石斛多糖的理化性质及结构的初步鉴定(附件)
目的研究石斛多糖的理化性质及结构的初步鉴定。方法采用苯酚-硫酸法测定石斛多糖中的总糖含量；采用考马斯亮蓝法测定石斛多糖中的蛋白质含量；硫酸-咔唑法测定石斛多糖中的糖醛酸含量；DNS法测定石斛多糖中的还原糖含量；碘-碘化钾颜色反应判断石斛多糖是否为淀粉多糖。并采用红外光谱法进行IR分析，分析石斛多糖中的主要官能团,并判断其糖苷键的构型。通过对石斛多糖样品进行衍生化，采用气相色谱法（GC）对石斛多糖中的单糖组成进行分析。采用高碘酸氧化和Smith降解，判断石斛多糖中糖苷键的链接方式。结果石斛多糖中总糖含量为96％，蛋白质含量为2.7％，不含还原糖，碘-碘化钾颜色反应为阴性，硫酸-咔唑颜色反应没有生成紫色环。结论石斛多糖由鼠李糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖组成，蛋白质含量较低，不含糖醛酸和还原糖，且为非淀粉多糖。其结构具有多糖的特征吸收，存在α型构型，主链由（1→4）-葡萄糖构成、支链为（1→6）-葡萄糖。关键词 石斛多糖，理化性质，结构鉴定
目 录
1 绪论 1
1.1 多糖的研究概况 1
1.2 多糖理化性质的研究 1
1.3 多糖结构的初步鉴定的研究 1
2 课题研究的目的及内容 2
2.1 课题研究的目的 2
2.2 课题研究的内容 2
3 实验方法 3
3.1 仪器与材料 3
3.2 理化性质的研究 4
3.3 化学结构的初步鉴定 5
4 结果与分析 15
4.1 理化性质的测定结果 15
4.2 化学结构的初步鉴定结果 20
结 论 24
致 谢 25
参 考 文 献 26
1 绪论
《神农本草经》中将中药石斛列为上品，它味甘，微寒，具有益胃生津、润肺止咳的功效。临床上一般将其用于病后虚热，阴伤津亏，食少干呕等［1］。现代药理研究表明，中药石斛能够对提高SOD(超氧化物歧化酶)水平，降低LPO(过氧化脂质)起到显著而有效的作用［2］。
1.1 多糖的研究概况
组成多糖的单糖通常都在一百个以上，多的可达数千个，因分子量较大， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
已失去单糖的性质，一般无甜味，也无还原性。但是多糖的结构和性质的不一样，会对活性产生影响，因此对多糖的理化性质及结构的鉴定是非常重要的［3］。
1.2 多糖理化性质的研究
①基本物理性质。提取的纯化多糖，观察其颜色、状态、气味。
②还原糖含量的测定。使用3,5二硝基水杨酸（DNS）法对多糖的还原糖含量进行测定。
③碘碘化钾反应。观察颜色变化。
④多糖含量的测定。使用苯酚硫酸法测定糖含量。
⑤蛋白质含量的测定。使用考马斯亮蓝法测定多糖中蛋白质含量。
⑥糖醛酸含量的测定。使用硫酸咔唑法测定多糖糖醛酸含量。
⑦分子量的测定。使用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法测定多糖的纯度及相对分子量［46］。
⑧多糖中水分含量的测定。多糖中水分含量按GB/T 5009.3 2010《食品中水分的测定》规定的方法测定［7］。
1.3 多糖结构的初步鉴定的研究
1.3.1 单糖组成的分析
多糖中的单糖组成分析使用的方法有:①薄层色谱法(TLC)，该法操作简单、快速，常用于成分分析，还可以用于定性、定量检测［8］。②高效液相色谱法(HPLC),主要利用各种不同固定相和各种不同的流动相对各种组分的吸附能力之间的差异，使各种成分通过色谱柱的时间长短不一，达到分离检测的目的;③气质联用色谱法(GCMS)，利用的是常规的检测器，使其定性、定量分析更加准确［9］;④对样品进行衍生化［10］。
1.3.2 多糖结构的分析
多糖的结构分析经常采用的方法有:①高碘酸氧化及Smith降解，判断多糖中糖苷键的位置;②甲基化分析。甲基化反应采用Needs法进行［11］;③红外光谱法，主要用于分析主要官能团、判断糖苷键的构型。取少量多糖样品，用溴化钾（KBr）压片后进行IR分析［12］;④质谱分析法［13］，主要用于多糖的序列分析和结构的鉴定。⑤紫外分光光度计法，用于鉴定糖、发色团、官能团及糖的构型等。
2 课题研究的目的及内容
2.1 课题研究的目的
研究石斛多糖的理化性质及结构的初步鉴定。
2.2 课题研究的内容
采用苯酚硫酸法测定总糖含量、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量、硫酸咔唑法测定糖醛酸含量、DNS法测定还原糖含量，碘碘化钾颜色反应，判断是否为淀粉多糖。并采用红外光谱法进行IR分析，分析主要官能团、判断糖苷键的构型。通过对样品进行衍生化，采用气相色谱法（GC）对单糖组成进行分析。采用高碘酸氧化和Smith降解，判断糖苷键的位置、支链的长短及分支的位置。采用气相色谱法（GC）对结果进行分析。
3 实验方法
3.1 仪器与材料
实验中所需的具体试剂与材料见表1。
表1 实验所需材料与试剂
名称
规格
生产厂家
石斛
广州科博世佳科技有限公司
95%乙醇
分析纯
天津基准化学试剂有限公司
硫酸
分析纯
莱阳市康德化工有限公司
石油醚
分析纯
上海久亿化学试剂有限公司
无水乙醇
分析纯
上海久亿化学试剂有限公司
苯酚
分析纯
上海凌峰化学试剂有限公司
葡萄糖
分析纯
天津恒兴化学试剂有限公司
考马斯亮蓝G250
分析纯
国药集团化学试剂有限公司
续上表
磷酸
分析纯
中国宿州化学试剂有限公司
牛血清蛋白
分析纯
上海奥宇生物科技有限公司
溴化钾
分析纯
济宁百川化工有限公司
3,5二硝基水杨酸
目 录
1 绪论 1
1.1 多糖的研究概况 1
1.2 多糖理化性质的研究 1
1.3 多糖结构的初步鉴定的研究 1
2 课题研究的目的及内容 2
2.1 课题研究的目的 2
2.2 课题研究的内容 2
3 实验方法 3
3.1 仪器与材料 3
3.2 理化性质的研究 4
3.3 化学结构的初步鉴定 5
4 结果与分析 15
4.1 理化性质的测定结果 15
4.2 化学结构的初步鉴定结果 20
结 论 24
致 谢 25
参 考 文 献 26
1 绪论
《神农本草经》中将中药石斛列为上品，它味甘，微寒，具有益胃生津、润肺止咳的功效。临床上一般将其用于病后虚热，阴伤津亏，食少干呕等［1］。现代药理研究表明，中药石斛能够对提高SOD(超氧化物歧化酶)水平，降低LPO(过氧化脂质)起到显著而有效的作用［2］。
1.1 多糖的研究概况
组成多糖的单糖通常都在一百个以上，多的可达数千个，因分子量较大， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
已失去单糖的性质，一般无甜味，也无还原性。但是多糖的结构和性质的不一样，会对活性产生影响，因此对多糖的理化性质及结构的鉴定是非常重要的［3］。
1.2 多糖理化性质的研究
①基本物理性质。提取的纯化多糖，观察其颜色、状态、气味。
②还原糖含量的测定。使用3,5二硝基水杨酸（DNS）法对多糖的还原糖含量进行测定。
③碘碘化钾反应。观察颜色变化。
④多糖含量的测定。使用苯酚硫酸法测定糖含量。
⑤蛋白质含量的测定。使用考马斯亮蓝法测定多糖中蛋白质含量。
⑥糖醛酸含量的测定。使用硫酸咔唑法测定多糖糖醛酸含量。
⑦分子量的测定。使用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）法测定多糖的纯度及相对分子量［46］。
⑧多糖中水分含量的测定。多糖中水分含量按GB/T 5009.3 2010《食品中水分的测定》规定的方法测定［7］。
1.3 多糖结构的初步鉴定的研究
1.3.1 单糖组成的分析
多糖中的单糖组成分析使用的方法有:①薄层色谱法(TLC)，该法操作简单、快速，常用于成分分析，还可以用于定性、定量检测［8］。②高效液相色谱法(HPLC),主要利用各种不同固定相和各种不同的流动相对各种组分的吸附能力之间的差异，使各种成分通过色谱柱的时间长短不一，达到分离检测的目的;③气质联用色谱法(GCMS)，利用的是常规的检测器，使其定性、定量分析更加准确［9］;④对样品进行衍生化［10］。
1.3.2 多糖结构的分析
多糖的结构分析经常采用的方法有:①高碘酸氧化及Smith降解，判断多糖中糖苷键的位置;②甲基化分析。甲基化反应采用Needs法进行［11］;③红外光谱法，主要用于分析主要官能团、判断糖苷键的构型。取少量多糖样品，用溴化钾（KBr）压片后进行IR分析［12］;④质谱分析法［13］，主要用于多糖的序列分析和结构的鉴定。⑤紫外分光光度计法，用于鉴定糖、发色团、官能团及糖的构型等。
2 课题研究的目的及内容
2.1 课题研究的目的
研究石斛多糖的理化性质及结构的初步鉴定。
2.2 课题研究的内容
采用苯酚硫酸法测定总糖含量、考马斯亮蓝法测定蛋白质含量、硫酸咔唑法测定糖醛酸含量、DNS法测定还原糖含量，碘碘化钾颜色反应，判断是否为淀粉多糖。并采用红外光谱法进行IR分析，分析主要官能团、判断糖苷键的构型。通过对样品进行衍生化，采用气相色谱法（GC）对单糖组成进行分析。采用高碘酸氧化和Smith降解，判断糖苷键的位置、支链的长短及分支的位置。采用气相色谱法（GC）对结果进行分析。
3 实验方法
3.1 仪器与材料
实验中所需的具体试剂与材料见表1。
表1 实验所需材料与试剂
名称
规格
生产厂家
石斛
广州科博世佳科技有限公司
95%乙醇
分析纯
天津基准化学试剂有限公司
硫酸
分析纯
莱阳市康德化工有限公司
石油醚
分析纯
上海久亿化学试剂有限公司
无水乙醇
分析纯
上海久亿化学试剂有限公司
苯酚
分析纯
上海凌峰化学试剂有限公司
葡萄糖
分析纯
天津恒兴化学试剂有限公司
考马斯亮蓝G250
分析纯
国药集团化学试剂有限公司
续上表
磷酸
分析纯
中国宿州化学试剂有限公司
牛血清蛋白
分析纯
上海奥宇生物科技有限公司
溴化钾
分析纯
济宁百川化工有限公司
3,5二硝基水杨酸
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