部的5羟色胺受体，从而达到控制食欲和调节新陈代谢的目的[2]。绿卡色林已经在2012年6月获得了美国FDA的批准上市[3]，经过长期的临床研究，对 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
于治疗肥胖症以及并发症的超重成年人群，具有明显的疗效，并且不会引起并发症[4]。由于绿卡色林刚问世不久，其分析方法寥寥无几，因此，研究绿卡色林的HPLC分析具有重要意义。
1.1 绿卡色林
1．1.1 绿卡色林简介
绿卡色林是一种R构型环胺盐酸盐，其中文化学名称为8氯1( R) 甲基2，3，4，5四氢1H3苯并氮杂卓盐酸盐，英文化学名为8chloro1( R) methyl2，3，4，5tetrahydro1H3benzazepine hydrochloride[5]，它的分子结构如下：
其基本性质如表1所示：
分子式
C11H14ClN
分子量
195.6886
密度
1.075g/cm3
沸点
288.125℃ at 760 mmHg
闪点
128.054℃
蒸汽压
0.002mmHg at 25℃
表1 绿卡色林基本性质
绿卡色林可以作为长期控制体重的减肥药物，与低热量饮食和运动结合，能治疗体重指数≥27的并且患有肥胖相关并发症如2型糖尿病的成人或肥胖患者[3]。推荐剂量为口服20mg?d－1，分两次给药，它吸收迅速，生物利用度较高，半衰期约为11h[5]。
1.1.2 绿卡色林的合成方法
通过文献资料，我们知道目前绿卡色林的合成方法都是先制备外消旋体，然后经过构型拆分后得到具有生物活性的绿卡色林。
专利WO 2005019179 A2[6]和WO 2007120517 A2[7]对绿卡色林的合成进行了报道，用2对氯苯乙酸和1氨基2丙醇为起始原料，经酰化还原氯代得到关键中间体( I) ，(I ) 在三氯化铝催化下发生分子内傅克反应得到环合产物(II ) ， 最后经L酒石酸拆分并成盐酸盐得到目标化合物[89]，如图1所示：
图1 4氯苯乙酸为原料合成绿卡色林
贺光亮在文献绿卡色林盐酸盐的合成方法[4]中报道了两种合成方法：第一种是以4一氯苯乙胺为原料：(路线一利用Heck反应，用苯乙胺类和三氟乙酸酐为起始原料，经过胺解酸酐、碘代、烯丙基化生成中间体，然后在Pd (OAc )2的催化下，发生Heck反应，生成苯并氮杂类化合物，最后经过Pd／C催化，H2还原双键，碱解脱保护即可得到最终分子；(路线二是利用Friedel—Crafts反应，以苯乙胺类和2一氯苯酰氯为原料，先生成酰胺，然后经过BH3／醚还原得到胺，最后在A1Cl3的作用下，通过Friedel—Crafts烷基化得到外消旋体，或者先烷基化后还原酰胺也可以。合成路线如图2所示：
图2 4氯苯乙胺为原料合成绿卡色林外消旋体
第二种方法是用对氯苯乙醇为原料，依次经过三溴化磷溴代、异丙醇胺胺化、二氯亚砜氯代，最后可在A1C13的作用下环合为外消旋体，如图3所示：
图3 4氯苯乙醇为原料合成绿卡色林外消旋体
最后得到的外消旋体再经过L酒石酸拆分，用叔丁醇、丙酮、异丙醇等作为溶剂，混合物和L一酒石酸作用即可得到非对应异构体混合物，然后通过溶液中结晶干燥后，在碱性条件下进行分离处理得到R构型分子，最后经HCl酸化，便可得到绿卡色林盐酸盐[8]，如图4所示：
图4 构型分离制备绿卡色林
1.1.3 绿卡色林作用机理
在石卫峰等人的文献“治疗肥胖的新药氯卡色林”[9]中，介绍了绿卡色林的作用机制：绿卡色林是一种高选择性的血清素激动剂，对血清素5HT2C受体的选择性分别是5HT2A受体和5HT2B受体的15倍和100倍，能选择性激活下丘脑中5HT2C受体，活化的5HT2C刺激阿片黑皮质素原( POMC) 神经元，增加POMC的分泌，POMC是黑皮质素释放激素的前体，而后者可以作用于黑皮质素4受体减少食物摄入[9]。绿卡色林的优势在于其作用的靶器官只限于脑组织，5HT2B受体激动是引发心脏瓣膜病和肺动脉高压的原因之一，绿卡色林对5HT2C受体的高度选择性，因此在治疗剂量下可以避免心脏瓣膜病的发生，也不会引起精神抑郁或焦虑。从动物和人体的研究结果可以看出，绿卡色林可以显著减少食物的摄入和体重[1011]，但不影响能量的代谢，表现出良好的减肥效果。此外，它还可以改善心率、血压和低密度脂蛋白胆固醇水平，健康安全性好于现有减肥药物[12]。
同时，石卫峰等人[9]报道了3个大型III期临床试验( BLOOM，BLOOMDM，BLOSSOM)，用绿卡色林与安慰剂作对比，通过临床试验结果评估了体重指数在30～45kg/m－2或27 ～29.9kg/m－2但合并肥胖相关疾病的成人使用绿卡色林的效果。实验结果表明，在BLOOM试验( 3182例患者)中，那些服用绿卡色林的患者平均体重较基线水平下降的5.8%，而服用安慰剂的下降2.2%(P＜0.001)。另两项试验同样证明绿卡色林是安全有效的，服用绿卡色林的患者中，近一半体重较基线下降达到5%以上，而且能够保持在研究结束以后，但是服用安慰剂的患者中仅有20%达到类似水平。只有极少数患者在绿卡色林组减肥失败。同时，绿卡色林还促进了其他相关方面的改进: 降低BMI 和腰围，降低空腹血糖，胰岛素水平，糖化血红蛋白水平和降低总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯[12]。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
一、绪论1
1.1绿卡色林1
1.2高效液相色谱法4
二、材料与方法5
2.1仪器与样品 5
2.2实验方法 6
2.2.1色谱条件6
2.2.2样品溶液制备6
三、结果与分析6
3.1色谱条件的确定6
3.1.1流动相的选择6
3.1.2 pH的选择7
3.1.3 流动相比例的选择8
3.1.4磷酸盐浓度的选择8
3.1.5检测波长的选择9
3.2定量关系峰面积与浓度关系曲线9
3.3方法可靠性实验10
3.3.1精密度实验10
3.3.2重现性实验10
3.3.3检出限测定10
四、结论 10
致谢11
参考文献11
绿卡色林的HPLC分析
引言
一 绪论
随着社会经济的发展，物质生活水平的提高，肥胖已成为一个世界性问题，而由其引起的并发症也严重威胁着人类的身体健康[1]，因此能有效治疗肥胖的药物越来越受到人们的重视。绿卡色林盐酸盐(Lorcaserin)是 Arena制药公司开发的一类新型减肥药，它的作用机制是激动丘脑下部的5羟色胺受体，从而达到控制食欲和调节新陈代谢的目的[2]。绿卡色林已经在2012年6月获得了美国FDA的批准上市[3]，经过长期的临床研究，对 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
于治疗肥胖症以及并发症的超重成年人群，具有明显的疗效，并且不会引起并发症[4]。由于绿卡色林刚问世不久，其分析方法寥寥无几，因此，研究绿卡色林的HPLC分析具有重要意义。
1.1 绿卡色林
1．1.1 绿卡色林简介
绿卡色林是一种R构型环胺盐酸盐，其中文化学名称为8氯1( R) 甲基2，3，4，5四氢1H3苯并氮杂卓盐酸盐，英文化学名为8chloro1( R) methyl2，3，4，5tetrahydro1H3benzazepine hydrochloride[5]，它的分子结构如下：
其基本性质如表1所示：
分子式
C11H14ClN
分子量
195.6886
密度
1.075g/cm3
沸点
288.125℃ at 760 mmHg
闪点
128.054℃
蒸汽压
0.002mmHg at 25℃
表1 绿卡色林基本性质
绿卡色林可以作为长期控制体重的减肥药物，与低热量饮食和运动结合，能治疗体重指数≥27的并且患有肥胖相关并发症如2型糖尿病的成人或肥胖患者[3]。推荐剂量为口服20mg?d－1，分两次给药，它吸收迅速，生物利用度较高，半衰期约为11h[5]。
1.1.2 绿卡色林的合成方法
通过文献资料，我们知道目前绿卡色林的合成方法都是先制备外消旋体，然后经过构型拆分后得到具有生物活性的绿卡色林。
专利WO 2005019179 A2[6]和WO 2007120517 A2[7]对绿卡色林的合成进行了报道，用2对氯苯乙酸和1氨基2丙醇为起始原料，经酰化还原氯代得到关键中间体( I) ，(I ) 在三氯化铝催化下发生分子内傅克反应得到环合产物(II ) ， 最后经L酒石酸拆分并成盐酸盐得到目标化合物[89]，如图1所示：
图1 4氯苯乙酸为原料合成绿卡色林
贺光亮在文献绿卡色林盐酸盐的合成方法[4]中报道了两种合成方法：第一种是以4一氯苯乙胺为原料：(路线一利用Heck反应，用苯乙胺类和三氟乙酸酐为起始原料，经过胺解酸酐、碘代、烯丙基化生成中间体，然后在Pd (OAc )2的催化下，发生Heck反应，生成苯并氮杂类化合物，最后经过Pd／C催化，H2还原双键，碱解脱保护即可得到最终分子；(路线二是利用Friedel—Crafts反应，以苯乙胺类和2一氯苯酰氯为原料，先生成酰胺，然后经过BH3／醚还原得到胺，最后在A1Cl3的作用下，通过Friedel—Crafts烷基化得到外消旋体，或者先烷基化后还原酰胺也可以。合成路线如图2所示：
图2 4氯苯乙胺为原料合成绿卡色林外消旋体
第二种方法是用对氯苯乙醇为原料，依次经过三溴化磷溴代、异丙醇胺胺化、二氯亚砜氯代，最后可在A1C13的作用下环合为外消旋体，如图3所示：
图3 4氯苯乙醇为原料合成绿卡色林外消旋体
最后得到的外消旋体再经过L酒石酸拆分，用叔丁醇、丙酮、异丙醇等作为溶剂，混合物和L一酒石酸作用即可得到非对应异构体混合物，然后通过溶液中结晶干燥后，在碱性条件下进行分离处理得到R构型分子，最后经HCl酸化，便可得到绿卡色林盐酸盐[8]，如图4所示：
图4 构型分离制备绿卡色林
1.1.3 绿卡色林作用机理
在石卫峰等人的文献“治疗肥胖的新药氯卡色林”[9]中，介绍了绿卡色林的作用机制：绿卡色林是一种高选择性的血清素激动剂，对血清素5HT2C受体的选择性分别是5HT2A受体和5HT2B受体的15倍和100倍，能选择性激活下丘脑中5HT2C受体，活化的5HT2C刺激阿片黑皮质素原( POMC) 神经元，增加POMC的分泌，POMC是黑皮质素释放激素的前体，而后者可以作用于黑皮质素4受体减少食物摄入[9]。绿卡色林的优势在于其作用的靶器官只限于脑组织，5HT2B受体激动是引发心脏瓣膜病和肺动脉高压的原因之一，绿卡色林对5HT2C受体的高度选择性，因此在治疗剂量下可以避免心脏瓣膜病的发生，也不会引起精神抑郁或焦虑。从动物和人体的研究结果可以看出，绿卡色林可以显著减少食物的摄入和体重[1011]，但不影响能量的代谢，表现出良好的减肥效果。此外，它还可以改善心率、血压和低密度脂蛋白胆固醇水平，健康安全性好于现有减肥药物[12]。
同时，石卫峰等人[9]报道了3个大型III期临床试验( BLOOM，BLOOMDM，BLOSSOM)，用绿卡色林与安慰剂作对比，通过临床试验结果评估了体重指数在30～45kg/m－2或27 ～29.9kg/m－2但合并肥胖相关疾病的成人使用绿卡色林的效果。实验结果表明，在BLOOM试验( 3182例患者)中，那些服用绿卡色林的患者平均体重较基线水平下降的5.8%，而服用安慰剂的下降2.2%(P＜0.001)。另两项试验同样证明绿卡色林是安全有效的，服用绿卡色林的患者中，近一半体重较基线下降达到5%以上，而且能够保持在研究结束以后，但是服用安慰剂的患者中仅有20%达到类似水平。只有极少数患者在绿卡色林组减肥失败。同时，绿卡色林还促进了其他相关方面的改进: 降低BMI 和腰围，降低空腹血糖，胰岛素水平，糖化血红蛋白水平和降低总胆固醇，低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯[12]。
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