超声辅助提取木瓜齐墩果酸的工艺研究(附件)
摘 要通过对中药木瓜中齐墩果酸的提取工艺研究，为合理有效提取木瓜活性成分提供科学依据。本文结合单因素试验的基本方法和特点对中药木瓜中齐墩果酸的提取工艺进行深入研究。利用正交试验对提取工艺进行优化，优选出最佳的提取工艺参数，为市场上木瓜中齐墩果酸的研究提供理论依据和工业化生产奠定基础。在单因素试验的基础上，选取超声提取温度、超声提取时间、料液比、乙醇浓度4个因素进行正交试验，以齐墩果酸提取率为指标，确定了超声辅助法提取木瓜中齐墩果酸的最佳工艺。结果表明中药木瓜中齐墩果酸超声提取的最优工艺路为提取温度为60℃，提取时间为30 min，料液比为1:15，乙醇浓度为90%时，提取率为2.78%。
目 录
1 绪论 1
1.1 中药木瓜概述 1
1.2.1 黄酮类化合物 2
1.2.2 有机酸类化合物 2
1.2.3 氨基酸类 3
1.2.4 三萜类化合物 3
1.2.5 其他 3
1.3 中药木瓜的药理作用研究进展 3
1.3.1 抗肿瘤作用 3
1.3.2 消炎镇痛作用 4
1.3.3 保肝作用 4
1.3.4 抗菌作用 5
1.3.5 其它药理作用 5
1.4 选题依据与意义 5
2 研究内容 7
2.1 实验仪器与试剂 7
2.1.1 中药材来源于加工 7
2.1.2 实验仪器 7
2.1.3 实验试剂 8
2.2 实验方法 8
2.2.1 齐墩果酸的测定 8
2.2.2 齐墩果酸提取单因素试验 8
2.2.3 齐墩果酸提取正交实验 9
3 实验与数据 11
3.1 标准曲线绘制与待测样品的测定 11
3.2 单因素试验结果 12
3.2.1 超声提取温度对齐墩果酸提取的影响 12
3.2.2 超声提取时间对齐墩果酸提取的影响 13
3.2.3 超声提取功率对齐墩果酸提取的影响 14
3.2.4 料液比对齐墩果酸提取的影响 15 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
3.2.5 溶剂浓度对齐墩果酸提取的影响 16
3.3 齐墩果酸提取正交试验结果 16
4 讨论与总结 18
参考文献 19
致 谢 21
1 绪论
1.1 中药木瓜概述
中药木瓜（Chaenomelis Fructus Linn.）又名木梨、光皮木瓜等，为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa （Sweet） Nakai的干燥近成熟果实。在夏秋二季时采收，经处理后晒干。其主产于安徽，山东等地区。其产量十分巨大，盛产时可达亩产20002500 kg。
木瓜最早记载于《尔雅》中，为传统的中药，具有极高的药用价值，经常用其近成熟的果实入药，性酸，温，且归肝、脾经，具有舒筋活络，和胃化湿之作用[2]。在李时珍的《本草纲目》中也有记载，木瓜有“舒筋络、健脾胃、益筋血”的药用价值[3]。除此之外，还有《名医别录》、《齐民要术》、《名医术》、《千金方》、《食疗本草》等古医书中都有对木瓜不同作用的记载。木瓜品种多种多样，其中“宣木瓜”（安徽道地药材）品种，与“川杜仲”、“甘枸杞”(甘枸杞原产地属甘肃，现属宁夏)、“藏红花”并称为我国的四大名产中药材[1]。
落叶灌木，枝直展开，无毛，先端急尖，单叶，互生。花先叶开放，花单生或者簇生，花萼筒状，外表无毛，花柱5，花瓣5，子房5室。本品呈长圆形，对半纵剖，外表为紫色或棕红色，深纹，其剖面向内卷曲，中心下凹，呈深黄色。木瓜炮制方法为：洗净，润透或蒸透后切薄片，晒干。呈类月牙形薄片。气味清香，酸甜。
药用木瓜显微鉴别，粉末为棕红色，石细胞成群，无色或色淡，类圆形或类多边形；果肉薄壁细胞常为破裂状，较厚；纤维成束状，上下交错，尾端较钝；中果皮壁薄，呈淡黄色，可见细小草酸钙结晶；网纹、螺纹直径520 μm。
除了古医书中对木瓜的介绍外，现代医学也对木瓜做了大量研究。其表明，中药木瓜中含有丰富的氨基酸及营养物质，多达17种以上。现代药理学研究表明，木瓜具有多种药理作用，如抗肿瘤、保肝、抗炎镇痛、祛风湿和抗菌等[45]。
1.2 中药木瓜中化学成分研究进展
中药木瓜中含有大量的氨基酸及微量元素，近年来，国内外学者对木瓜的化学成分的研究比较系统、深入，现已报道的木瓜中主要包含的化学成分由黄酮类、有机酸类、大量氨基酸、三萜类等。
1.2.1 黄酮类化合物
黄酮类化合物是很多药用植物中的有效物质，其可以清除人体自由基，具有抗氧化、防肿瘤等功效，近年来备受学者青睐，对其研究也逐渐深入。黄酮类物质在中药木瓜中分布也非常广泛，包括槲皮素、芦丁、金丝桃苷、儿茶素、柚皮素、柚皮素葡萄、糖苷等成分。莫柳艳[6]等以川木瓜为原料，采用超声辅助提取，通过单因素试验，正交试验，确定了木瓜黄铜最佳提取工艺为温度为70℃，乙醇浓度为60%，料液比1:30的条件下，提取50 min。此工艺下总黄酮提取率达0.392%。李华荣等[7]以资木瓜为研究对象，采用高效液相色谱法，提取出并测定了资木瓜中槲皮素含量，此法测得槲皮素含量为0.156 μg/mL，不仅含量高，且简便、准确，重复性好。随后，越来越多的人从木瓜中分离得到芦丁、金丝桃苷、糖苷等成分[4]。验证了中药木瓜中确实含有大量黄酮类化合物。
1.2.2 有机酸类化合物
有机酸类化合物是中药抗肿瘤的关键成分，中药木瓜中含有很多有机酸类成分，包括苹果酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、琥珀酸、绿原酸、咖啡酸、原儿茶酸、没食子酸在内的二十多种物质[8]。绿原酸具有抗菌、免疫调节的作用，琥珀酸还可以镇痛。近年来对木瓜中有机酸类化合物的研究已近相当成熟。况作品等[9]在测定木瓜水溶性有机酸含量的研究中，以苹果酸、莽草酸、绿原酸、原儿茶酸、奎尼酸、咖啡酸的含量为测定指标,通过单因素试验与正交试验，确定了样品提取最佳方法为料液比1:20、乙醇浓度50%，进行超声辅助提取60 min，又采用高效液相色谱法，测定了以上指标含量，为木瓜中有机酸含量测定提供稳定可靠的供试品溶液制备方法。高诚伟等[10]用乙醇提取木瓜中的有机酸以及其衍生物，用GCMS分离后检测，测出16种有机酸，结果表明木瓜中除含有常见的脂肪酸外，还含有大量的二元酸、芳香酸等。此外还从光皮木瓜的叶中分离得到硬脂酸，从其果实中分离得到(8E)十六烯酸和(8E)十九烯酸。
1.2.3 氨基酸类
木瓜中氨基酸种类相当齐全，含有除蛋氨酸外的7种必需氨基酸，总氨基酸中，门冬氨酸和谷氨酸含量丰富。冯岩等[11]采用应用HPLC测定法去测定番木瓜的果肉中氨基酸含量。结果表明，在16种氨基酸标准品中，线性范围为0.0156～0.2500 μmol/mL，相关系数R2=0.99371。在9个品种的番木瓜中，被检测出有含16种氨基酸，其中有13种氨基酸的含量可检测，含量最高可达41.0731 mg/g重。李南薇等[12]以木瓜叶为原料，以提取温度80℃、料液比1:30为条件，提取5 h，提取了其中的氨基酸，并采用高效液相色谱法进行组成测定及含量测定。结果表明木瓜中含有13种氨基酸，总提取量为4.66 mg/g。陈日来等[13]在木瓜中检测到19种氨基酸，结果表明每100 g木瓜中蛋白质的含量最高，为6.16 g。
目 录
1 绪论 1
1.1 中药木瓜概述 1
1.2.1 黄酮类化合物 2
1.2.2 有机酸类化合物 2
1.2.3 氨基酸类 3
1.2.4 三萜类化合物 3
1.2.5 其他 3
1.3 中药木瓜的药理作用研究进展 3
1.3.1 抗肿瘤作用 3
1.3.2 消炎镇痛作用 4
1.3.3 保肝作用 4
1.3.4 抗菌作用 5
1.3.5 其它药理作用 5
1.4 选题依据与意义 5
2 研究内容 7
2.1 实验仪器与试剂 7
2.1.1 中药材来源于加工 7
2.1.2 实验仪器 7
2.1.3 实验试剂 8
2.2 实验方法 8
2.2.1 齐墩果酸的测定 8
2.2.2 齐墩果酸提取单因素试验 8
2.2.3 齐墩果酸提取正交实验 9
3 实验与数据 11
3.1 标准曲线绘制与待测样品的测定 11
3.2 单因素试验结果 12
3.2.1 超声提取温度对齐墩果酸提取的影响 12
3.2.2 超声提取时间对齐墩果酸提取的影响 13
3.2.3 超声提取功率对齐墩果酸提取的影响 14
3.2.4 料液比对齐墩果酸提取的影响 15 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
3.2.5 溶剂浓度对齐墩果酸提取的影响 16
3.3 齐墩果酸提取正交试验结果 16
4 讨论与总结 18
参考文献 19
致 谢 21
1 绪论
1.1 中药木瓜概述
中药木瓜（Chaenomelis Fructus Linn.）又名木梨、光皮木瓜等，为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa （Sweet） Nakai的干燥近成熟果实。在夏秋二季时采收，经处理后晒干。其主产于安徽，山东等地区。其产量十分巨大，盛产时可达亩产20002500 kg。
木瓜最早记载于《尔雅》中，为传统的中药，具有极高的药用价值，经常用其近成熟的果实入药，性酸，温，且归肝、脾经，具有舒筋活络，和胃化湿之作用[2]。在李时珍的《本草纲目》中也有记载，木瓜有“舒筋络、健脾胃、益筋血”的药用价值[3]。除此之外，还有《名医别录》、《齐民要术》、《名医术》、《千金方》、《食疗本草》等古医书中都有对木瓜不同作用的记载。木瓜品种多种多样，其中“宣木瓜”（安徽道地药材）品种，与“川杜仲”、“甘枸杞”(甘枸杞原产地属甘肃，现属宁夏)、“藏红花”并称为我国的四大名产中药材[1]。
落叶灌木，枝直展开，无毛，先端急尖，单叶，互生。花先叶开放，花单生或者簇生，花萼筒状，外表无毛，花柱5，花瓣5，子房5室。本品呈长圆形，对半纵剖，外表为紫色或棕红色，深纹，其剖面向内卷曲，中心下凹，呈深黄色。木瓜炮制方法为：洗净，润透或蒸透后切薄片，晒干。呈类月牙形薄片。气味清香，酸甜。
药用木瓜显微鉴别，粉末为棕红色，石细胞成群，无色或色淡，类圆形或类多边形；果肉薄壁细胞常为破裂状，较厚；纤维成束状，上下交错，尾端较钝；中果皮壁薄，呈淡黄色，可见细小草酸钙结晶；网纹、螺纹直径520 μm。
除了古医书中对木瓜的介绍外，现代医学也对木瓜做了大量研究。其表明，中药木瓜中含有丰富的氨基酸及营养物质，多达17种以上。现代药理学研究表明，木瓜具有多种药理作用，如抗肿瘤、保肝、抗炎镇痛、祛风湿和抗菌等[45]。
1.2 中药木瓜中化学成分研究进展
中药木瓜中含有大量的氨基酸及微量元素，近年来，国内外学者对木瓜的化学成分的研究比较系统、深入，现已报道的木瓜中主要包含的化学成分由黄酮类、有机酸类、大量氨基酸、三萜类等。
1.2.1 黄酮类化合物
黄酮类化合物是很多药用植物中的有效物质，其可以清除人体自由基，具有抗氧化、防肿瘤等功效，近年来备受学者青睐，对其研究也逐渐深入。黄酮类物质在中药木瓜中分布也非常广泛，包括槲皮素、芦丁、金丝桃苷、儿茶素、柚皮素、柚皮素葡萄、糖苷等成分。莫柳艳[6]等以川木瓜为原料，采用超声辅助提取，通过单因素试验，正交试验，确定了木瓜黄铜最佳提取工艺为温度为70℃，乙醇浓度为60%，料液比1:30的条件下，提取50 min。此工艺下总黄酮提取率达0.392%。李华荣等[7]以资木瓜为研究对象，采用高效液相色谱法，提取出并测定了资木瓜中槲皮素含量，此法测得槲皮素含量为0.156 μg/mL，不仅含量高，且简便、准确，重复性好。随后，越来越多的人从木瓜中分离得到芦丁、金丝桃苷、糖苷等成分[4]。验证了中药木瓜中确实含有大量黄酮类化合物。
1.2.2 有机酸类化合物
有机酸类化合物是中药抗肿瘤的关键成分，中药木瓜中含有很多有机酸类成分，包括苹果酸、柠檬酸、酒石酸、苯甲酸、琥珀酸、绿原酸、咖啡酸、原儿茶酸、没食子酸在内的二十多种物质[8]。绿原酸具有抗菌、免疫调节的作用，琥珀酸还可以镇痛。近年来对木瓜中有机酸类化合物的研究已近相当成熟。况作品等[9]在测定木瓜水溶性有机酸含量的研究中，以苹果酸、莽草酸、绿原酸、原儿茶酸、奎尼酸、咖啡酸的含量为测定指标,通过单因素试验与正交试验，确定了样品提取最佳方法为料液比1:20、乙醇浓度50%，进行超声辅助提取60 min，又采用高效液相色谱法，测定了以上指标含量，为木瓜中有机酸含量测定提供稳定可靠的供试品溶液制备方法。高诚伟等[10]用乙醇提取木瓜中的有机酸以及其衍生物，用GCMS分离后检测，测出16种有机酸，结果表明木瓜中除含有常见的脂肪酸外，还含有大量的二元酸、芳香酸等。此外还从光皮木瓜的叶中分离得到硬脂酸，从其果实中分离得到(8E)十六烯酸和(8E)十九烯酸。
1.2.3 氨基酸类
木瓜中氨基酸种类相当齐全，含有除蛋氨酸外的7种必需氨基酸，总氨基酸中，门冬氨酸和谷氨酸含量丰富。冯岩等[11]采用应用HPLC测定法去测定番木瓜的果肉中氨基酸含量。结果表明，在16种氨基酸标准品中，线性范围为0.0156～0.2500 μmol/mL，相关系数R2=0.99371。在9个品种的番木瓜中，被检测出有含16种氨基酸，其中有13种氨基酸的含量可检测，含量最高可达41.0731 mg/g重。李南薇等[12]以木瓜叶为原料，以提取温度80℃、料液比1:30为条件，提取5 h，提取了其中的氨基酸，并采用高效液相色谱法进行组成测定及含量测定。结果表明木瓜中含有13种氨基酸，总提取量为4.66 mg/g。陈日来等[13]在木瓜中检测到19种氨基酸，结果表明每100 g木瓜中蛋白质的含量最高，为6.16 g。
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