超声辅助提取木瓜黄酮的工艺研究(附件)
摘 要本文主要研究超声波辅助提取法对中药木瓜中黄酮含量的影响，探讨中药木瓜超声提取的最优工艺，为木瓜总黄酮的提取提供参考价值。主要采用乙醇为溶剂进行提取，以木瓜中总黄酮的提取率为测定指标，分别考察了超声提取温度、提取时间、提取功率、料液比、乙醇浓度5个因素对其提取率的影响，设计单因素试验，正交试验，并以芦丁为标准品，采用紫外可见分光光度法对总黄酮吸光度值进行测定，计算提取率，优选最佳提取工艺。结果表明，超声辅助提取木瓜总黄酮的最佳工艺条件为乙醇浓度为60%，料液比为1:30，超声提取温度为70 ℃，提取时间为40 min，提取率可达2.74%。此方法为木瓜黄酮超声提取的最优方案，且结果准确，稳定，简便易操作。
目 录
1绪论 1
1.1木瓜概述 1
1.2木瓜的化学成分研究进展 1
1.3木瓜的药理作用研究进展 2
1.3.1抗氧化作用 2
1.3.2抗衰老作用 2
1.3.3抗肿瘤作用 2
1.3.4镇痛作用 3
1.3.5其它作用 3
1.4超声提取技术的优越性 3
1.5选题目的与意义 4
2研究内容 6
2.1实验材料 6
2.2实验仪器与试剂 6
2.2.1实验仪器 6
2.2.2实验试剂 6
2.3实验方法 6
2.3.1木瓜提取液中黄酮的测定方法 6
2.3.2木瓜中黄酮提取单因素实验 7
2.3.3正交实验方案 8
2.3.4方法学考察 9
3实验结果 10
3.1芦丁标准曲线制备 10
3.2单因素试验结果 10
3.2.1溶剂浓度对木瓜中黄酮含量的影响 10
3.2.2料液比对木瓜中黄酮含量的影响 11
3.2.3超声提取时间对木瓜中黄酮含量的影响 11
3.2.4超声提取温度对木瓜中黄酮含量的影响 12
3.2.5超声提取功率对木瓜中黄酮含量的影响 13
3.3正交实验结果 13
3.4方法学分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
析结果 15
3.4.1精密度实验 15
3.4.2稳定性试验 16
3.4.3加样回收率实验 16
结 论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 绪论
1.1 木瓜概述
中药木瓜（CaricapapayaLinn.）为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa （Sweet） Nakai的干燥近成熟果实，习称“皱皮木瓜”。最初载于《名医别录》中，将其列为中品[1]。传统认为安徽宣城、浙江、湖北所产木瓜为道地药材，质量上等。《本草纲目》收载木瓜于果部，引苏颂语:木瓜处处有之，而宣城者为佳，木状如奈，春末开花，深红色，其实大者如瓜，小者如拳，上黄似着粉[2]。《神农本草经》曰:木瓜，生夷陵(今湖北宜昌附近)[3]。而现代研究认为，木瓜以安徽、四川、浙江、湖北等为主要产地，其他地方也有种植栽培。本品外表面紫红色或红棕色，有不规则的深皱纹；剖面边缘向内卷曲，果肉红棕色，中心部分凹陷，棕黄色；种子扁长三角形，多脱落，质坚硬，气微清香。味酸、性温，归肝、脾经。具有平肝舒筋，和胃化湿的功效，主要用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，暑湿吐泻，转筋挛痛，脚气水肿[4]。
1.2 木瓜的化学成分研究进展
中药木瓜中含有多种化学成分，其中黄酮类化合物的含量非常丰富。木瓜中的黄酮类化合物主要有槲皮素、芦丁、柚皮素等。黄酮类化合物在植物体内主要是通过结合糖形成甙而存在，主要会形成黄酮、黄酮醇、双氢黄酮、查尔酮等衍生物。关于中药木瓜中黄酮类化合物很多学者都做了研究，莫柳艳[7]等取广西凌云特产蔷薇科川木瓜的果实为原料，通过超声波法提取其总黄酮，并设计单因素实验、正交实验来研究乙醇浓度、液料比、超声提取时间、超声提取温度四个因素对其总黄酮提取率的影响，得到最优提取条件为料液比1:30、提取温度70 ℃、提取时间50 min、乙醇浓度60%，此条件下总黄酮的提取率可达0.392%，此方法简单可行,重现性好,结果较理想。周晓丽[8]等采用单因素和正交实验探索木瓜黄酮提取过程中的料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间,得到最佳的提取条件为:料液比1:6，乙醇浓度70%，90℃回流3 h。超声提取木瓜中黄酮的工艺路线是一种快速、经济、高效的提取工艺，目前研究较少，所以对木瓜超声提取技术的探索是一个重点。
1.3 木瓜的药理作用研究进展
普遍研究表明，木瓜具有很好的消除人体自由基的作用，抗氧化性极强，具有抗菌抗病毒[11,12]、抗衰老、抗肿瘤等作用，在心脑血管系统中也可发挥作用，同时，中药木瓜对糖尿病方面也具有一定价值[5]。
1.3.1 抗氧化作用
研究表明,利用体外实验检测不同浓度木瓜黄酮对DPPH.的清除作用，发现木瓜黄酮是一种有效的自由基清除剂，对DPPH.有显著的清除作用，清除率最高为93.06%。
1.3.2 抗衰老作用
关于木瓜中黄酮抗衰老作用的研究，谭文波[9]等将12月龄雌性小鼠40只随机分成对照组和实验组，另将20只3月龄雌性KM小鼠作为青年组，用木瓜的提取液在体外涂抹，对照组和青年组用等量生理盐水涂抹。观察一定时间后，测定皮肤指数及皮肤组织中的羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及脂褐质(LF)的含量。所得结果与对照组比较，发现木瓜提取液增加了老年小鼠的皮肤指数及皮肤组织中HYP和SOD的含量，使老年小鼠皮肤组织中MDA和LF含量下降。说明木瓜的黄酮提取液具有较明显的抗皮肤衰老作用。
1.3.3 抗肿瘤作用
关于木瓜中黄酮抗肿瘤作用，近年来也得到了广泛的关注和研究。有研究结果表明，黄酮类化合物对多种常见癌症如肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌、白血病、卵巢癌、胃癌等皆有显著的防治效果，黄酮类化合物抗肿瘤的机制主要有：抗氧化抗自由基、诱导肿瘤细胞凋亡、影响细胞周期、调节免疫、抑制肿瘤新生血管、抑制环氧合酶Ⅱ、抑制端粒酶活性等[6]。
刘爱华[10]等通过乙醇正丁醇萃取方法提取木瓜总黄酮；通过分子药物筛选模型、酶联免疫法检测木瓜总黄酮对免疫共刺激分子程序性死亡因子(PD)1与其配体(PD)L1结合的抑制作用。通过H22肿瘤细胞模型小鼠，观察木瓜总黄酮对模型小鼠体内肿瘤体积与存活时间的影响；流式细胞仪测定小鼠腹水中肿瘤细胞及淋巴细胞表面相关分子的表达，结果发现:正丁醇馏分中木瓜总黄酮占85%。木瓜总黄酮具有抑制(PD)1和(PD)L1结合的作用,且抑制效率具有剂量依赖性。木瓜总黄酮在复制模型10 d后对模型小鼠体内肿瘤有明显抑制作用;对S180细胞表面(PD)L1表达具有明显抑制作用,对体内淋巴细胞浸润有明显增强作用。所以木瓜总黄酮可以抑制(PD)1与(PD)L1的结合,同时可降低肿瘤细胞表面(PD)L1的表达从而促进机体对肿瘤的免疫应答,最终达到抑制肿瘤生长,提高肿瘤鼠存活率的作用。
目 录
1绪论 1
1.1木瓜概述 1
1.2木瓜的化学成分研究进展 1
1.3木瓜的药理作用研究进展 2
1.3.1抗氧化作用 2
1.3.2抗衰老作用 2
1.3.3抗肿瘤作用 2
1.3.4镇痛作用 3
1.3.5其它作用 3
1.4超声提取技术的优越性 3
1.5选题目的与意义 4
2研究内容 6
2.1实验材料 6
2.2实验仪器与试剂 6
2.2.1实验仪器 6
2.2.2实验试剂 6
2.3实验方法 6
2.3.1木瓜提取液中黄酮的测定方法 6
2.3.2木瓜中黄酮提取单因素实验 7
2.3.3正交实验方案 8
2.3.4方法学考察 9
3实验结果 10
3.1芦丁标准曲线制备 10
3.2单因素试验结果 10
3.2.1溶剂浓度对木瓜中黄酮含量的影响 10
3.2.2料液比对木瓜中黄酮含量的影响 11
3.2.3超声提取时间对木瓜中黄酮含量的影响 11
3.2.4超声提取温度对木瓜中黄酮含量的影响 12
3.2.5超声提取功率对木瓜中黄酮含量的影响 13
3.3正交实验结果 13
3.4方法学分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
析结果 15
3.4.1精密度实验 15
3.4.2稳定性试验 16
3.4.3加样回收率实验 16
结 论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 绪论
1.1 木瓜概述
中药木瓜（CaricapapayaLinn.）为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa （Sweet） Nakai的干燥近成熟果实，习称“皱皮木瓜”。最初载于《名医别录》中，将其列为中品[1]。传统认为安徽宣城、浙江、湖北所产木瓜为道地药材，质量上等。《本草纲目》收载木瓜于果部，引苏颂语:木瓜处处有之，而宣城者为佳，木状如奈，春末开花，深红色，其实大者如瓜，小者如拳，上黄似着粉[2]。《神农本草经》曰:木瓜，生夷陵(今湖北宜昌附近)[3]。而现代研究认为，木瓜以安徽、四川、浙江、湖北等为主要产地，其他地方也有种植栽培。本品外表面紫红色或红棕色，有不规则的深皱纹；剖面边缘向内卷曲，果肉红棕色，中心部分凹陷，棕黄色；种子扁长三角形，多脱落，质坚硬，气微清香。味酸、性温，归肝、脾经。具有平肝舒筋，和胃化湿的功效，主要用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，暑湿吐泻，转筋挛痛，脚气水肿[4]。
1.2 木瓜的化学成分研究进展
中药木瓜中含有多种化学成分，其中黄酮类化合物的含量非常丰富。木瓜中的黄酮类化合物主要有槲皮素、芦丁、柚皮素等。黄酮类化合物在植物体内主要是通过结合糖形成甙而存在，主要会形成黄酮、黄酮醇、双氢黄酮、查尔酮等衍生物。关于中药木瓜中黄酮类化合物很多学者都做了研究，莫柳艳[7]等取广西凌云特产蔷薇科川木瓜的果实为原料，通过超声波法提取其总黄酮，并设计单因素实验、正交实验来研究乙醇浓度、液料比、超声提取时间、超声提取温度四个因素对其总黄酮提取率的影响，得到最优提取条件为料液比1:30、提取温度70 ℃、提取时间50 min、乙醇浓度60%，此条件下总黄酮的提取率可达0.392%，此方法简单可行,重现性好,结果较理想。周晓丽[8]等采用单因素和正交实验探索木瓜黄酮提取过程中的料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间,得到最佳的提取条件为:料液比1:6，乙醇浓度70%，90℃回流3 h。超声提取木瓜中黄酮的工艺路线是一种快速、经济、高效的提取工艺，目前研究较少，所以对木瓜超声提取技术的探索是一个重点。
1.3 木瓜的药理作用研究进展
普遍研究表明，木瓜具有很好的消除人体自由基的作用，抗氧化性极强，具有抗菌抗病毒[11,12]、抗衰老、抗肿瘤等作用，在心脑血管系统中也可发挥作用，同时，中药木瓜对糖尿病方面也具有一定价值[5]。
1.3.1 抗氧化作用
研究表明,利用体外实验检测不同浓度木瓜黄酮对DPPH.的清除作用，发现木瓜黄酮是一种有效的自由基清除剂，对DPPH.有显著的清除作用，清除率最高为93.06%。
1.3.2 抗衰老作用
关于木瓜中黄酮抗衰老作用的研究，谭文波[9]等将12月龄雌性小鼠40只随机分成对照组和实验组，另将20只3月龄雌性KM小鼠作为青年组，用木瓜的提取液在体外涂抹，对照组和青年组用等量生理盐水涂抹。观察一定时间后，测定皮肤指数及皮肤组织中的羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及脂褐质(LF)的含量。所得结果与对照组比较，发现木瓜提取液增加了老年小鼠的皮肤指数及皮肤组织中HYP和SOD的含量，使老年小鼠皮肤组织中MDA和LF含量下降。说明木瓜的黄酮提取液具有较明显的抗皮肤衰老作用。
1.3.3 抗肿瘤作用
关于木瓜中黄酮抗肿瘤作用，近年来也得到了广泛的关注和研究。有研究结果表明，黄酮类化合物对多种常见癌症如肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌、白血病、卵巢癌、胃癌等皆有显著的防治效果，黄酮类化合物抗肿瘤的机制主要有：抗氧化抗自由基、诱导肿瘤细胞凋亡、影响细胞周期、调节免疫、抑制肿瘤新生血管、抑制环氧合酶Ⅱ、抑制端粒酶活性等[6]。
刘爱华[10]等通过乙醇正丁醇萃取方法提取木瓜总黄酮；通过分子药物筛选模型、酶联免疫法检测木瓜总黄酮对免疫共刺激分子程序性死亡因子(PD)1与其配体(PD)L1结合的抑制作用。通过H22肿瘤细胞模型小鼠，观察木瓜总黄酮对模型小鼠体内肿瘤体积与存活时间的影响；流式细胞仪测定小鼠腹水中肿瘤细胞及淋巴细胞表面相关分子的表达，结果发现:正丁醇馏分中木瓜总黄酮占85%。木瓜总黄酮具有抑制(PD)1和(PD)L1结合的作用,且抑制效率具有剂量依赖性。木瓜总黄酮在复制模型10 d后对模型小鼠体内肿瘤有明显抑制作用;对S180细胞表面(PD)L1表达具有明显抑制作用,对体内淋巴细胞浸润有明显增强作用。所以木瓜总黄酮可以抑制(PD)1与(PD)L1的结合,同时可降低肿瘤细胞表面(PD)L1的表达从而促进机体对肿瘤的免疫应答,最终达到抑制肿瘤生长,提高肿瘤鼠存活率的作用。
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