黑果枸杞多糖在peg6000硫酸铵双水相中分配行为研究
摘 要本文选用PEG6000/硫酸铵双水相来萃取黑果枸杞多糖，通过考虑盐（硫酸铵）、PEG6000、糖的含量不同这三个因素对黑果枸杞多糖在双水相体系中分配行为的研究，做单因素实验。采用双水相体系对其进行分离纯化，用紫外分光光度法对其进行测定。得到当盐（硫酸铵）的加入量为1.6g、PEG6000的加入量为1.6g、粗多糖的加入量为3.0g时，下相分布的多糖最多、蛋白质最少，即此时多糖的萃取率最高，约在87.13%至92.07%范围内；而蛋白质的残留率最低，约在10.95%至9.92%范围内。从而得知黑果枸杞多糖在该条件下的萃取工艺最佳。
目 录
1引言 1
1.1枸杞 1
1.2双水相萃取 2
1.3论文选题 3
2实验内容 4
2.1实验器材、试剂 4
2.1.1实验材料及试剂 4
2.1.2实验仪器 4
2.2实验方法、步骤 5
2.2.1粗多糖的提取 5
2.2.2准备工作 5
2.2.3标准曲线的测定 5
2.2.4双水相体系配制 6
2.2.5测下层（糖）的含量 7
2.2.6测上层（蛋白质）的含量 7
2.2.7原粗多糖溶液中糖与蛋白质 8
3数据与分析 9
3.1标准曲线测定 9
3.1.1葡萄糖标准曲线 9
3.1.2蛋白质标准曲线 9
3.2各因素的双水相配制 10
3.2.1盐（硫酸铵）含量不同 10
3.2.2PEG6000含量不同 11
3.2.3粗多糖含量不同 11
3.3下层（糖）含量的测定 12
3.4上层（蛋白质）含量的测定 12
3.5计算萃取率 12
3.5.1糖萃取率的计算 12
3.5.2蛋白质残留率的计算 13
4结论 18
参考文献 19
致谢 21
1引言
植物多糖因其活性多种多样而受到了许多研究人员炽热的目光。近年来，多糖的研究在国内进 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
展趋势与日俱增，多糖的提取分离、药理作用以及临床应用等方面都已经具有较为成熟的研究成果，拥有大范围的研究基础，并显示出了良好的应用前景。
近年大量有关枸杞多糖的研究表明，枸杞多糖在抗炎、抗衰老和免疫活动等方面的研究被挖掘出巨大的潜力[1]。
黑枸杞多糖的价值极高，但是目前对黑果枸杞多糖进行分离纯化的方法存在着一定的问题。因此，我们有必要通过实验寻找到一种更加简单、有效的处理多糖的方法。而双水相萃取技术已较成熟，只是在这项研究上还不够广泛，但也有大量的类似的案例供借鉴。从其他类似的研究上可以总结得知双水相萃取技术拥有一系列的利于分离纯化的优势，适合用来萃取多糖等物质，即适用于此项研究。因此，本实验将对运用双水相萃取黑果枸杞多糖进行一系列研究，这对研究黑果枸杞多糖在双水相中的分配行为具有重大的研究意义。
1.1枸杞
早从汉代起人们就把枸杞作为延年益寿的滋补圣品，其果实富含多种营养物质，具有滋肝补肾、益精明目之功效[2]。
枸杞的主要有效成分之一是枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)。曾有诸多药理实验表明，调节免疫、抗衰老、护肝、抗肿瘤等是枸杞多糖具有的多种功能[35]。
茄科枸杞属的多年生灌木之一的黑果枸杞（学名：Lycium ruthenicum Murr）[6]，在中国西北几省及西藏和欧洲中亚等地大面积生长。其味甘、性平，对于一些病症具有良好的治疗效果，其果实中含有丰富的蛋白质、枸杞多糖、维生素等人体所需的营养成分[7]，因其果实成熟以后外观为紫黑色，而被称为黑枸杞，人们还赋予了黑果枸杞一个美丽的名字，叫“蓝色妖姬”。其主要成分是花青素，迄今为止，被认为是自然界中花青素含量最高的植物。花青素是一系列类黄酮化合物，自然界分布最广泛的水溶性色素之一就是花青素了，并且在各种植物的花和果实中含量也颇为丰富。此外，花青素还具有良好的药理作用，包括①延缓衰老、有助于睡眠；②有助于皮肤，美容养颜；③预防癌症；④护肝明目、增进视力；⑤改善循环、增强体质；⑥防糖尿病、抗疲劳、保护心血管系统等。黑果枸杞因花青素含量高而具有很好的保健功能，因此对黑果枸杞的研究日益引起广大热爱研究的人员的关注[8]。
暴凤伟等人[9]通过对中国知网、万方数据、维普等数据库近年来有关黑果枸杞文献的检索，得到了黑果枸杞拥有良好的保健功能，且无毒，可药食两用，并对一些病症有治疗效果。
1.2双水相萃取
双水相萃取（英文缩写为ATPE）是一种新型的用于分离两个不同物质的方法，利用的是两个不同的生物大分子物质的分配系数在双水相体系中互不相溶的两个液相间存在能够使两者分离开来的差异进行一系列分离纯化的原理[10]。
双水相萃取体系一般被分为聚乙二醇/葡聚糖和聚乙二醇/无机盐两类[11]，本文则将选择聚乙二醇/无机盐类对黑果枸杞多糖中多糖与蛋白质的进行提取分离，并对其分配行为进行研究。
双水相萃取作为一种新型的分离技术，在分离、提纯方面具有下述六个优点[12]：
含水量高（70%～90%）；
分相时间短；
界面张力小（107mN/m～104 mN/m），对两相间质量传递存在一定强化作用；
无有机物残留在提取物中的情况；
除去多数杂质，使分离过程中的经济效益被提高；
易于工程放大和连续操作。
双水相萃取技术日益受到高度重视。在多种生物体与生物组织以及多糖、蛋白质等生物大分子物质的分离纯化中得到广泛应用，并取得了可观的成绩[13]。近年来，有研究显示当浓度一定时，双水相体系可以是某些高聚物溶液与某些无机盐溶液混合形成。当体系内的高聚物为聚乙二醇，盐为硫酸铵时，不仅对生物活性物质无有害影响，还具有稳定和保护的作用，并且这两个物质价廉易得，还拥有较高的选择性[14]。
泽贝塔?克里、佐夫阿约?Jana等人[15]通过对复杂生物制品中碳水化合物的分析得知为避免干扰，通常需要将蛋白质和其他污染物分离开来，他们也有用到双水相萃取技术。从中我了解到用双水相萃取分离黑果枸杞中多糖的同时也将其中影响测定结果的物质一同排除到体系外，有效地提高了萃取所得多糖的纯度。
1.3论文选题
双水相萃取技术作为一种新型的绿色分离/富集技术，在分离纯化等方面被广泛运用。目前已有很多有关双水相萃取技术萃取其他植物中多糖、四环素、橙皮苷、杜仲黄酮、青霉素等的相关研究实验开展。
目 录
1引言 1
1.1枸杞 1
1.2双水相萃取 2
1.3论文选题 3
2实验内容 4
2.1实验器材、试剂 4
2.1.1实验材料及试剂 4
2.1.2实验仪器 4
2.2实验方法、步骤 5
2.2.1粗多糖的提取 5
2.2.2准备工作 5
2.2.3标准曲线的测定 5
2.2.4双水相体系配制 6
2.2.5测下层（糖）的含量 7
2.2.6测上层（蛋白质）的含量 7
2.2.7原粗多糖溶液中糖与蛋白质 8
3数据与分析 9
3.1标准曲线测定 9
3.1.1葡萄糖标准曲线 9
3.1.2蛋白质标准曲线 9
3.2各因素的双水相配制 10
3.2.1盐（硫酸铵）含量不同 10
3.2.2PEG6000含量不同 11
3.2.3粗多糖含量不同 11
3.3下层（糖）含量的测定 12
3.4上层（蛋白质）含量的测定 12
3.5计算萃取率 12
3.5.1糖萃取率的计算 12
3.5.2蛋白质残留率的计算 13
4结论 18
参考文献 19
致谢 21
1引言
植物多糖因其活性多种多样而受到了许多研究人员炽热的目光。近年来，多糖的研究在国内进 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
展趋势与日俱增，多糖的提取分离、药理作用以及临床应用等方面都已经具有较为成熟的研究成果，拥有大范围的研究基础，并显示出了良好的应用前景。
近年大量有关枸杞多糖的研究表明，枸杞多糖在抗炎、抗衰老和免疫活动等方面的研究被挖掘出巨大的潜力[1]。
黑枸杞多糖的价值极高，但是目前对黑果枸杞多糖进行分离纯化的方法存在着一定的问题。因此，我们有必要通过实验寻找到一种更加简单、有效的处理多糖的方法。而双水相萃取技术已较成熟，只是在这项研究上还不够广泛，但也有大量的类似的案例供借鉴。从其他类似的研究上可以总结得知双水相萃取技术拥有一系列的利于分离纯化的优势，适合用来萃取多糖等物质，即适用于此项研究。因此，本实验将对运用双水相萃取黑果枸杞多糖进行一系列研究，这对研究黑果枸杞多糖在双水相中的分配行为具有重大的研究意义。
1.1枸杞
早从汉代起人们就把枸杞作为延年益寿的滋补圣品，其果实富含多种营养物质，具有滋肝补肾、益精明目之功效[2]。
枸杞的主要有效成分之一是枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)。曾有诸多药理实验表明，调节免疫、抗衰老、护肝、抗肿瘤等是枸杞多糖具有的多种功能[35]。
茄科枸杞属的多年生灌木之一的黑果枸杞（学名：Lycium ruthenicum Murr）[6]，在中国西北几省及西藏和欧洲中亚等地大面积生长。其味甘、性平，对于一些病症具有良好的治疗效果，其果实中含有丰富的蛋白质、枸杞多糖、维生素等人体所需的营养成分[7]，因其果实成熟以后外观为紫黑色，而被称为黑枸杞，人们还赋予了黑果枸杞一个美丽的名字，叫“蓝色妖姬”。其主要成分是花青素，迄今为止，被认为是自然界中花青素含量最高的植物。花青素是一系列类黄酮化合物，自然界分布最广泛的水溶性色素之一就是花青素了，并且在各种植物的花和果实中含量也颇为丰富。此外，花青素还具有良好的药理作用，包括①延缓衰老、有助于睡眠；②有助于皮肤，美容养颜；③预防癌症；④护肝明目、增进视力；⑤改善循环、增强体质；⑥防糖尿病、抗疲劳、保护心血管系统等。黑果枸杞因花青素含量高而具有很好的保健功能，因此对黑果枸杞的研究日益引起广大热爱研究的人员的关注[8]。
暴凤伟等人[9]通过对中国知网、万方数据、维普等数据库近年来有关黑果枸杞文献的检索，得到了黑果枸杞拥有良好的保健功能，且无毒，可药食两用，并对一些病症有治疗效果。
1.2双水相萃取
双水相萃取（英文缩写为ATPE）是一种新型的用于分离两个不同物质的方法，利用的是两个不同的生物大分子物质的分配系数在双水相体系中互不相溶的两个液相间存在能够使两者分离开来的差异进行一系列分离纯化的原理[10]。
双水相萃取体系一般被分为聚乙二醇/葡聚糖和聚乙二醇/无机盐两类[11]，本文则将选择聚乙二醇/无机盐类对黑果枸杞多糖中多糖与蛋白质的进行提取分离，并对其分配行为进行研究。
双水相萃取作为一种新型的分离技术，在分离、提纯方面具有下述六个优点[12]：
含水量高（70%～90%）；
分相时间短；
界面张力小（107mN/m～104 mN/m），对两相间质量传递存在一定强化作用；
无有机物残留在提取物中的情况；
除去多数杂质，使分离过程中的经济效益被提高；
易于工程放大和连续操作。
双水相萃取技术日益受到高度重视。在多种生物体与生物组织以及多糖、蛋白质等生物大分子物质的分离纯化中得到广泛应用，并取得了可观的成绩[13]。近年来，有研究显示当浓度一定时，双水相体系可以是某些高聚物溶液与某些无机盐溶液混合形成。当体系内的高聚物为聚乙二醇，盐为硫酸铵时，不仅对生物活性物质无有害影响，还具有稳定和保护的作用，并且这两个物质价廉易得，还拥有较高的选择性[14]。
泽贝塔?克里、佐夫阿约?Jana等人[15]通过对复杂生物制品中碳水化合物的分析得知为避免干扰，通常需要将蛋白质和其他污染物分离开来，他们也有用到双水相萃取技术。从中我了解到用双水相萃取分离黑果枸杞中多糖的同时也将其中影响测定结果的物质一同排除到体系外，有效地提高了萃取所得多糖的纯度。
1.3论文选题
双水相萃取技术作为一种新型的绿色分离/富集技术，在分离纯化等方面被广泛运用。目前已有很多有关双水相萃取技术萃取其他植物中多糖、四环素、橙皮苷、杜仲黄酮、青霉素等的相关研究实验开展。
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