灵芝三萜酸提取工艺研究（一）
摘要：灵芝三萜酸是灵芝的主要成分之一，具有降血脂、抗癌、保肝等作用。研究目的是获得灵芝总三萜酸最佳提取工艺条件。以灵芝为原料，采用实验室常见的乙醇溶液浸提，磁力搅拌器搅拌，提取总灵芝三萜酸。以灵芝总三萜酸的含量为考察指标，考察了提取时间、温度、乙醇浓度三个因素对灵芝三萜酸提取率的影响，在单因素实验的基础上进行了响应曲面法优化，通过建立模型方程、显著性检验和响应曲面分析，获得最佳提取工艺为：提取时间 2 h、温度 60 ℃、乙醇浓度 95 %。实验结果与模型预测值相近。此条件下，灵芝三萜酸的提取率为3.67%。响应曲面法工艺简单，提取率高，可以用于灵芝总三萜酸的提取。该工艺条件为医药工业提取灵芝总三萜酸提供理论和实验依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法. 2
1．1 材料与试剂 2
1. 2 仪器与设备 2
1．3 实验方法 3
1.3.1 供试液制备 3
1.3.2 齐墩果酸标准曲线的绘制 3
1.3.3 总三萜酸含量测定 3
1.3.4 单因素实验设计 3
1.3.5 响应曲面法实验设计 3
2 结果与分析 5
2．1 齐墩果酸标准曲线 5
2．2 单因素实验结果 5
2．2．1 提取时间的影响 5
2．2．2 温度的影响 6
2．2．3 乙醇浓度的影响 6
2．3 响应曲面法实验设计结果与分析 6
2.3.1响应曲面法实验设计结果 6
2.3.2 建立模型方程与显著性检验 7
2.3.3 响应曲面分析 8
3 讨论 9
致谢 9
参考文献： 10
灵芝三萜酸提取工艺研究（一）
引言
引言: 灵芝（Ganoderma lucidum ）是一种珍贵的药用真菌，最有价值的为赤芝(G. lucidum)和紫芝(G. sinensis)[1]。灵芝能补气安神，止咳平喘，用于心神不宁，失眠心悸，
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
虚劳短气，肺虚咳喘，不思饮食等症状。在我国，灵芝作为药食两用的佳品历史悠久，关于其滋补强壮、扶正固本作用的论述可见于历代本草学专著中，尤以明代 《本草纲目》对灵芝的种类、产地、药性、功用等记载最为详细。灵芝对人体具有双向调节作用，所治病种，涉及心脑血管、消化、神经、内分泌、呼吸、运动等各个系统，尤其对肿瘤、肝脏病变、失眠以及衰老的防治作用最为显著[2]。灵芝中含有三萜类、多糖类、甾醇类、氨基多肽类、生物碱类化合物及呋喃衍生物、脂肪酸、无机元素等多种物质，而三萜酸具有多种功效，得到人们广泛研究。
灵芝三萜酸最先从赤芝中分离得到，目前从灵芝中已分离到的灵芝三萜酸达100多种，如灵芝酸A, B, C, D, E, F, G, I, L, MA, MD, MG等。灵芝三萜是灵芝的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗HIV1和HIV1蛋白酶的活性等作用[3]。Tang等研究发现，从灵芝菌丝体的甲醇提取物中分离得到的三萜类成分——灵芝酸T对人体的各种癌细胞具有细胞毒性[4]。Dudhgaonkar等研究中发现，灵芝三萜能够抑制脂多糖(LSP)引起的各种炎症反应[5]。 Mekkawy等从赤芝甲醇提取物中分离得到灵芝酸A和另外12种已知的三萜类化合物。在抗HIV1活性的初筛实验中，化合物灵芝醇F和灵芝酮三醇可抑制由HIV1诱导的MT24细胞的细胞毒性效应，两者IC100均为7.8 ug/mL[6]。
目前常见的灵芝三萜酸提取方法有传统浸提法、超声萃取法、超临界二氧化碳萃取法等。三萜类化合物难溶于水，易溶于有机溶剂，一般可用甲醇、乙醇或氯仿等有机溶剂提取。从灵芝子实体或抱子中提取三萜类物质时，溶剂浸提法花费时间长且得率较低，目前单一的浸提已被摒弃，而是在浸提基础上增加一些辅助提取手段。而超声辅助提取技术作为一种新技术，可在很多情况下大大缩短提取时间，如从人参中提取皂普，并且此技术易操作、实现，超声波处理能破坏灵芝的致密结构，提高三萜类物质得率，缩短提取时间[7]。但超声可能破坏待提取物的结构，使提取率下降。除此之外，超临界二氧化碳萃取方法[8]提取灵芝三萜酸，该方法安全、无毒，不会被提取物反应改变活性，被称为绿色生物分离技术，是当今世界上能够用于规模生产的最先进的分离萃取技术。
研究灵芝三萜酸提取工艺，是进一步研究其成分和药理作用的基础，可以为医药工业灵芝三萜酸的提取提供理论和实验依据，是比较有意义的一个课题。
响应曲面法工艺简单，提取率高，而且能反映多个因素的交互作用，是比较成熟、应用广泛的一种方法，是正交实验所不能及的，可以用来研究灵芝三萜酸提取工艺。
本实验采用实验室常见的乙醇溶液浸提，磁力搅拌器搅拌，提取灵芝三萜酸，比超声提取和溶剂回流方法温和，不易破坏要提取的物质结构。
笔者研究了不同电磁搅拌时间、提取温度、乙醇浓度对灵芝三萜酸的提取率的影响，先进行单因素实验考察，了解各单因素对灵芝三萜酸提取率的影响，获得每个因素的最佳工艺条件，在单因素实验结果的基础上，进行响应曲面法实验设计，通过建立模型方程、显著性检验和响应曲面分析进行工艺优化，获得总的最佳工艺条件，为医药工业提取灵芝总三萜酸提供理论和实验依据。
1 材料与方法.
1．1 材料与试剂
灵芝（安徽协和成药业饮片有限公司）；齐墩果酸标准品（上海源叶生物科技公司，HPLC≥98 %；无水乙醇（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；冰醋酸（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；高氯酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；香草醛（分析纯，上海瑞永生物科技有限公司）。
1.2 仪器与设备
SZCL—A型数显智能控温磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；EYELA水浴锅SB—2000(上海爱朗仪器有限公司)；Alpha1506紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司）；BS224S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；QE250五两装高速万能粉碎机（浙江屹立工贸有限公司）；烧杯、圆底烧瓶、量筒、玻璃棒等玻璃仪器。
1．3 实验方法
1.3.1 供试液制备
取100 g灵芝片于粉碎机中，粉碎15 s，粉碎3次直到成粉，取出后于密封袋中保存，共制备500 g灵芝细粉，备用。
准确称取灵芝粉1.0 g，150 ml圆底烧瓶中，加入乙醇溶液，在磁力搅拌下进行浸提。灵芝与乙醇溶液的物料比为1:20、电磁搅拌功率25 W，在不同的温度、乙醇浓度和提取时间下提取灵芝三萜酸，将提取液过滤去除药渣，滤液稀释、定容至100ml，备用。
目录
摘要 1
关键词 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法. 2
1．1 材料与试剂 2
1. 2 仪器与设备 2
1．3 实验方法 3
1.3.1 供试液制备 3
1.3.2 齐墩果酸标准曲线的绘制 3
1.3.3 总三萜酸含量测定 3
1.3.4 单因素实验设计 3
1.3.5 响应曲面法实验设计 3
2 结果与分析 5
2．1 齐墩果酸标准曲线 5
2．2 单因素实验结果 5
2．2．1 提取时间的影响 5
2．2．2 温度的影响 6
2．2．3 乙醇浓度的影响 6
2．3 响应曲面法实验设计结果与分析 6
2.3.1响应曲面法实验设计结果 6
2.3.2 建立模型方程与显著性检验 7
2.3.3 响应曲面分析 8
3 讨论 9
致谢 9
参考文献： 10
灵芝三萜酸提取工艺研究（一）
引言
引言: 灵芝（Ganoderma lucidum ）是一种珍贵的药用真菌，最有价值的为赤芝(G. lucidum)和紫芝(G. sinensis)[1]。灵芝能补气安神，止咳平喘，用于心神不宁，失眠心悸，
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
虚劳短气，肺虚咳喘，不思饮食等症状。在我国，灵芝作为药食两用的佳品历史悠久，关于其滋补强壮、扶正固本作用的论述可见于历代本草学专著中，尤以明代 《本草纲目》对灵芝的种类、产地、药性、功用等记载最为详细。灵芝对人体具有双向调节作用，所治病种，涉及心脑血管、消化、神经、内分泌、呼吸、运动等各个系统，尤其对肿瘤、肝脏病变、失眠以及衰老的防治作用最为显著[2]。灵芝中含有三萜类、多糖类、甾醇类、氨基多肽类、生物碱类化合物及呋喃衍生物、脂肪酸、无机元素等多种物质，而三萜酸具有多种功效，得到人们广泛研究。
灵芝三萜酸最先从赤芝中分离得到，目前从灵芝中已分离到的灵芝三萜酸达100多种，如灵芝酸A, B, C, D, E, F, G, I, L, MA, MD, MG等。灵芝三萜是灵芝的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗HIV1和HIV1蛋白酶的活性等作用[3]。Tang等研究发现，从灵芝菌丝体的甲醇提取物中分离得到的三萜类成分——灵芝酸T对人体的各种癌细胞具有细胞毒性[4]。Dudhgaonkar等研究中发现，灵芝三萜能够抑制脂多糖(LSP)引起的各种炎症反应[5]。 Mekkawy等从赤芝甲醇提取物中分离得到灵芝酸A和另外12种已知的三萜类化合物。在抗HIV1活性的初筛实验中，化合物灵芝醇F和灵芝酮三醇可抑制由HIV1诱导的MT24细胞的细胞毒性效应，两者IC100均为7.8 ug/mL[6]。
目前常见的灵芝三萜酸提取方法有传统浸提法、超声萃取法、超临界二氧化碳萃取法等。三萜类化合物难溶于水，易溶于有机溶剂，一般可用甲醇、乙醇或氯仿等有机溶剂提取。从灵芝子实体或抱子中提取三萜类物质时，溶剂浸提法花费时间长且得率较低，目前单一的浸提已被摒弃，而是在浸提基础上增加一些辅助提取手段。而超声辅助提取技术作为一种新技术，可在很多情况下大大缩短提取时间，如从人参中提取皂普，并且此技术易操作、实现，超声波处理能破坏灵芝的致密结构，提高三萜类物质得率，缩短提取时间[7]。但超声可能破坏待提取物的结构，使提取率下降。除此之外，超临界二氧化碳萃取方法[8]提取灵芝三萜酸，该方法安全、无毒，不会被提取物反应改变活性，被称为绿色生物分离技术，是当今世界上能够用于规模生产的最先进的分离萃取技术。
研究灵芝三萜酸提取工艺，是进一步研究其成分和药理作用的基础，可以为医药工业灵芝三萜酸的提取提供理论和实验依据，是比较有意义的一个课题。
响应曲面法工艺简单，提取率高，而且能反映多个因素的交互作用，是比较成熟、应用广泛的一种方法，是正交实验所不能及的，可以用来研究灵芝三萜酸提取工艺。
本实验采用实验室常见的乙醇溶液浸提，磁力搅拌器搅拌，提取灵芝三萜酸，比超声提取和溶剂回流方法温和，不易破坏要提取的物质结构。
笔者研究了不同电磁搅拌时间、提取温度、乙醇浓度对灵芝三萜酸的提取率的影响，先进行单因素实验考察，了解各单因素对灵芝三萜酸提取率的影响，获得每个因素的最佳工艺条件，在单因素实验结果的基础上，进行响应曲面法实验设计，通过建立模型方程、显著性检验和响应曲面分析进行工艺优化，获得总的最佳工艺条件，为医药工业提取灵芝总三萜酸提供理论和实验依据。
1 材料与方法.
1．1 材料与试剂
灵芝（安徽协和成药业饮片有限公司）；齐墩果酸标准品（上海源叶生物科技公司，HPLC≥98 %；无水乙醇（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；冰醋酸（分析纯，广东光华科技股份有限公司）；高氯酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；香草醛（分析纯，上海瑞永生物科技有限公司）。
1.2 仪器与设备
SZCL—A型数显智能控温磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）；EYELA水浴锅SB—2000(上海爱朗仪器有限公司)；Alpha1506紫外可见分光光度计（上海谱元仪器有限公司）；BS224S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；QE250五两装高速万能粉碎机（浙江屹立工贸有限公司）；烧杯、圆底烧瓶、量筒、玻璃棒等玻璃仪器。
1．3 实验方法
1.3.1 供试液制备
取100 g灵芝片于粉碎机中，粉碎15 s，粉碎3次直到成粉，取出后于密封袋中保存，共制备500 g灵芝细粉，备用。
准确称取灵芝粉1.0 g，150 ml圆底烧瓶中，加入乙醇溶液，在磁力搅拌下进行浸提。灵芝与乙醇溶液的物料比为1:20、电磁搅拌功率25 W，在不同的温度、乙醇浓度和提取时间下提取灵芝三萜酸，将提取液过滤去除药渣，滤液稀释、定容至100ml，备用。
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