叶下珠提取物对四氯化碳诱导建鲤肝损伤保护作用研究
:目的: 观察叶下珠提取物对体外四氯化碳诱导建鲤急性肝损伤保护作用，为鱼类肝胆综合症治疗药物的筛选提供理论依据。方法: 利用精密肝组织切片技术来研究叶下株提取物抗CCL4致建鲤肝切片损伤的分子机制。将叶下株提取物分为低中高三个剂量组(100、300、600μg/mL)，同时设定空白对照组、叶下株药物对照组、模型组，分别处理精密肝切片4h后，收集肝切片培养上清液和肝组织切片进行实验待测。主要检测谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽S2转移酶(GST)的活性值及丙二醛(MDA)和白蛋白（Alb）等指标的含量变化。结论CCl4致建鲤肝损伤模型中，CCl4造模浓度以12μg/ml效果最好, GPT、GOT、LDH活性值极显著升高（P<0.01），SOD、GST活性值极显著降低（P<0.01），MDA含量极显著升高（P<0.01），白蛋白含量极显著降低（P<0.01）。加入3种不同浓度叶下珠提取物后（100、300、600μg/ml），GPT、GOT、LDH活性值不同程度降低，SOD、GST活性值升高，白蛋白含量升高，MDA含量降低。结果表明叶下珠提取物能有效抑制CCl4所造成的建鲤肝细胞损伤，保护作用机理是叶下珠提取物有很强的抗氧化性和清除自由基的能力，以及抗脂质过氧反应。
目录
摘要 4
关键词 4
Abstract 4
Key words 4
引言 5
1 材料与方法 6
1.1材料 6
1.1.1 试剂和仪器 6
1.1.2 试验鱼 6
1.1.3 药材 6
1.2方法 6
1.2.1 叶下珠提取物的制备 6
1.2.2 精密肝切片制备 6
1.2.3 精密肝切片损伤模型的构建 6
1.2.4 建鲤肝切片处理及分组 6
1.2.5 建鲤肝切片上清培养液中酶活性指标的测定 7
1.2.6 数据统计分析 7
2 结果与分析 7
2.1 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GPT活性的影 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
响 7
2.2 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GOT活性的影响 7
2.3 CCl4致建鲤肝损伤模型中对LDH活性的影响 8
2.4 CCl4致建鲤肝损伤模型中对SOD活性的影响 8
2.5 CCl4致建鲤肝损伤模型中对MDA活性的影响 9
2.6 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GPT活性的影响 9
2.7 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GOT活性的影响 10
2.8 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中LDH活性的影响 10
2.9 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中SOD活性的影响 11
2.10 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GST活性的影响 11
2.11 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中Alb含量的影响 12
2.12 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中MDA含量的影响 13
3 讨论 13
致谢 14
参考文献 14
图1 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GPT活性的影响 7
图2 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GOT活性的影响 7
图3 CCl4致建鲤肝损伤模型中对LDH活性的影响 8
图4 CCl4致建鲤肝损伤模型中对SOD活性的影响 8
图5 CCl4致建鲤肝损伤模型中对MDA活性的影响 9
图6 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GPT活性的影响 9
图7 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GOT活性的影响 10
图8 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中LDH活性的影响 10
图9 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中SOD活性的影响 11
图10 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GST活性的影响 11
图11 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中Alb含量的影响 12
图12 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中MDA含量的影响 13
叶下珠提取物对四氯化碳诱导建鲤肝损伤保护作用研究
引言
引言
21世纪，人口持续暴增，耕地不断减少，粮食短缺难题一直威胁着人类生存，在此前提下，提供大量动物蛋白的水产养殖业得到空前发展，但急功近利的养殖模式出现了种种问题，水环境污染，高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥用等因素所造成的鱼类肝胆综合症在全国许多地区频繁发生，造成了青鱼、草鱼、鲤、鲫、团头鲂等多种鱼类的大面积死亡，死亡率高达6090%，给水产养殖业造成极大的经济损失。关于鱼类肝胆综合征的治疗，目前未发现有效治疗药物，主要是以西药抗生素为主，西药虽然在一定程度上缓解了肝损伤，但是不能够彻底治愈肝损伤，容易在鱼体内产生耐药性和造成药物残留，形成恶性循环，威胁人类健康，因此，开发绿色无公害的中成药已迫在眉睫。
随着近年来中草药在水产动物病害防治中的研究越来越广泛，渔业生产实践也证明，中草药作为混和剂或饲料添加剂尤其适用于当前水产养殖业的集约化、规模化生产的需要，便于进行养殖鱼类病害的群体防治。研究还发现中草药对于化学药物、抗生素难以治疗的鱼类营养性、代谢性病害及病毒性病害有独特的功效。中草药在抗鱼类肝损伤时具有天然、高效、毒副作用小、抗药性不显著、资源丰富及性能多样等优点，使用中草药防治鱼类肝损伤前景广阔、意义深远。对人和动物的研究表明，一些中草药具有保护肝脏的作用，通过肝（细胞）损伤模型来筛选对人和其他动物的肝脏有保护作用的药物已经得到广泛的应用。但是在水产上，这方面的研究和实践几乎是空白。叶下珠是一种全草入药的植物，其主要成分有木脂素类、生物碱类鞣质等多种成分，临床试验研究证明叶下珠提取物在体外有很强的抗氧化性和清除自由基的能力，以及抗脂质过氧反应。郑秀清在研究叶下珠对四氯化碳引起的罗非鱼肝细胞的损伤中发现，叶下珠提取物具有明显的体外抗氧化和保肝作用，加药组丙氨酸转氨酶、谷草转氨酶活性显著低于损伤组[1]。周军等研究叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用发现，叶下珠醇提物有诱导肝药酶活性的能力[23]。
当前保肝药物开发主要采用肝细胞或者在体实验来进行研究，未发现采用精密肝切片技术来进行药物筛选的报道，且研究对象主要是哺乳动物[45]，将此技术应用于水产研究方面较少。精密肝切片技术是介于器官与细胞水平间的实验手段，不需用胶原酶，切片技术相对简单，且保存正常组织结构、细胞联系及细胞极性(polarity of hepatic cell)，故较其它体外模型更接近在体代谢模式，而且在RT PCR 测定CYPmRNA 诱导中，其诱导时间较肝细胞短得多，这些优点使它在体外药物及毒物研究中占有相当重要的地位[6]。这种技术还可用于其它多种器官(如肾、肺、心、脾等) ，组织来源可以是各种实验动物，亦可以是人体组织，即可以采用新鲜组织，也可将冻存组织复苏后进行培养，这可大大提高标本利用率。肝切片培养是一种很有价值的研究体外生物诱导毒性的模型系统，它可与分子生物学、免疫组化等诸多实验手段相结合，它的发展为药物生物技术在新药研究、药物体外药理学及毒理学研究中的应用开辟了一块新天地[79] 。
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摘要 4
关键词 4
Abstract 4
Key words 4
引言 5
1 材料与方法 6
1.1材料 6
1.1.1 试剂和仪器 6
1.1.2 试验鱼 6
1.1.3 药材 6
1.2方法 6
1.2.1 叶下珠提取物的制备 6
1.2.2 精密肝切片制备 6
1.2.3 精密肝切片损伤模型的构建 6
1.2.4 建鲤肝切片处理及分组 6
1.2.5 建鲤肝切片上清培养液中酶活性指标的测定 7
1.2.6 数据统计分析 7
2 结果与分析 7
2.1 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GPT活性的影 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
响 7
2.2 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GOT活性的影响 7
2.3 CCl4致建鲤肝损伤模型中对LDH活性的影响 8
2.4 CCl4致建鲤肝损伤模型中对SOD活性的影响 8
2.5 CCl4致建鲤肝损伤模型中对MDA活性的影响 9
2.6 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GPT活性的影响 9
2.7 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GOT活性的影响 10
2.8 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中LDH活性的影响 10
2.9 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中SOD活性的影响 11
2.10 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GST活性的影响 11
2.11 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中Alb含量的影响 12
2.12 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中MDA含量的影响 13
3 讨论 13
致谢 14
参考文献 14
图1 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GPT活性的影响 7
图2 CCl4致建鲤肝损伤模型中对GOT活性的影响 7
图3 CCl4致建鲤肝损伤模型中对LDH活性的影响 8
图4 CCl4致建鲤肝损伤模型中对SOD活性的影响 8
图5 CCl4致建鲤肝损伤模型中对MDA活性的影响 9
图6 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GPT活性的影响 9
图7 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GOT活性的影响 10
图8 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中LDH活性的影响 10
图9 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中SOD活性的影响 11
图10 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中GST活性的影响 11
图11 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中Alb含量的影响 12
图12 叶下珠提取物对CCl4诱导建鲤肝切片损伤培养液中MDA含量的影响 13
叶下珠提取物对四氯化碳诱导建鲤肝损伤保护作用研究
引言
引言
21世纪，人口持续暴增，耕地不断减少，粮食短缺难题一直威胁着人类生存，在此前提下，提供大量动物蛋白的水产养殖业得到空前发展，但急功近利的养殖模式出现了种种问题，水环境污染，高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥用等因素所造成的鱼类肝胆综合症在全国许多地区频繁发生，造成了青鱼、草鱼、鲤、鲫、团头鲂等多种鱼类的大面积死亡，死亡率高达6090%，给水产养殖业造成极大的经济损失。关于鱼类肝胆综合征的治疗，目前未发现有效治疗药物，主要是以西药抗生素为主，西药虽然在一定程度上缓解了肝损伤，但是不能够彻底治愈肝损伤，容易在鱼体内产生耐药性和造成药物残留，形成恶性循环，威胁人类健康，因此，开发绿色无公害的中成药已迫在眉睫。
随着近年来中草药在水产动物病害防治中的研究越来越广泛，渔业生产实践也证明，中草药作为混和剂或饲料添加剂尤其适用于当前水产养殖业的集约化、规模化生产的需要，便于进行养殖鱼类病害的群体防治。研究还发现中草药对于化学药物、抗生素难以治疗的鱼类营养性、代谢性病害及病毒性病害有独特的功效。中草药在抗鱼类肝损伤时具有天然、高效、毒副作用小、抗药性不显著、资源丰富及性能多样等优点，使用中草药防治鱼类肝损伤前景广阔、意义深远。对人和动物的研究表明，一些中草药具有保护肝脏的作用，通过肝（细胞）损伤模型来筛选对人和其他动物的肝脏有保护作用的药物已经得到广泛的应用。但是在水产上，这方面的研究和实践几乎是空白。叶下珠是一种全草入药的植物，其主要成分有木脂素类、生物碱类鞣质等多种成分，临床试验研究证明叶下珠提取物在体外有很强的抗氧化性和清除自由基的能力，以及抗脂质过氧反应。郑秀清在研究叶下珠对四氯化碳引起的罗非鱼肝细胞的损伤中发现，叶下珠提取物具有明显的体外抗氧化和保肝作用，加药组丙氨酸转氨酶、谷草转氨酶活性显著低于损伤组[1]。周军等研究叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用发现，叶下珠醇提物有诱导肝药酶活性的能力[23]。
当前保肝药物开发主要采用肝细胞或者在体实验来进行研究，未发现采用精密肝切片技术来进行药物筛选的报道，且研究对象主要是哺乳动物[45]，将此技术应用于水产研究方面较少。精密肝切片技术是介于器官与细胞水平间的实验手段，不需用胶原酶，切片技术相对简单，且保存正常组织结构、细胞联系及细胞极性(polarity of hepatic cell)，故较其它体外模型更接近在体代谢模式，而且在RT PCR 测定CYPmRNA 诱导中，其诱导时间较肝细胞短得多，这些优点使它在体外药物及毒物研究中占有相当重要的地位[6]。这种技术还可用于其它多种器官(如肾、肺、心、脾等) ，组织来源可以是各种实验动物，亦可以是人体组织，即可以采用新鲜组织，也可将冻存组织复苏后进行培养，这可大大提高标本利用率。肝切片培养是一种很有价值的研究体外生物诱导毒性的模型系统，它可与分子生物学、免疫组化等诸多实验手段相结合，它的发展为药物生物技术在新药研究、药物体外药理学及毒理学研究中的应用开辟了一块新天地[79] 。
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