hplc法测定羟苯甲酯的含量研究【字数：9278】
摘 要羟苯甲酯在化妆品、食品以及药物制剂中广泛用作抗菌防腐剂，它可单独使用，也可以和其他的抗菌防腐剂联合使用。本实验采用HPLC法对羟苯甲酯进行了快速、高效地检测，并对色谱条件进行优化。采用的是Thermo Sciencific Sydcranis C18(150mm×4.6mm,3μm)色谱柱,流动相A甲醇-1%冰醋酸(60: 40)，流动相B甲醇，比例为90:10进行等度洗脱，流速是0.6mL/min，柱温为25℃,自动进样器温度为5℃，检测波长254nm，进样量是20μL，检测羟苯甲酯的含量。结果表明羟苯甲酯在检测质量浓度范围内，响应值与浓度应呈良好线性，线性方程为y = 191531x + 325837（r=0.9996）。羟苯甲酯的回收率在98.0%~102.0%范围内，均值为99.6%，RSD为0.9%。精密度在99.0%-99.8%之间，方法耐用性的差异值始终不大于初始值的0.3%。
目 录
1. 前言1
1.1 羟苯甲酯概述1
1.1.1 羟苯甲酯简介1
1.1.2 羟苯甲酯功能与应用1
1.1.3 羟苯甲酯稳定性与贮藏条件1
1.1.4 羟苯甲酯安全1
1.1.5 羟苯甲酯配伍禁忌1
1.2 目前国内检测现状2
1.2.1在眼用制剂方面2
1.2.2其它方面3
2. 实验部分4
2.1实验主要的仪器设备4
2.2 实验试剂及溶液配置方法5
2.2.1实验试剂及药品5
2.2.2实验溶液配置方法6
2.3色谱条件的优化7
2.3.1流动相比例的考查7
2.3.2柱温的考查 8
2.3.3流速的考查8
2.3.4供试品溶液浓度的考查9
3. 方法验证内容与结果10
3.1验证步骤10
3.1.1 方法专属性测定与结果10
3.1.2 线性范围测定与结果12
3.1.3方法精密度测定与结果15
3.1.4 方法中间精密度测定与结果17
3.1. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
5 方法准确度测定与结果20
3.1.6 耐用性测定与结果21
4. 结论24
参考文献25
致谢26 1．前言
1.1 羟苯甲酯概述
1.1.1 羟苯甲酯简介
羟苯甲酯，别名为对羟基苯甲酸甲酯，无色或白色的结晶粉末，极微溶于水，易溶于醇和丙酮、醚，沸点为270280℃。分子式是C8H8O3、分子量为152.15。在食品、有机合成、化妆品和医药等方面被用作杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。
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图1.1 羟苯甲酯结构式
1.1.2 羟苯甲酯功能与应用
羟苯甲酯常常被用作食品、化妆品以及药物制剂中的抗菌防腐剂。它可以单独使用或与其他苄酯和其他的抗菌防组合使用。苄基酯不仅在宽pH内有效，而且在酵母和霉菌中也有效，并且具有广范的抗菌性质。然而，随着烃基链长度的增加，抗菌活性增加，但水溶性降低。因此，为了获得有效的抗菌和防腐效果，通常使用苯氧基甲基酯的混合物。
1.1.3 羟苯甲酯稳定性与贮藏条件
首先，对羟基苯甲酸甲酯水溶液的pH值为36时，可以通过在120℃下高压灭菌20min而不发生降解。其次，pH值为36的水溶液通常在室温下稳定4年(降解不超过10%) ,而pH值为8或更高的水溶液迅速水解。应此可以将对羟基苯甲酸甲酯放在密闭的容器中，并储存在阴凉干燥处[1]。
1.1.4 羟苯甲酯安全
在化妆用品和口服制剂中，羟苯甲酯和其他的羟苯酯类常常被用作抗菌防腐剂。但是因为潜在的刺激性，就不适合用来做注射剂和眼用制剂的抗菌防腐剂。这是由于对皮肤中对羟基苯甲酸甲酯的酶代谢物的免疫应答有关。
1.1.5 羟苯甲酯配伍禁忌
在非离子表面活性剂的存在下，对对羟基苯甲酸甲酯及其羟基苯基酯的抗防腐和抗菌活性由于胶束的形成而具有显著的效果。然而，实验表明：丙二醇(10%) 不仅在非离子表面活性剂存在下增强对羟基苯甲酸甲酯类的抗菌活性，而且还防止聚山梨醇80和对羟基苯甲酸甲酯之间的反应。 还与以下化合物不相容:海藻酸钠、黄胶、膨润土、阿托品、滑石、挥发油、山梨糖醇和三硅酸镁，它与一些糖和相关的甾醇反应。据报道，根据塑料和赋形剂的类型，对羟基苯甲酸甲酯可被塑料吸附。羟基苯甲酸酯在铁存在下变色，并且可以在弱碱和强酸存在下发生水解。
1.2 目前国内的检测现状
1.2.1 在眼用制剂方面
眼用制剂在使用期需要无菌，并且添加抑菌剂是必要且重要的。诺氟沙星滴眼液可加入适宜浓度的抑菌剂，根据 2015 年版的《中国药典(二部)》规定，可加入一定浓度的抑菌剂，且明确规定了如使用羟苯甲酯、羟苯丙酯为抑菌剂时，需测定2 种抑菌剂含量[2]。为了更好地把控滴眼液的质量，在材料的基础上[36]，实验人员开发了诺氟沙星滴眼液中常用的抑菌剂如对羟基苯甲酸甲酯、羟乙酯、羟丙基丙酯的同时测定方法。色谱柱采用的是Phecjk nkdcs ex Gswwni C18柱，流动相采用的是1%的比例，冰乙酸溶液－甲醇 (50∶50) ，流速采取的2.0 mL / min，检测波长是265 nm，进样量选取的是20μL，柱温为20℃。结果表明：其线性范围分别0.95～44.50μg / mL，5.02～ 52.70μg / mL，1.05 ～41.64μg / mL，加样回收率分别为 98.37% ，97.19% ，99.34% ，RSD 分别为 1.34% ，1.43%，0.80% ( n = 9 ) 。最后，该方法准确，特异，稳定且无干扰。
之前的测试标准是使用IPC测定极性更高的托吡卡胺，但是由于配方中存在的中等极性的羟基苯烷基酯防腐剂干扰了测定，甚至出现了包合峰：羟基苯甲酸酯峰和托吡卡胺峰。因此，在流动相选择中，水相选择为5mmol.L1乙酸铵和有机相选择为乙腈的体系，还有水相的pH值选择为5.5，以此减少拖尾。同时，调整两相的比例，发现羟乙基酯的容量因子受比例变化的影响很大。最后水相与有机相的比例为70:30，不仅使待测成分得到分离，而且分析时间适中，使3个化合物同时被测定。色谱柱采用C18柱并进行耐久性测试，检测波长选择为256nm。
目 录
1. 前言1
1.1 羟苯甲酯概述1
1.1.1 羟苯甲酯简介1
1.1.2 羟苯甲酯功能与应用1
1.1.3 羟苯甲酯稳定性与贮藏条件1
1.1.4 羟苯甲酯安全1
1.1.5 羟苯甲酯配伍禁忌1
1.2 目前国内检测现状2
1.2.1在眼用制剂方面2
1.2.2其它方面3
2. 实验部分4
2.1实验主要的仪器设备4
2.2 实验试剂及溶液配置方法5
2.2.1实验试剂及药品5
2.2.2实验溶液配置方法6
2.3色谱条件的优化7
2.3.1流动相比例的考查7
2.3.2柱温的考查 8
2.3.3流速的考查8
2.3.4供试品溶液浓度的考查9
3. 方法验证内容与结果10
3.1验证步骤10
3.1.1 方法专属性测定与结果10
3.1.2 线性范围测定与结果12
3.1.3方法精密度测定与结果15
3.1.4 方法中间精密度测定与结果17
3.1. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
5 方法准确度测定与结果20
3.1.6 耐用性测定与结果21
4. 结论24
参考文献25
致谢26 1．前言
1.1 羟苯甲酯概述
1.1.1 羟苯甲酯简介
羟苯甲酯，别名为对羟基苯甲酸甲酯，无色或白色的结晶粉末，极微溶于水，易溶于醇和丙酮、醚，沸点为270280℃。分子式是C8H8O3、分子量为152.15。在食品、有机合成、化妆品和医药等方面被用作杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。
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图1.1 羟苯甲酯结构式
1.1.2 羟苯甲酯功能与应用
羟苯甲酯常常被用作食品、化妆品以及药物制剂中的抗菌防腐剂。它可以单独使用或与其他苄酯和其他的抗菌防组合使用。苄基酯不仅在宽pH内有效，而且在酵母和霉菌中也有效，并且具有广范的抗菌性质。然而，随着烃基链长度的增加，抗菌活性增加，但水溶性降低。因此，为了获得有效的抗菌和防腐效果，通常使用苯氧基甲基酯的混合物。
1.1.3 羟苯甲酯稳定性与贮藏条件
首先，对羟基苯甲酸甲酯水溶液的pH值为36时，可以通过在120℃下高压灭菌20min而不发生降解。其次，pH值为36的水溶液通常在室温下稳定4年(降解不超过10%) ,而pH值为8或更高的水溶液迅速水解。应此可以将对羟基苯甲酸甲酯放在密闭的容器中，并储存在阴凉干燥处[1]。
1.1.4 羟苯甲酯安全
在化妆用品和口服制剂中，羟苯甲酯和其他的羟苯酯类常常被用作抗菌防腐剂。但是因为潜在的刺激性，就不适合用来做注射剂和眼用制剂的抗菌防腐剂。这是由于对皮肤中对羟基苯甲酸甲酯的酶代谢物的免疫应答有关。
1.1.5 羟苯甲酯配伍禁忌
在非离子表面活性剂的存在下，对对羟基苯甲酸甲酯及其羟基苯基酯的抗防腐和抗菌活性由于胶束的形成而具有显著的效果。然而，实验表明：丙二醇(10%) 不仅在非离子表面活性剂存在下增强对羟基苯甲酸甲酯类的抗菌活性，而且还防止聚山梨醇80和对羟基苯甲酸甲酯之间的反应。 还与以下化合物不相容:海藻酸钠、黄胶、膨润土、阿托品、滑石、挥发油、山梨糖醇和三硅酸镁，它与一些糖和相关的甾醇反应。据报道，根据塑料和赋形剂的类型，对羟基苯甲酸甲酯可被塑料吸附。羟基苯甲酸酯在铁存在下变色，并且可以在弱碱和强酸存在下发生水解。
1.2 目前国内的检测现状
1.2.1 在眼用制剂方面
眼用制剂在使用期需要无菌，并且添加抑菌剂是必要且重要的。诺氟沙星滴眼液可加入适宜浓度的抑菌剂，根据 2015 年版的《中国药典(二部)》规定，可加入一定浓度的抑菌剂，且明确规定了如使用羟苯甲酯、羟苯丙酯为抑菌剂时，需测定2 种抑菌剂含量[2]。为了更好地把控滴眼液的质量，在材料的基础上[36]，实验人员开发了诺氟沙星滴眼液中常用的抑菌剂如对羟基苯甲酸甲酯、羟乙酯、羟丙基丙酯的同时测定方法。色谱柱采用的是Phecjk nkdcs ex Gswwni C18柱，流动相采用的是1%的比例，冰乙酸溶液－甲醇 (50∶50) ，流速采取的2.0 mL / min，检测波长是265 nm，进样量选取的是20μL，柱温为20℃。结果表明：其线性范围分别0.95～44.50μg / mL，5.02～ 52.70μg / mL，1.05 ～41.64μg / mL，加样回收率分别为 98.37% ，97.19% ，99.34% ，RSD 分别为 1.34% ，1.43%，0.80% ( n = 9 ) 。最后，该方法准确，特异，稳定且无干扰。
之前的测试标准是使用IPC测定极性更高的托吡卡胺，但是由于配方中存在的中等极性的羟基苯烷基酯防腐剂干扰了测定，甚至出现了包合峰：羟基苯甲酸酯峰和托吡卡胺峰。因此，在流动相选择中，水相选择为5mmol.L1乙酸铵和有机相选择为乙腈的体系，还有水相的pH值选择为5.5，以此减少拖尾。同时，调整两相的比例，发现羟乙基酯的容量因子受比例变化的影响很大。最后水相与有机相的比例为70:30，不仅使待测成分得到分离，而且分析时间适中，使3个化合物同时被测定。色谱柱采用C18柱并进行耐久性测试，检测波长选择为256nm。
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