三种体色黄鳝的遗传多样性分析
在黄鳝的生产养殖过程中，常见的黄鳝体色有三种分别为深黄色（深黄大斑鳝）、浅黄色（浅黄细斑鳝）、青灰色（青灰鳝）。本研究采用AFLP技术对这三种黄鳝进行遗传多样性分析。实验结果表明6对引物组合从3个群体中扩增出386个位点，其中多态位点比例为80.32%，三种黄鳝遗传多样性指数（H）为0.1575。深黄大斑鳝种群内的多态位点比例（P）和遗传多样性指数（H）为33.53%、0.0801；浅黄细斑鳝为48.61%、0.0650；青灰鳝为44.88%、0.1380。遗传多样性衡量指标表明，深黄大斑鳝养殖群体的遗传变异量相对最大，遗传多样性相对较高，浅黄群体次之，而灰色群体最低。深黄大斑鳝群体与浅黄细斑鳝的遗传距离为0.0541，深黄大斑鳝群体与青灰鳝群体的遗传距离为0.1237，浅黄细斑鳝群体与青灰鳝群体的遗传距离为0.1341。进一步表明了深黄大斑鳝具有较高的多样性。本文通过AFLP技术对深黄大斑鳝、浅黄细斑鳝、青灰鳝这三种体色的黄鳝进行遗传多样性分析，为我们进一步了解影响黄鳝生长性状和体色形成的分子机理打下基础，提高对黄鳝养殖资源的利用率，提高经济效益。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料选取 2
1.2基因组DNA的提取 2
1.2.1黄鳝粘液采集2
1.2.2样品DNA的提取2
1.3 AFLP分析3
1.3.1 DNA的双酶切3
1.3.2 DNA片段接头的连接3
1.3.3 预扩增3
1.3.4 选择性扩增 3
1.3.5 PAGE胶检测3
2 结果与分析4
2.1 AFLP扩增结果4
2.2 三种体色黄鳝的遗传距离分析4
3 讨论5
3.1 AFLP技术在研究黄鳝遗传多样性中的优越性5
3.2 三种体色黄鳝的遗传多样性分析5
致谢5
参考文献5
三种体色黄鳝的遗传多样性的AFLP分析
引言
引言
鳝 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
鱼（Monopterus albus）属于合鳃鱼目，合鳃鱼科，黄鳝属，也就是我们俗称的黄鳝。合鳃鱼目在我国分布有两种，一种是较为常见的黄鳝，喜欢安静，一般静卧在水底，常常生活在水边的石缝或是泥洞，夏季升温时较为活跃，会进行进食和繁殖活动，冬季寒冷时藏在栖息的洞里，是一种重要的淡水经济鱼类；还有一种是山黄鳝，在我国的两广地带、四川、云南、贵州、两湖一带、安徽、山东等地均有分布。黄鳝具有较高的食用价值，口感细嫩，营养丰富。同时根据李时珍《本草纲目》的记载，黄鳝多个部位均可入药，具有较高的药用价值。黄鳝是一种雌雄同体的动物，幼年时为雌性，成年后转变为雄性。通常如果不通过解剖观察性腺判断雌雄的话，一般可通过体长来判断其性别，38cm以下多为雌性，38cm以上多为雄性。生产上黄鳝有三种常见的体色类型：深黄（深黄大斑鳝）、浅黄（浅黄细斑鳝）、青灰（青灰鳝）。这三种体色的黄鳝之中，深黄大斑鳝生长速度最快，繁殖能力最强，也最能适应养殖的环境，浅黄细斑鳝和青灰鳝均弱于深黄大斑鳝。本实验将对这三种体色黄鳝的遗传多样性进行分析，以提高对黄鳝养殖资源的利用率，更为高效的利用黄鳝资源，提高养殖经济效益。
AFLP技术是一种中性选择DNA分子遗传标记技术，目前广泛运用于鱼类和其他水生生物的位克隆、种质鉴定、系统发生进化、遗传图谱构建和种群遗传结构特别亲缘关系较近的生物个体或群体的遗传多样性研究，优点是可靠性高，重复性强，检测遗传变异灵敏、不受器官或组织种类、生长发育阶段、生存环境不同等诸多因素的影响，因而被广泛应用于水产养殖物种的遗传多样性分析，主要有罗非鱼、鳜鱼、青虾、鲤鱼等。AFLP技术具有分析所需的DNA量少、可重复性好、多态性强、分辨率高、不需要Southern杂交、样品的适用性较为广泛、不具有放射污染危害、无须提前了解被分析的基因组的DNA序列信息等诸多优点。因此，本研究采用AFLP技术对三种体色的黄鳝的遗传多样性分析。本试验主要是通过对三种体色黄鳝群体的AFLP分析，比较三种不同体色黄鳝在遗传多样性上的差异;有助于了解不同体色个体之间的生物多样性，为黄鳝的育种和改良奠定基础。
1 材料与方法
1.1材料选择
选取养殖于大学无锡渔业学院的实验水田中养殖的深黄大斑鳝、浅黄细斑鳝和青灰鳝各12尾进行研究。
1.2基因组DNA的提取
1.2.1黄鳝粘液采集
实验时将黄鳝取出，将其放置在干净的容器中加入适量的生理盐水，使其分泌粘液。在大约10min后，用塑料尺轻轻刮取黄鳝体表分泌出的粘液，然后将塑料尺上刮取的粘液移入离心管之中。重复该操作，直至取得足量的粘液样品。将粘液转移到2 mL的离心管中，采集粘液大约40μL。采集后的粘液置于4℃冰箱中保存备用。
1.2.2样品DNA的提取
1.向装有粘液样品的离心管中加入500μL的STE缓冲液，再加入10μL的蛋白酶K，55℃过夜消化。
2.待样品消化完全后，向离心管中加入等体积的酚氯仿混合液（1:1），剧烈震荡56min，使其变成奶咖色。
3.将样品放入离心机进行12000rmin1离心10min后，取上清液（注意不要取到中间介质以及下层液体）300μL，将等体积氯仿加入离心管中，振荡混匀。
4.然后再放入离心机中进行12000rmin1离心10min。再取上清液（注意不要取到中间介质以及下层液体），向离心管中加入60μL醋酸钠以及1500μL无水乙醇，颠倒混匀。
5.再将样品放入离心机中进行12000rmin1离心10min，弃掉上清液。
6.向离心管中加入1mL70%乙醇，颠倒混匀数次后，使离心管中的白色沉淀悬浮。
7.最后，将样品放入离心机中进行12000rmin1离心10min后，弃掉上清液。
8.然后在室温条件下，开盖静置，待其乙醇挥发干净，加入灭菌水30μL溶解，即可得到DNA溶液。
1.3 AFLP分析
表1 AFLP 所用接头和引物的序列
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料选取 2
1.2基因组DNA的提取 2
1.2.1黄鳝粘液采集2
1.2.2样品DNA的提取2
1.3 AFLP分析3
1.3.1 DNA的双酶切3
1.3.2 DNA片段接头的连接3
1.3.3 预扩增3
1.3.4 选择性扩增 3
1.3.5 PAGE胶检测3
2 结果与分析4
2.1 AFLP扩增结果4
2.2 三种体色黄鳝的遗传距离分析4
3 讨论5
3.1 AFLP技术在研究黄鳝遗传多样性中的优越性5
3.2 三种体色黄鳝的遗传多样性分析5
致谢5
参考文献5
三种体色黄鳝的遗传多样性的AFLP分析
引言
引言
鳝 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
鱼（Monopterus albus）属于合鳃鱼目，合鳃鱼科，黄鳝属，也就是我们俗称的黄鳝。合鳃鱼目在我国分布有两种，一种是较为常见的黄鳝，喜欢安静，一般静卧在水底，常常生活在水边的石缝或是泥洞，夏季升温时较为活跃，会进行进食和繁殖活动，冬季寒冷时藏在栖息的洞里，是一种重要的淡水经济鱼类；还有一种是山黄鳝，在我国的两广地带、四川、云南、贵州、两湖一带、安徽、山东等地均有分布。黄鳝具有较高的食用价值，口感细嫩，营养丰富。同时根据李时珍《本草纲目》的记载，黄鳝多个部位均可入药，具有较高的药用价值。黄鳝是一种雌雄同体的动物，幼年时为雌性，成年后转变为雄性。通常如果不通过解剖观察性腺判断雌雄的话，一般可通过体长来判断其性别，38cm以下多为雌性，38cm以上多为雄性。生产上黄鳝有三种常见的体色类型：深黄（深黄大斑鳝）、浅黄（浅黄细斑鳝）、青灰（青灰鳝）。这三种体色的黄鳝之中，深黄大斑鳝生长速度最快，繁殖能力最强，也最能适应养殖的环境，浅黄细斑鳝和青灰鳝均弱于深黄大斑鳝。本实验将对这三种体色黄鳝的遗传多样性进行分析，以提高对黄鳝养殖资源的利用率，更为高效的利用黄鳝资源，提高养殖经济效益。
AFLP技术是一种中性选择DNA分子遗传标记技术，目前广泛运用于鱼类和其他水生生物的位克隆、种质鉴定、系统发生进化、遗传图谱构建和种群遗传结构特别亲缘关系较近的生物个体或群体的遗传多样性研究，优点是可靠性高，重复性强，检测遗传变异灵敏、不受器官或组织种类、生长发育阶段、生存环境不同等诸多因素的影响，因而被广泛应用于水产养殖物种的遗传多样性分析，主要有罗非鱼、鳜鱼、青虾、鲤鱼等。AFLP技术具有分析所需的DNA量少、可重复性好、多态性强、分辨率高、不需要Southern杂交、样品的适用性较为广泛、不具有放射污染危害、无须提前了解被分析的基因组的DNA序列信息等诸多优点。因此，本研究采用AFLP技术对三种体色的黄鳝的遗传多样性分析。本试验主要是通过对三种体色黄鳝群体的AFLP分析，比较三种不同体色黄鳝在遗传多样性上的差异;有助于了解不同体色个体之间的生物多样性，为黄鳝的育种和改良奠定基础。
1 材料与方法
1.1材料选择
选取养殖于大学无锡渔业学院的实验水田中养殖的深黄大斑鳝、浅黄细斑鳝和青灰鳝各12尾进行研究。
1.2基因组DNA的提取
1.2.1黄鳝粘液采集
实验时将黄鳝取出，将其放置在干净的容器中加入适量的生理盐水，使其分泌粘液。在大约10min后，用塑料尺轻轻刮取黄鳝体表分泌出的粘液，然后将塑料尺上刮取的粘液移入离心管之中。重复该操作，直至取得足量的粘液样品。将粘液转移到2 mL的离心管中，采集粘液大约40μL。采集后的粘液置于4℃冰箱中保存备用。
1.2.2样品DNA的提取
1.向装有粘液样品的离心管中加入500μL的STE缓冲液，再加入10μL的蛋白酶K，55℃过夜消化。
2.待样品消化完全后，向离心管中加入等体积的酚氯仿混合液（1:1），剧烈震荡56min，使其变成奶咖色。
3.将样品放入离心机进行12000rmin1离心10min后，取上清液（注意不要取到中间介质以及下层液体）300μL，将等体积氯仿加入离心管中，振荡混匀。
4.然后再放入离心机中进行12000rmin1离心10min。再取上清液（注意不要取到中间介质以及下层液体），向离心管中加入60μL醋酸钠以及1500μL无水乙醇，颠倒混匀。
5.再将样品放入离心机中进行12000rmin1离心10min，弃掉上清液。
6.向离心管中加入1mL70%乙醇，颠倒混匀数次后，使离心管中的白色沉淀悬浮。
7.最后，将样品放入离心机中进行12000rmin1离心10min后，弃掉上清液。
8.然后在室温条件下，开盖静置，待其乙醇挥发干净，加入灭菌水30μL溶解，即可得到DNA溶液。
1.3 AFLP分析
表1 AFLP 所用接头和引物的序列
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/nongxue/scyz/4.html
