丁香油的成分分析及麻醉有效成分的鉴别
目 录
1 引言 1
1.1 丁香油的性质及用途 1
1.2 丁香油作为麻醉剂的研究进展 1
1.3 丁香油成分分析研究进展 2
1.4 丁香油成分分析的方法 3
1.5 GC-MS在化合物成分分析的研究进展 4
1.6 研究目的及意义 5
2 材料与方法 6
2.1 仪器与试剂 6
2.2 色谱-质谱联用法 6
2.3 麻醉试验 8
3 结果与讨论 9
3.1 丁香油初步成分分析的结果 9
3.2 优化分析条件的结果 10
3.3 麻醉试验结果 13
结论 18
致 谢 19
参考文献 20
1 引言
丁香油是能够烟用的天然香精，能调配各种辛香的风味，使烟香风味更加愉悦， 所以在烟草工业被广泛应用。丁香油是用水蒸气蒸馏法从丁香干花蕾或花梗或叶片中制得的[1]。丁香油由于其成本低、高效性以及较高的安全性被广泛地应用于亲鱼采卵、活鱼运输以及活体手术过程等养殖生产和科学研究操作中[2]。分析鉴定丁香油中具有麻醉作用的活性组分是研究麻醉剂的关键，通过气质联用仪等分析手段可有效地分析丁香油的组成，并进一步对其有效成分进行麻醉试验，以判断其浓度与麻醉效果的相关性，从而为开发高效的麻醉剂提供基础数据。
1.1 丁香油的性质及用途
丁香油是由桃金娘科植物丁香的干燥花蕾（丁香）经蒸馏所得到的挥发油。溶液呈淡黄色或无色，有丁香的特殊芳香气味。露置空气中或贮存日久，颜色会渐渐变得浓厚。遇铁质颜色会更深，不溶于水，易溶于醚、醇和冰醋酸中。味甘辛，性大热，比重为1.038～1.060。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
丁香油的用途可以归纳为以下几个方面：（1）食用丁香油：主要用于调香；（2）药用丁香油：抗菌抗炎作用、解热功效、抗氧化和抗衰老、麻醉作用、促进透皮吸收作用；（3）香料用丁香精油。
由于丁香油具有麻醉作用，通常丁香油与氧化锌混合使用。例如氧化锌丁香酚水门汀是由粉剂的氧化锌和液剂的丁香酚组成，主要用来进行牙齿的修复和垫底用。丁香酚氧化锌黏固粉有抑菌和安抚作用，能促进肉芽组织生成X射线诅射，可单独作根管充填材料。目前一些香精公司开发的活性香精以含丁香酚、麝香草粉、香樟醇等对口臭、牙菌斑、口腔细菌等有良好的抑制效果[28]。
1.2 丁香油作为麻醉剂的研究进展
关于麻醉剂对鱼类麻醉效果的研究、麻醉剂对血液成分的影响以及对麻醉作用机制、代谢途径和麻醉剂的安全范围的研究国内外已有很多报道[7]。目前已经开发的鱼类麻醉剂有MS-222、硫酸喹哪啶、丁香酚、2-苯氧乙醇等近30种，其中应用最广泛的是MS-222（烷基磺酸盐同位氨基苯甲酸乙酯，俗名“鱼安定”），在美国、加拿大、日本，欧盟等许多国家和地区都允许使用[3]。试验证明，MS -222 麻醉时间短，对鱼、人较安全，因而被广泛应用于多种鱼的麻醉运输。但因价格较贵，使用上受到一定限制[4]。丁香油“水门汀”是一种牙科材料，由粉剂（氧化锌粉+松香粉）和油剂（丁香油和橄榄油）组成，使用时临时混合，丁香油在其中主要发挥镇痛作用。丁香油是从桃金娘科植物丁香（Syzygium aromaticum ）中提取得到的挥发油[5]。研究表明丁香油与MS-222相比具有成本较低、在生物体中残留较少的优点，同时在麻醉效果方面也不输给MS-222。它的半致死浓度比MS-222还要低，说明它比FDA认定的更安全。在鱼类处理中使用丁香油能减少鱼体的损伤，并且也符合爱动物的联盟组织反对虐杀动物的倡议[6]。
在丁香油对鲫鱼、锦鲤麻醉的效果研究中发现，随着丁香油药液浓度的升高，鲫鱼、锦鲤麻醉所需时间不断地缩短，两者呈负相关[7]。在麻醉斑马鱼上丁香油表现出了很好的效果，丁香油浓度为40 mg/L时对斑马鱼麻醉效果最好。斑马鱼的麻醉时间和苏醒时间均随温度的升高而缩短[7]。将丁香油乙醇溶液按体积比进行混合制备成不同浓度梯度的丁香油—乙醇混合液，在不同水温条件下对两种大小的鲤鱼和罗非鱼进行麻醉试验。28℃水温时，随着丁香油浓度由20mg/L，到60mg/L、80mg/L不断增加，两种鱼的麻醉时间都缩短。鲤鱼复苏时间比罗非鱼长。在0.1ML/L浓度下，随着水温从21℃到24℃、26℃、28℃升高，鲤鱼和罗非鱼的麻醉时间均缩短。鲤鱼复苏时间增长而罗非鱼则缩短。28℃水温0.1ML/L浓度下，幼年鲤鱼麻醉时间比幼年罗非鱼短，而复苏时间比小罗非鱼长。结果显示，丁香油是一种高效、廉价的鱼类麻醉剂。
1.3 丁香油成分分析研究进展
现有资料显示对丁香油成分进行了大量的分析研究。研究人员分别选用较长的非极性柱和极性柱对丁香油成分进行了分离，通过比较两种柱的分离结果得出丁香油的挥发性成分有丁香酚、石竹烯、石炭酸、香兰素、古巴烯、等化合物，含量相对较高的有丁香酚、石竹烯、环氧石竹烯、β-石竹烯、香兰素等，其中丁香酚含量最高，与文献记载含量相符[1]。
丁香酚（eugenol）是丁香Flos caryophy lli及丁香罗勒油（Oleum ocimi gratissimi）的主要成分。近年来的研究表明其有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透皮吸收、祛蚊等多种药理活性[8]。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等十种常见的腐败菌和产毒素菌进行了最低抑菌浓度测定，发现对这些菌种均有抑制效果，对大多数的供试菌最低抑制浓度为0.04ml/100ml[26]。冯甲棣等通过给大鼠中枢及外周注入丁香酚,观察到小剂量的丁香酚能解热,大剂量则能致低温,而且中枢用药效果明显强于外周用药,它能通过影响PO/A H(视前区/下丘脑前部) 温度敏感神经元的放电活动从而参与体温调节,即抑制冷敏神经元,兴奋热敏神经元,从而达到降温效果[9]。采用体外透皮双室扩散池和HPLC法,测定模型药物苯甲酸的累积渗透量,以考察不同浓度的肉桂油、高良姜油、丁香油、丁香酚对苯甲酸的促渗效果及挥发油与乙醇、丙二醇合用后的促渗效果[8]。结果表明肉桂油、丁香油、丁香酚、高良姜油对苯甲酸均具有一定的促渗作用，挥发油与乙醇、丙二醇合用,可使苯甲酸的累积渗透量增大,但渗透系数减小，2%丁香酚对苯甲酸的增渗倍数为2. 23[8]。丁香酚对核黄素- 甲硫氨酸光照还原生成的活性氧也有清除作用[27]。张朝晖等用不同浓度的丁香酚对体重115～175 g 的黄蜡鲹麻醉处理15 min，每分钟测定容器内的氧饱和度1次，各处理组中以10×10- 6组的耗氧率最低，为0.33 mg/ (g?h )，5×10- 6组为0.42 mg/ (g?h)，而对照组为0.57 mg/ (g?h)，同时麻醉后的黄蜡鲹鳃活动频率明显，表明黄蜡鲹的耗氧率明显受到丁香酚的影响[8]。Andetrson 等用丁香酚作为麻醉剂对红鳟鱼进行麻醉研究，结果表明，用丁香酚麻醉后的红鳟鱼的鳃活动频率明显降低，游动速度变慢，行动迟缓，鱼体的活动及氧气消耗都有明显下降[8,9]。
丁香酚具有价廉易得、对人体健康无影响、其液体制剂在海水和淡水中溶解性好等特点[10]。杨琴采用化学方法对原料药丁香酚进行定性鉴别，并采用气相色谱法对该药中的丁香酚进行含量测定。这种方法快速简便，结果准确，可用于控制丁香酚的质量[11]。
1 引言 1
1.1 丁香油的性质及用途 1
1.2 丁香油作为麻醉剂的研究进展 1
1.3 丁香油成分分析研究进展 2
1.4 丁香油成分分析的方法 3
1.5 GC-MS在化合物成分分析的研究进展 4
1.6 研究目的及意义 5
2 材料与方法 6
2.1 仪器与试剂 6
2.2 色谱-质谱联用法 6
2.3 麻醉试验 8
3 结果与讨论 9
3.1 丁香油初步成分分析的结果 9
3.2 优化分析条件的结果 10
3.3 麻醉试验结果 13
结论 18
致 谢 19
参考文献 20
1 引言
丁香油是能够烟用的天然香精，能调配各种辛香的风味，使烟香风味更加愉悦， 所以在烟草工业被广泛应用。丁香油是用水蒸气蒸馏法从丁香干花蕾或花梗或叶片中制得的[1]。丁香油由于其成本低、高效性以及较高的安全性被广泛地应用于亲鱼采卵、活鱼运输以及活体手术过程等养殖生产和科学研究操作中[2]。分析鉴定丁香油中具有麻醉作用的活性组分是研究麻醉剂的关键，通过气质联用仪等分析手段可有效地分析丁香油的组成，并进一步对其有效成分进行麻醉试验，以判断其浓度与麻醉效果的相关性，从而为开发高效的麻醉剂提供基础数据。
1.1 丁香油的性质及用途
丁香油是由桃金娘科植物丁香的干燥花蕾（丁香）经蒸馏所得到的挥发油。溶液呈淡黄色或无色，有丁香的特殊芳香气味。露置空气中或贮存日久，颜色会渐渐变得浓厚。遇铁质颜色会更深，不溶于水，易溶于醚、醇和冰醋酸中。味甘辛，性大热，比重为1.038～1.060。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
丁香油的用途可以归纳为以下几个方面：（1）食用丁香油：主要用于调香；（2）药用丁香油：抗菌抗炎作用、解热功效、抗氧化和抗衰老、麻醉作用、促进透皮吸收作用；（3）香料用丁香精油。
由于丁香油具有麻醉作用，通常丁香油与氧化锌混合使用。例如氧化锌丁香酚水门汀是由粉剂的氧化锌和液剂的丁香酚组成，主要用来进行牙齿的修复和垫底用。丁香酚氧化锌黏固粉有抑菌和安抚作用，能促进肉芽组织生成X射线诅射，可单独作根管充填材料。目前一些香精公司开发的活性香精以含丁香酚、麝香草粉、香樟醇等对口臭、牙菌斑、口腔细菌等有良好的抑制效果[28]。
1.2 丁香油作为麻醉剂的研究进展
关于麻醉剂对鱼类麻醉效果的研究、麻醉剂对血液成分的影响以及对麻醉作用机制、代谢途径和麻醉剂的安全范围的研究国内外已有很多报道[7]。目前已经开发的鱼类麻醉剂有MS-222、硫酸喹哪啶、丁香酚、2-苯氧乙醇等近30种，其中应用最广泛的是MS-222（烷基磺酸盐同位氨基苯甲酸乙酯，俗名“鱼安定”），在美国、加拿大、日本，欧盟等许多国家和地区都允许使用[3]。试验证明，MS -222 麻醉时间短，对鱼、人较安全，因而被广泛应用于多种鱼的麻醉运输。但因价格较贵，使用上受到一定限制[4]。丁香油“水门汀”是一种牙科材料，由粉剂（氧化锌粉+松香粉）和油剂（丁香油和橄榄油）组成，使用时临时混合，丁香油在其中主要发挥镇痛作用。丁香油是从桃金娘科植物丁香（Syzygium aromaticum ）中提取得到的挥发油[5]。研究表明丁香油与MS-222相比具有成本较低、在生物体中残留较少的优点，同时在麻醉效果方面也不输给MS-222。它的半致死浓度比MS-222还要低，说明它比FDA认定的更安全。在鱼类处理中使用丁香油能减少鱼体的损伤，并且也符合爱动物的联盟组织反对虐杀动物的倡议[6]。
在丁香油对鲫鱼、锦鲤麻醉的效果研究中发现，随着丁香油药液浓度的升高，鲫鱼、锦鲤麻醉所需时间不断地缩短，两者呈负相关[7]。在麻醉斑马鱼上丁香油表现出了很好的效果，丁香油浓度为40 mg/L时对斑马鱼麻醉效果最好。斑马鱼的麻醉时间和苏醒时间均随温度的升高而缩短[7]。将丁香油乙醇溶液按体积比进行混合制备成不同浓度梯度的丁香油—乙醇混合液，在不同水温条件下对两种大小的鲤鱼和罗非鱼进行麻醉试验。28℃水温时，随着丁香油浓度由20mg/L，到60mg/L、80mg/L不断增加，两种鱼的麻醉时间都缩短。鲤鱼复苏时间比罗非鱼长。在0.1ML/L浓度下，随着水温从21℃到24℃、26℃、28℃升高，鲤鱼和罗非鱼的麻醉时间均缩短。鲤鱼复苏时间增长而罗非鱼则缩短。28℃水温0.1ML/L浓度下，幼年鲤鱼麻醉时间比幼年罗非鱼短，而复苏时间比小罗非鱼长。结果显示，丁香油是一种高效、廉价的鱼类麻醉剂。
1.3 丁香油成分分析研究进展
现有资料显示对丁香油成分进行了大量的分析研究。研究人员分别选用较长的非极性柱和极性柱对丁香油成分进行了分离，通过比较两种柱的分离结果得出丁香油的挥发性成分有丁香酚、石竹烯、石炭酸、香兰素、古巴烯、等化合物，含量相对较高的有丁香酚、石竹烯、环氧石竹烯、β-石竹烯、香兰素等，其中丁香酚含量最高，与文献记载含量相符[1]。
丁香酚（eugenol）是丁香Flos caryophy lli及丁香罗勒油（Oleum ocimi gratissimi）的主要成分。近年来的研究表明其有抑菌、麻醉、解热、抗氧化、抗肿瘤、促进透皮吸收、祛蚊等多种药理活性[8]。对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等十种常见的腐败菌和产毒素菌进行了最低抑菌浓度测定，发现对这些菌种均有抑制效果，对大多数的供试菌最低抑制浓度为0.04ml/100ml[26]。冯甲棣等通过给大鼠中枢及外周注入丁香酚,观察到小剂量的丁香酚能解热,大剂量则能致低温,而且中枢用药效果明显强于外周用药,它能通过影响PO/A H(视前区/下丘脑前部) 温度敏感神经元的放电活动从而参与体温调节,即抑制冷敏神经元,兴奋热敏神经元,从而达到降温效果[9]。采用体外透皮双室扩散池和HPLC法,测定模型药物苯甲酸的累积渗透量,以考察不同浓度的肉桂油、高良姜油、丁香油、丁香酚对苯甲酸的促渗效果及挥发油与乙醇、丙二醇合用后的促渗效果[8]。结果表明肉桂油、丁香油、丁香酚、高良姜油对苯甲酸均具有一定的促渗作用，挥发油与乙醇、丙二醇合用,可使苯甲酸的累积渗透量增大,但渗透系数减小，2%丁香酚对苯甲酸的增渗倍数为2. 23[8]。丁香酚对核黄素- 甲硫氨酸光照还原生成的活性氧也有清除作用[27]。张朝晖等用不同浓度的丁香酚对体重115～175 g 的黄蜡鲹麻醉处理15 min，每分钟测定容器内的氧饱和度1次，各处理组中以10×10- 6组的耗氧率最低，为0.33 mg/ (g?h )，5×10- 6组为0.42 mg/ (g?h)，而对照组为0.57 mg/ (g?h)，同时麻醉后的黄蜡鲹鳃活动频率明显，表明黄蜡鲹的耗氧率明显受到丁香酚的影响[8]。Andetrson 等用丁香酚作为麻醉剂对红鳟鱼进行麻醉研究，结果表明，用丁香酚麻醉后的红鳟鱼的鳃活动频率明显降低，游动速度变慢，行动迟缓，鱼体的活动及氧气消耗都有明显下降[8,9]。
丁香酚具有价廉易得、对人体健康无影响、其液体制剂在海水和淡水中溶解性好等特点[10]。杨琴采用化学方法对原料药丁香酚进行定性鉴别，并采用气相色谱法对该药中的丁香酚进行含量测定。这种方法快速简便，结果准确，可用于控制丁香酚的质量[11]。
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