麦秆粉添加氨基酸水解液研制木霉菌种固体的研究
摘要：木霉具有广泛适应性、拮抗多样性和寄生广谱性的特点，是一种很有潜力的生防菌。本研究利用小麦秸秆粉添加氨基酸水解液后进行浅盘发酵大量生产木霉固体菌剂，通过优化发酵条件，获得最佳的产厚垣孢子条件，并可大大降低木霉生物有机肥工业生产的成本，结果表明：在稀释50倍的氨基酸浸泡12小时后调节pH到3.5条件下木霉发酵效果最佳，可以获得最大的木霉厚垣孢子量；辣椒和黄瓜的大田试验结果表明，以化肥作为对照，以有机肥和生物有机肥代替不同量化肥作为处理测定辣椒和黄瓜定殖20天与40天的茎粗和株高。结果表明木霉对辣椒和黄瓜都有显著的促生效果。
目录
摘要1
键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料2
1.1.1供示木霉菌种2
1.1.2供试培养基2
1.1.3秸秆粉2
1.1.4 辣椒正常苗和菌苗以及黄瓜苗2
1.1.5 氨基酸原液及有机肥3
1.2方法3
1.2.1 木霉孢子液的准备3
1.2.2浅盘发酵配方优化3
1.2.3传统平板计数法3
1.2.4辣椒大田试验3
1.2.5黄瓜大田试验5
2结果与分析5
2.1木霉浅盘发酵优化结果5
2.2木霉对辣椒的促生效果7
2.3木霉对黄瓜的促生效果8
3讨论9
3.1木霉浅盘发酵配方的化9
3.2有机肥对辣椒的促生效果9
3.3生物有机肥对辣椒的促生效果 10
3.4有机肥和生物有机肥的区别10
3.5有机肥和木霉对黄瓜的促生效果10
致谢10
参考文献11
麦秆粉添加酸解氨基酸水解液研制固体木霉菌种研究
引言
引言
木霉属（Trichoderma spp.）真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科，是一类分布广泛的土壤习居菌，常见于植物残体及动物粪便上，是一种重要的生防菌[12]。We
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
inding[3]首先发表了木素木霉（Trichoderma lignum）对几种土壤真菌的拮抗作用的研究结果。其后，人们对木霉的生物防治潜力产生了极大的兴趣，相继木霉对植物病原真菌的拮抗作用及其机制展开了大量的研究。近年来人们发现，木霉不仅对植物病原真菌具有拮抗效应，还能促进植物的生长。木霉对辣椒、莴苣、黄瓜、白菜、豌豆、花生、长春花和菊花等多种作物具有明显的促生效应，尤其是哈茨木霉和康宁木霉能够显著提高马铃薯、烟草和红萝卜的发芽率、出苗率及干重，深绿木霉可以提高黑麦草幼芽生长速度和叶绿素含量[46]。
生物有机肥是一种含有大量有效功能菌的肥料，该肥料施入土壤后可使作物根系周围的有益微生物大量繁殖，发挥自生固氮作用或联合固氮作用，可以拮抗部分病原微生物，溶解土壤中难容化合物供给作物吸收或分泌生长激素，增加土壤向作物提供养分的能力，并促进作物的生长[78]。目前市面上销售的生物有机肥主要是经过二次固体发酵生产出来的芽孢杆菌类生物有机肥，很少有专门的木霉类生物有机肥，其主要原因是木霉很难经过二次固体发酵进行大规模化的生产。
我国的秸秆资源非常丰富，占全世界秸秆总产量的2030%[9]，种类繁多、数量庞大，分布广泛，开发利用潜力巨大。作为一种可循环利用的自然资源，若不经妥善处理，进入环境后将会破坏生态环境。据相关数据表明，其中我国年产各类小麦秸秆约9亿吨，但有效利用率极低，只有少部分被用作牲口饲料，约10%，绝大部分被随意弃置或者就地焚烧[10]，造成严重的环境污染问题，加强对农作物秸秆的综合利用，不仅是解决环境问题的需要，更是转变农业生产发展方式的需要。已有报道表明，敖新宇等通过玉米秸秆添加麦麸进行生防木霉发酵固体研究，在最佳配方和环境下，可以达到7.6*10^9个/g[6]。
本次实验主要想利用小麦秸秆添加氨基酸水解液进行木霉固体发酵，寻求最佳的浅盘发酵条件，降低木霉生产的成本。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 供示木霉菌种
供试木霉菌株为：哈茨木霉NJAU4742，由大学植物营养学实验室多年前筛选所得。
1．1．2 供试培养基
培养基种类有PDA培养基、木霉基础培养基。
PDA培养基：马铃薯洗净去皮切碎称取200g，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加1020g葡萄糖，充分溶解后趁热纱布过滤，分装在500ML的三角瓶中，每个200300ML，121℃灭菌20min冷却后贮存备用。
木霉基础培养基：MgSO4养基：L趁热纱布过滤、K2HPO4 0.9g、KCl 0.15g，（NH4）2SO4 1g、蔗糖3g、五氯硝基苯（PCNB的75％可湿性粉剂）0.2g、孟加拉红（五氯四碘荧光燃料C20H4O5Cl4）0.033g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，调pH至6.0。
1．1．3 秸秆粉 学校向农场购买得到干燥的秸秆，通过大型工业机器粉碎所得。
1．1．4 辣椒正常苗和菌苗以及黄瓜苗 种子是在市场上买的，通过用10%的次氯酸钠水溶液浸泡种子30分钟，然后用去离子水洗涤34次，放在30℃培养箱中催芽。然后放在育苗盘生长，每格放2粒吐白的种子。给生长5 天辣椒苗每株接种5%的1毫升菌种得到菌苗。
1．1．5 氨基酸原液及有机肥 氨基酸是由江阴联业生物有限公司生产的，主要是通过酸解含大量蛋白质的废弃物，如各种羽毛、动物残体及尸体，主要是死猪尸体。有机肥是由江阴联业生物有机肥有限公司生产。
1．2 方法
1．2．1 木霉孢子液的准备 PDA培养基中按照1%接入木霉菌种，在28℃180rpm的摇床培养7天，得到绿色菌液。
1．2．2 浅盘发酵配方优化
主要是优化不同稀释倍数的氨基酸水解液、秸秆浸泡不同时间以及pH对木霉固体发酵产孢的影响。
秸秆浸泡不同时间对木霉发酵影响：小麦秸秆装作细孔的6个网袋中，将网袋完全浸泡在稀释了45倍的氨基酸液1L中，分别浸泡4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时。每个处理各干秸秆100g。然后将pH调整为3.5，含水量约为70%接菌。充分混匀，分别均匀的分装在3个一次性饭盒中，盖盖子时，在饭盒其中一角垫上一根牙签，保持有氧发酵，放入28℃左右的发酵室中培养7天。
不同稀释倍数氨基酸对木霉发酵影响：小麦秸秆装作细孔的7个网袋中，将网袋完全浸泡在1L的氨基酸水解液里12小时，氨基酸稀释倍数为：20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍。每个处理的秸秆重量为100g，然后将pH调整为3.5，含水量约为70%接入木霉菌液。充分混匀，分别均匀的分装在3个一次性饭盒中，盖盖子时，在饭盒其中一角垫上一根牙签，保持有氧发酵，放入28℃左右的发酵室中培养7天。
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摘要1
键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料2
1.1.1供示木霉菌种2
1.1.2供试培养基2
1.1.3秸秆粉2
1.1.4 辣椒正常苗和菌苗以及黄瓜苗2
1.1.5 氨基酸原液及有机肥3
1.2方法3
1.2.1 木霉孢子液的准备3
1.2.2浅盘发酵配方优化3
1.2.3传统平板计数法3
1.2.4辣椒大田试验3
1.2.5黄瓜大田试验5
2结果与分析5
2.1木霉浅盘发酵优化结果5
2.2木霉对辣椒的促生效果7
2.3木霉对黄瓜的促生效果8
3讨论9
3.1木霉浅盘发酵配方的化9
3.2有机肥对辣椒的促生效果9
3.3生物有机肥对辣椒的促生效果 10
3.4有机肥和生物有机肥的区别10
3.5有机肥和木霉对黄瓜的促生效果10
致谢10
参考文献11
麦秆粉添加酸解氨基酸水解液研制固体木霉菌种研究
引言
引言
木霉属（Trichoderma spp.）真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、丛梗孢科，是一类分布广泛的土壤习居菌，常见于植物残体及动物粪便上，是一种重要的生防菌[12]。We
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
inding[3]首先发表了木素木霉（Trichoderma lignum）对几种土壤真菌的拮抗作用的研究结果。其后，人们对木霉的生物防治潜力产生了极大的兴趣，相继木霉对植物病原真菌的拮抗作用及其机制展开了大量的研究。近年来人们发现，木霉不仅对植物病原真菌具有拮抗效应，还能促进植物的生长。木霉对辣椒、莴苣、黄瓜、白菜、豌豆、花生、长春花和菊花等多种作物具有明显的促生效应，尤其是哈茨木霉和康宁木霉能够显著提高马铃薯、烟草和红萝卜的发芽率、出苗率及干重，深绿木霉可以提高黑麦草幼芽生长速度和叶绿素含量[46]。
生物有机肥是一种含有大量有效功能菌的肥料，该肥料施入土壤后可使作物根系周围的有益微生物大量繁殖，发挥自生固氮作用或联合固氮作用，可以拮抗部分病原微生物，溶解土壤中难容化合物供给作物吸收或分泌生长激素，增加土壤向作物提供养分的能力，并促进作物的生长[78]。目前市面上销售的生物有机肥主要是经过二次固体发酵生产出来的芽孢杆菌类生物有机肥，很少有专门的木霉类生物有机肥，其主要原因是木霉很难经过二次固体发酵进行大规模化的生产。
我国的秸秆资源非常丰富，占全世界秸秆总产量的2030%[9]，种类繁多、数量庞大，分布广泛，开发利用潜力巨大。作为一种可循环利用的自然资源，若不经妥善处理，进入环境后将会破坏生态环境。据相关数据表明，其中我国年产各类小麦秸秆约9亿吨，但有效利用率极低，只有少部分被用作牲口饲料，约10%，绝大部分被随意弃置或者就地焚烧[10]，造成严重的环境污染问题，加强对农作物秸秆的综合利用，不仅是解决环境问题的需要，更是转变农业生产发展方式的需要。已有报道表明，敖新宇等通过玉米秸秆添加麦麸进行生防木霉发酵固体研究，在最佳配方和环境下，可以达到7.6*10^9个/g[6]。
本次实验主要想利用小麦秸秆添加氨基酸水解液进行木霉固体发酵，寻求最佳的浅盘发酵条件，降低木霉生产的成本。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 供示木霉菌种
供试木霉菌株为：哈茨木霉NJAU4742，由大学植物营养学实验室多年前筛选所得。
1．1．2 供试培养基
培养基种类有PDA培养基、木霉基础培养基。
PDA培养基：马铃薯洗净去皮切碎称取200g，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加1020g葡萄糖，充分溶解后趁热纱布过滤，分装在500ML的三角瓶中，每个200300ML，121℃灭菌20min冷却后贮存备用。
木霉基础培养基：MgSO4养基：L趁热纱布过滤、K2HPO4 0.9g、KCl 0.15g，（NH4）2SO4 1g、蔗糖3g、五氯硝基苯（PCNB的75％可湿性粉剂）0.2g、孟加拉红（五氯四碘荧光燃料C20H4O5Cl4）0.033g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，调pH至6.0。
1．1．3 秸秆粉 学校向农场购买得到干燥的秸秆，通过大型工业机器粉碎所得。
1．1．4 辣椒正常苗和菌苗以及黄瓜苗 种子是在市场上买的，通过用10%的次氯酸钠水溶液浸泡种子30分钟，然后用去离子水洗涤34次，放在30℃培养箱中催芽。然后放在育苗盘生长，每格放2粒吐白的种子。给生长5 天辣椒苗每株接种5%的1毫升菌种得到菌苗。
1．1．5 氨基酸原液及有机肥 氨基酸是由江阴联业生物有限公司生产的，主要是通过酸解含大量蛋白质的废弃物，如各种羽毛、动物残体及尸体，主要是死猪尸体。有机肥是由江阴联业生物有机肥有限公司生产。
1．2 方法
1．2．1 木霉孢子液的准备 PDA培养基中按照1%接入木霉菌种，在28℃180rpm的摇床培养7天，得到绿色菌液。
1．2．2 浅盘发酵配方优化
主要是优化不同稀释倍数的氨基酸水解液、秸秆浸泡不同时间以及pH对木霉固体发酵产孢的影响。
秸秆浸泡不同时间对木霉发酵影响：小麦秸秆装作细孔的6个网袋中，将网袋完全浸泡在稀释了45倍的氨基酸液1L中，分别浸泡4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时。每个处理各干秸秆100g。然后将pH调整为3.5，含水量约为70%接菌。充分混匀，分别均匀的分装在3个一次性饭盒中，盖盖子时，在饭盒其中一角垫上一根牙签，保持有氧发酵，放入28℃左右的发酵室中培养7天。
不同稀释倍数氨基酸对木霉发酵影响：小麦秸秆装作细孔的7个网袋中，将网袋完全浸泡在1L的氨基酸水解液里12小时，氨基酸稀释倍数为：20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍。每个处理的秸秆重量为100g，然后将pH调整为3.5，含水量约为70%接入木霉菌液。充分混匀，分别均匀的分装在3个一次性饭盒中，盖盖子时，在饭盒其中一角垫上一根牙签，保持有氧发酵，放入28℃左右的发酵室中培养7天。
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