铁棒锤中总生物碱酯型生物碱及多糖的含量测定(附件)
摘 要通过对铁棒锤中总生物碱、酯型生物碱及多糖进行含量测定，为临床合理有效使用药物提供科学依据。铁棒锤中总生物碱含量测定采用酸碱滴定法，铁棒锤中酯型生物碱和多糖含量都采用紫外分光光度法测定含量。分别测的铁棒锤中总生物碱、酯型生物碱和多糖含量为1.38%、0.46%和1.397%。对铁棒锤中总生物碱、酯型生物碱及多糖进行了含量测定，对具体的有效成分及毒性成分的含量测定，还有待进一步深入研究。 目 录
1 绪论
1.1铁棒锤的化学成分 1
1.1.1根部的化学成分 1
1.1.2地上的化学成分 2
1.2.铁棒锤的药理作用 2
1.2.1抗炎作用 2
1.2.2镇痛作用 2
1.2.3局麻作用 2
1.2.4治心律失常作用 2
1.2.5毒性 3
1.2.6解热作用 4
1.3铁棒锤的临床应用 4
1.4铁棒锤中生物碱的提取 5
1.5铁棒锤的炮制方法 5
1.6开发应用前景 5
2 实验部分
2.1材料、试剂及仪器 7
2.1.1材料 7
2.1.2试剂 7
2.1.3仪器 7
2.2方法和结果 7
2.2.1铁棒锤总生物碱含量测定 7
2.2.2铁棒锤中酯型生物碱含量测定 8
2.2.3铁棒锤中多糖含量测定 11
2.3讨论 14
结论 15
参考文献 16
致谢 18
1绪论
铁棒锤，又名铁牛七，是多年生草本植物，块根倒圆锥形。药源为毛茛科植物铁棒锤和伏毛铁棒锤的块根。多年生草本，高30～100cm。块根倒圆锥形，褐色。茎直立，不分枝，上部被短柔毛。叶互生，宽卵形，长3～5.5cm，掌状3全裂，裂片再作2～3深裂；小裂片线形，宽1～2.2mm，被稀疏毛绒；叶柄长4～5mm，上部叶近无柄。总状花序顶生，长8～20cm，总花梗密被伸展的黄色短柔毛；小苞片条形，萼片5，紫色，外面生短毛，上萼船状镰刀形；花瓣2，无毛，距短，弯曲呈钩状；雄蕊多数；心皮5
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
伏毛铁棒锤的块根。多年生草本，高30～100cm。块根倒圆锥形，褐色。茎直立，不分枝，上部被短柔毛。叶互生，宽卵形，长3～5.5cm，掌状3全裂，裂片再作2～3深裂；小裂片线形，宽1～2.2mm，被稀疏毛绒；叶柄长4～5mm，上部叶近无柄。总状花序顶生，长8～20cm，总花梗密被伸展的黄色短柔毛；小苞片条形，萼片5，紫色，外面生短毛，上萼船状镰刀形；花瓣2，无毛，距短，弯曲呈钩状；雄蕊多数；心皮5，离生，柱头单一。蓇葖果5枚，有毛，成熟后向内开裂，宿存花柱呈芒尖状；种子多数。花期8～9月。果期9～10月。生于山地草丛或林缘。分布于中国西藏、云南西北部、四川西部、青海、甘肃南部、陕西南部及河南西部等省。生于海拔20003000m的山顶、山坡、草地或林下。
伏毛铁棒锤，与上种相似，但花序上生紧贴的微柔毛，花蓝紫色，上面萼片近盔形。生于山地草丛中。分布四川西北部、陕西、甘肃、宁夏南部、青海、西藏北部、内蒙古北部等地。生于海拔2000m以上的山坡，梁顶及林缘草甸。
1.1铁棒锤的化学成分
1.1.1根部的化学成分
药材铁棒锤迄今研究得到的药用主要成分为生物碱。刘力敏等[1]用苯渗漉提取四川金沙江畔产的雪上一枝蒿，并经过酸提碱沉、二氯甲烷溶解萃取、中性氧化铝柱层析分离，获得了四个结晶的生物碱：去氧乌头碱（hypaconitine）、乌头碱（aconitine）、3乙酰乌头碱（3acetylaconitine）和雪乌碱，其中主要的生物碱是双酯型二萜生物碱，得率约为0.14%，3乙酰生物碱是从铁棒锤内首次分离得到的新生物碱。阎文玫等[2]用甲醇浸提伏毛铁棒锤的块根，经氯仿提取的生物碱通过硅胶G柱层析分离。除得到去氧乌头碱、3乙酰乌头碱、乌头碱外，还得到钠派林碱（napelline）及一种结构待定的生物碱。孙文基等[3]从铁棒锤的根中，经碱磨萃取、氧化铝层析，分离鉴定出的物质有β谷甾醇（βsitosterol）华北乌头碱（soogorine）和一种新的命名为牛七碱（szechenyine）的乌头碱，8去乙酰氨基8乙酰基3乙酰乌头碱，其中以华北乌头碱含量较高，为0.2%。
1.1.2地上部分化学成分
李洪刚等[4]首次对伏毛铁棒锤的地上部分进行了生物碱研究，并于块根部分的生物碱收率进行对照。得到的4中乌头碱。去氧乌头碱、3乙酰乌头碱、乌头碱、结晶待鉴定，与块根部分的生物碱成分基本一致，地上部分总碱收率为0.21%（块根部分总碱收率为0.31%），乌头碱收率为0.12%（块根中乌头碱收率为0.20%）。
1.2铁棒锤的药理作用
1.2.1 抗炎作用
铁棒锤中总碱以及乌头碱、3乙酰乌头碱、去氧乌头碱均具有抗炎活性。总碱0.15mg/kg、乌头碱和3乙酰乌头碱0.05mg/kg对大鼠蛋清性及甲醛性足趾肿具有显著的抑制作用，但对棉球性肉芽组织增生无明显影响。去氧乌头碱对多种急性渗出水肿性炎症也具有显著抑制作用，0.1mg/kg腹腔或皮下注射均能抑制角叉菜胶、甲醛等所致大鼠足趾肿胀，抑制组胺所致小鼠耳部炎症，但其对巴豆油性肉芽囊肿或棉球性组织增生均无明显影响。对于角叉菜胶性大鼠足趾肿，去氧乌头碱腹腔注射的ED50为0.42±0.06mg/kg,治疗的±0.02mg/kg，治疗指数为5.92[5]。
1.2.2 镇痛作用
铁棒锤中总碱具有显著的镇痛作用，其镇痛强度为吗啡的43.7倍，其主要有效镇痛成分为乌头碱、3乙酰乌头碱、脱氧乌头碱等[6]。乌头碱的作用见附子及川乌头条下。3乙酰乌头碱、脱氧乌头碱均具有显著外地人痛活性。醋酸扭体法脱氧乌头碱皮下注射的抑制小鼠扭体反应50%的剂量ID50为0.22±0.06mg/kg和0.24±0.05mg/kg，镇痛治疗指数分别为6.37及4.60[7]。
1.2.3 局麻作用
铁棒锤中总碱、乌头碱、3乙酰乌头碱均有显著局部麻醉效果，肌注或皮下注射均有效[8]。总碱的麻醉强度为卡因的14倍，盐酸布鲁卡因的159倍。铁棒锤总碱注射液，成人每次肌注1ml，2L次/d，作为非成瘾性镇痛剂，用于创伤性手术疼痛及晚期肿瘤疼痛，获得非常好的效果。
1.2.4 致心律失常作用
铁棒锤中与乌头碱相似，3乙酰乌头碱及去氧乌头碱也均有致心律失常作用，但小鼠静注诱发心律失常的剂量却较乌头碱为高，3乙酰乌头碱为乌头碱的2.85倍，去氧乌头碱则为乌头碱的7.2倍，且诱发成功率也远较之为低，且呼吸抑制轻，仅为乌头碱的38%，3乙酰乌头碱静注对大鼠的致心律失常剂量为0.097mg/kg。体内过程 3乙酰乌头碱血药时间曲线符合开放型三室模型。各组织中分布以胆囊含量最高，肝、肾和肺次之。少量药物能通过胎盘进入胎儿。静脉注射后主要由尿排出，大部分以代谢产物形式排出，部分以原形物排出。
1.2.5 毒性
铁棒锤具有大毒，主要为生物碱类，其化学成分既是有效成分又是有毒成分。铁棒锤的主要化学成分有：雪乌头碱（penduline）、次乌头碱(hypaconitine)、乌头碱(aconitine)、
1 绪论
1.1铁棒锤的化学成分 1
1.1.1根部的化学成分 1
1.1.2地上的化学成分 2
1.2.铁棒锤的药理作用 2
1.2.1抗炎作用 2
1.2.2镇痛作用 2
1.2.3局麻作用 2
1.2.4治心律失常作用 2
1.2.5毒性 3
1.2.6解热作用 4
1.3铁棒锤的临床应用 4
1.4铁棒锤中生物碱的提取 5
1.5铁棒锤的炮制方法 5
1.6开发应用前景 5
2 实验部分
2.1材料、试剂及仪器 7
2.1.1材料 7
2.1.2试剂 7
2.1.3仪器 7
2.2方法和结果 7
2.2.1铁棒锤总生物碱含量测定 7
2.2.2铁棒锤中酯型生物碱含量测定 8
2.2.3铁棒锤中多糖含量测定 11
2.3讨论 14
结论 15
参考文献 16
致谢 18
1绪论
铁棒锤，又名铁牛七，是多年生草本植物，块根倒圆锥形。药源为毛茛科植物铁棒锤和伏毛铁棒锤的块根。多年生草本，高30～100cm。块根倒圆锥形，褐色。茎直立，不分枝，上部被短柔毛。叶互生，宽卵形，长3～5.5cm，掌状3全裂，裂片再作2～3深裂；小裂片线形，宽1～2.2mm，被稀疏毛绒；叶柄长4～5mm，上部叶近无柄。总状花序顶生，长8～20cm，总花梗密被伸展的黄色短柔毛；小苞片条形，萼片5，紫色，外面生短毛，上萼船状镰刀形；花瓣2，无毛，距短，弯曲呈钩状；雄蕊多数；心皮5
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
伏毛铁棒锤的块根。多年生草本，高30～100cm。块根倒圆锥形，褐色。茎直立，不分枝，上部被短柔毛。叶互生，宽卵形，长3～5.5cm，掌状3全裂，裂片再作2～3深裂；小裂片线形，宽1～2.2mm，被稀疏毛绒；叶柄长4～5mm，上部叶近无柄。总状花序顶生，长8～20cm，总花梗密被伸展的黄色短柔毛；小苞片条形，萼片5，紫色，外面生短毛，上萼船状镰刀形；花瓣2，无毛，距短，弯曲呈钩状；雄蕊多数；心皮5，离生，柱头单一。蓇葖果5枚，有毛，成熟后向内开裂，宿存花柱呈芒尖状；种子多数。花期8～9月。果期9～10月。生于山地草丛或林缘。分布于中国西藏、云南西北部、四川西部、青海、甘肃南部、陕西南部及河南西部等省。生于海拔20003000m的山顶、山坡、草地或林下。
伏毛铁棒锤，与上种相似，但花序上生紧贴的微柔毛，花蓝紫色，上面萼片近盔形。生于山地草丛中。分布四川西北部、陕西、甘肃、宁夏南部、青海、西藏北部、内蒙古北部等地。生于海拔2000m以上的山坡，梁顶及林缘草甸。
1.1铁棒锤的化学成分
1.1.1根部的化学成分
药材铁棒锤迄今研究得到的药用主要成分为生物碱。刘力敏等[1]用苯渗漉提取四川金沙江畔产的雪上一枝蒿，并经过酸提碱沉、二氯甲烷溶解萃取、中性氧化铝柱层析分离，获得了四个结晶的生物碱：去氧乌头碱（hypaconitine）、乌头碱（aconitine）、3乙酰乌头碱（3acetylaconitine）和雪乌碱，其中主要的生物碱是双酯型二萜生物碱，得率约为0.14%，3乙酰生物碱是从铁棒锤内首次分离得到的新生物碱。阎文玫等[2]用甲醇浸提伏毛铁棒锤的块根，经氯仿提取的生物碱通过硅胶G柱层析分离。除得到去氧乌头碱、3乙酰乌头碱、乌头碱外，还得到钠派林碱（napelline）及一种结构待定的生物碱。孙文基等[3]从铁棒锤的根中，经碱磨萃取、氧化铝层析，分离鉴定出的物质有β谷甾醇（βsitosterol）华北乌头碱（soogorine）和一种新的命名为牛七碱（szechenyine）的乌头碱，8去乙酰氨基8乙酰基3乙酰乌头碱，其中以华北乌头碱含量较高，为0.2%。
1.1.2地上部分化学成分
李洪刚等[4]首次对伏毛铁棒锤的地上部分进行了生物碱研究，并于块根部分的生物碱收率进行对照。得到的4中乌头碱。去氧乌头碱、3乙酰乌头碱、乌头碱、结晶待鉴定，与块根部分的生物碱成分基本一致，地上部分总碱收率为0.21%（块根部分总碱收率为0.31%），乌头碱收率为0.12%（块根中乌头碱收率为0.20%）。
1.2铁棒锤的药理作用
1.2.1 抗炎作用
铁棒锤中总碱以及乌头碱、3乙酰乌头碱、去氧乌头碱均具有抗炎活性。总碱0.15mg/kg、乌头碱和3乙酰乌头碱0.05mg/kg对大鼠蛋清性及甲醛性足趾肿具有显著的抑制作用，但对棉球性肉芽组织增生无明显影响。去氧乌头碱对多种急性渗出水肿性炎症也具有显著抑制作用，0.1mg/kg腹腔或皮下注射均能抑制角叉菜胶、甲醛等所致大鼠足趾肿胀，抑制组胺所致小鼠耳部炎症，但其对巴豆油性肉芽囊肿或棉球性组织增生均无明显影响。对于角叉菜胶性大鼠足趾肿，去氧乌头碱腹腔注射的ED50为0.42±0.06mg/kg,治疗的±0.02mg/kg，治疗指数为5.92[5]。
1.2.2 镇痛作用
铁棒锤中总碱具有显著的镇痛作用，其镇痛强度为吗啡的43.7倍，其主要有效镇痛成分为乌头碱、3乙酰乌头碱、脱氧乌头碱等[6]。乌头碱的作用见附子及川乌头条下。3乙酰乌头碱、脱氧乌头碱均具有显著外地人痛活性。醋酸扭体法脱氧乌头碱皮下注射的抑制小鼠扭体反应50%的剂量ID50为0.22±0.06mg/kg和0.24±0.05mg/kg，镇痛治疗指数分别为6.37及4.60[7]。
1.2.3 局麻作用
铁棒锤中总碱、乌头碱、3乙酰乌头碱均有显著局部麻醉效果，肌注或皮下注射均有效[8]。总碱的麻醉强度为卡因的14倍，盐酸布鲁卡因的159倍。铁棒锤总碱注射液，成人每次肌注1ml，2L次/d，作为非成瘾性镇痛剂，用于创伤性手术疼痛及晚期肿瘤疼痛，获得非常好的效果。
1.2.4 致心律失常作用
铁棒锤中与乌头碱相似，3乙酰乌头碱及去氧乌头碱也均有致心律失常作用，但小鼠静注诱发心律失常的剂量却较乌头碱为高，3乙酰乌头碱为乌头碱的2.85倍，去氧乌头碱则为乌头碱的7.2倍，且诱发成功率也远较之为低，且呼吸抑制轻，仅为乌头碱的38%，3乙酰乌头碱静注对大鼠的致心律失常剂量为0.097mg/kg。体内过程 3乙酰乌头碱血药时间曲线符合开放型三室模型。各组织中分布以胆囊含量最高，肝、肾和肺次之。少量药物能通过胎盘进入胎儿。静脉注射后主要由尿排出，大部分以代谢产物形式排出，部分以原形物排出。
1.2.5 毒性
铁棒锤具有大毒，主要为生物碱类，其化学成分既是有效成分又是有毒成分。铁棒锤的主要化学成分有：雪乌头碱（penduline）、次乌头碱(hypaconitine)、乌头碱(aconitine)、
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