功能菌sqr9定殖长期施不同肥料土壤效应研究
研究根际有益菌（PGPR）在不同肥料土壤中的定殖能力，能够为PGPR菌株的实际应用提供依据。本论文以具有促进植株生长、抑制土传病害功能的PGPR菌株解淀粉芽孢杆菌SQR9为模式菌株，通过土壤培育实验，研究了其定殖施用长期不同肥料土壤的效应，并探究了氨基酸促进其定殖的效果，研究结果表明SQR9在长期施化肥和有机肥土壤中均能有效定殖，前期在化肥和有机肥土壤中定殖无差异，后期更容易定殖于有机肥土壤中。氨基酸混合液能够促进菌株SQR9在土壤中的定殖，60天时，菌株SQR9的定殖并未对土壤中细菌总数和土壤性质产生显著影响。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
1材料与方法4
1.1实验材料 4
1.2实验设计 4
1.3实验方法 4
1.3.1涂布测定解淀粉芽孢杆菌SQR9的数量5
1.3.2测定土样中DNA含量及定量PCR测定不同处理细菌总数拷贝数5
1.3.3测定土壤速效磷含量5
1.3.4测定土样铵态氮和硝态氮含量 6
1.3.5测定土壤pH和EC6
1.4 数据分析6
2结果与分析7
2.1涂布培养实验结果7
2.2 定量PCR测定不同处理细菌总数的拷贝数结果9
2.3土壤速效磷含量测定结果11
2.4土壤铵态氮和硝态氮含量11
2.5土壤理化性质测定结果（土壤EC及pH）12
3讨论 13
致谢14
参考文献14
功能菌SQR9定殖长期施不同肥料土壤效应研究
引言
解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）为芽孢杆菌属，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在自然界中分布广泛，对人、畜无毒无害。解淀粉芽孢杆菌属于兼性厌氧菌，在LB培养基和牛肉膏蛋白胨培养基中培养时菌落呈淡黄色不透明形态，表面粗糙，有隆起，边缘不规则，均不产色素；液体培养静止时有菌膜形成；革兰氏染色呈阳性，杆状，可形成内生芽孢，呈椭圆形，两端钝圆，芽孢囊不膨大，中生到次端生，有 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
运动性。2007年公布的解淀粉芽孢杆菌FZB42的全基因组测序使得人们对这种具有多种次生代谢物生产能力的芽孢杆菌有了更深层次的认识，促进了对淀粉芽孢杆菌的生物利用。解淀粉芽孢杆菌作为一类重要的根际微生物，在其生长代谢过程中能产生多种抑菌物质，包括脂化类、多烯类、氨基酸类和核酸类等多种次生代谢产物及挥发性物质，这些抗菌物质能够有效抑制细菌、真菌、病毒等的生长，是其在土壤中能抑制病原菌的重要原因之一（陈华等，2008）。
解淀粉芽孢杆菌SQR9是一株分离自黄瓜根际的促生细菌，在黄瓜根表能有效定殖，并在盆栽实验和大田实验中能够有效防控黄瓜枯萎病和促进植株生长，与腐熟堆肥制成的生物有机肥已在农业生产中得到广泛应用。该菌种能够合成IAA，具有很强的植物促生作用，并且合成一部分挥发性促生物质促进拟南芥的生长；此外，它能够有效拮抗病原菌尖孢镰刀菌，在土壤环境下调控并控制尖孢镰刀菌的数量，可分泌多种脂肽和聚酮类拮抗物质；它具有很强根际定殖能为，迅速形成生物膜，并且会对根系分泌物具有趋化效应。
已有研究表明，在黄瓜生长时单独施用SQR9菌液，能够促进黄瓜植株的生长，显著增大黄瓜植株的株高、干质量、叶绿素含量和光合速率（袁玉娟，2017）。邵佳慧等（2014）通过盆栽实验验证了SQR9对植株生长的促进作用。曹云（2011）通过实验发现该菌种能强烈抑制土传枯萎病病原真菌黄瓜专化型，在盆栽和大田试验中表现出显著的促生和生防效果。另外，通过对峙实验证明，此菌种还能有效抑制引起香蕉枯萎病的尖孢镰刀菌古巴专化型的生长（张楠等，2014）。
鉴于以上众多研究所发现的解淀粉芽孢杆菌SQR9的促生和生防效果，因而开展本实验探究SQR9定殖于长期不同施肥土壤的效应，并探究氨基酸促进其定殖的效果，为研究根际有益菌（PGPR）在不同肥料土壤中的定殖能力提供基础，为PGPR菌株的实际应用提供依据。
1 材料与方法
实验材料
1．1．1 供试土壤
采自海南省香蕉园，且长期施用有机肥的土壤，土壤基本性质如下：ph5.75，速效磷：57.14mg/kg，速效钾 360mg/kg，电导率EC 43.7μS/cm；
采自海南省香蕉园，且长期施用化肥的土壤，土壤基本性质如下：ph4.44，速效磷：66.94mg/kg，速效钾 353mg/kg，电导率EC 114μS/cm；
采自南京市蔬菜所，且长期施用有机肥的土壤，土壤基本性质如下：ph7.56，有效磷：240mg/kg，速效钾 354mg/kg，电导率EC 371μS/cm；
采自南京市蔬菜所，且长期施用化肥的土壤，土壤基本性质如下：ph7.18，有效磷：233mg/kg，速效钾 325mg/kg，电导率EC 444μS/cm。
1．1．2 供试菌种
供试功能微生物为本实验室分离保存的具有防控土传病害和促进植物生长的根际促生菌解淀粉芽孢杆菌SQR9（Bacillus amyloliquefaciens SQR9）（Cao et al., 2011），该菌株为革兰氏阳性菌，寄存于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.5808。
1．1．3 培养基
LB培养基（1L）：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，pH 7.27.4，121℃下高压灭菌20min。
功能菌株SQR9选择性培养基（1L）：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，琼脂2%，pH 7.27.4，121℃高压灭菌20min。1%多粘菌素2ml，1%放线菌酮4ml（抗生素在培养基倒前冷却后加入）。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
1材料与方法4
1.1实验材料 4
1.2实验设计 4
1.3实验方法 4
1.3.1涂布测定解淀粉芽孢杆菌SQR9的数量5
1.3.2测定土样中DNA含量及定量PCR测定不同处理细菌总数拷贝数5
1.3.3测定土壤速效磷含量5
1.3.4测定土样铵态氮和硝态氮含量 6
1.3.5测定土壤pH和EC6
1.4 数据分析6
2结果与分析7
2.1涂布培养实验结果7
2.2 定量PCR测定不同处理细菌总数的拷贝数结果9
2.3土壤速效磷含量测定结果11
2.4土壤铵态氮和硝态氮含量11
2.5土壤理化性质测定结果（土壤EC及pH）12
3讨论 13
致谢14
参考文献14
功能菌SQR9定殖长期施不同肥料土壤效应研究
引言
解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）为芽孢杆菌属，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在自然界中分布广泛，对人、畜无毒无害。解淀粉芽孢杆菌属于兼性厌氧菌，在LB培养基和牛肉膏蛋白胨培养基中培养时菌落呈淡黄色不透明形态，表面粗糙，有隆起，边缘不规则，均不产色素；液体培养静止时有菌膜形成；革兰氏染色呈阳性，杆状，可形成内生芽孢，呈椭圆形，两端钝圆，芽孢囊不膨大，中生到次端生，有 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
运动性。2007年公布的解淀粉芽孢杆菌FZB42的全基因组测序使得人们对这种具有多种次生代谢物生产能力的芽孢杆菌有了更深层次的认识，促进了对淀粉芽孢杆菌的生物利用。解淀粉芽孢杆菌作为一类重要的根际微生物，在其生长代谢过程中能产生多种抑菌物质，包括脂化类、多烯类、氨基酸类和核酸类等多种次生代谢产物及挥发性物质，这些抗菌物质能够有效抑制细菌、真菌、病毒等的生长，是其在土壤中能抑制病原菌的重要原因之一（陈华等，2008）。
解淀粉芽孢杆菌SQR9是一株分离自黄瓜根际的促生细菌，在黄瓜根表能有效定殖，并在盆栽实验和大田实验中能够有效防控黄瓜枯萎病和促进植株生长，与腐熟堆肥制成的生物有机肥已在农业生产中得到广泛应用。该菌种能够合成IAA，具有很强的植物促生作用，并且合成一部分挥发性促生物质促进拟南芥的生长；此外，它能够有效拮抗病原菌尖孢镰刀菌，在土壤环境下调控并控制尖孢镰刀菌的数量，可分泌多种脂肽和聚酮类拮抗物质；它具有很强根际定殖能为，迅速形成生物膜，并且会对根系分泌物具有趋化效应。
已有研究表明，在黄瓜生长时单独施用SQR9菌液，能够促进黄瓜植株的生长，显著增大黄瓜植株的株高、干质量、叶绿素含量和光合速率（袁玉娟，2017）。邵佳慧等（2014）通过盆栽实验验证了SQR9对植株生长的促进作用。曹云（2011）通过实验发现该菌种能强烈抑制土传枯萎病病原真菌黄瓜专化型，在盆栽和大田试验中表现出显著的促生和生防效果。另外，通过对峙实验证明，此菌种还能有效抑制引起香蕉枯萎病的尖孢镰刀菌古巴专化型的生长（张楠等，2014）。
鉴于以上众多研究所发现的解淀粉芽孢杆菌SQR9的促生和生防效果，因而开展本实验探究SQR9定殖于长期不同施肥土壤的效应，并探究氨基酸促进其定殖的效果，为研究根际有益菌（PGPR）在不同肥料土壤中的定殖能力提供基础，为PGPR菌株的实际应用提供依据。
1 材料与方法
实验材料
1．1．1 供试土壤
采自海南省香蕉园，且长期施用有机肥的土壤，土壤基本性质如下：ph5.75，速效磷：57.14mg/kg，速效钾 360mg/kg，电导率EC 43.7μS/cm；
采自海南省香蕉园，且长期施用化肥的土壤，土壤基本性质如下：ph4.44，速效磷：66.94mg/kg，速效钾 353mg/kg，电导率EC 114μS/cm；
采自南京市蔬菜所，且长期施用有机肥的土壤，土壤基本性质如下：ph7.56，有效磷：240mg/kg，速效钾 354mg/kg，电导率EC 371μS/cm；
采自南京市蔬菜所，且长期施用化肥的土壤，土壤基本性质如下：ph7.18，有效磷：233mg/kg，速效钾 325mg/kg，电导率EC 444μS/cm。
1．1．2 供试菌种
供试功能微生物为本实验室分离保存的具有防控土传病害和促进植物生长的根际促生菌解淀粉芽孢杆菌SQR9（Bacillus amyloliquefaciens SQR9）（Cao et al., 2011），该菌株为革兰氏阳性菌，寄存于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.5808。
1．1．3 培养基
LB培养基（1L）：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，pH 7.27.4，121℃下高压灭菌20min。
功能菌株SQR9选择性培养基（1L）：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，琼脂2%，pH 7.27.4，121℃高压灭菌20min。1%多粘菌素2ml，1%放线菌酮4ml（抗生素在培养基倒前冷却后加入）。
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