黑木耳多糖的提取工艺研究
摘 要黑木耳多糖是黑木耳的主要活性成分，具有多种药理作用、良好的组织相容性和生物降解性，安全无毒，来源可靠等优点，本文通过对黑木耳多糖提取工艺研究，充分提高黑木耳资源的利用。本论文采用碱液提取法，以黑木耳粗多糖得率为评价指标，进行单因素试验考察。考察因素为：浸提温度、碱液浓度、料液比、粉末粒度、提取时间，对黑木耳粗多糖得率的影响，其中浸提温度、碱液浓度、料液比、粉末粒度、提取时间对黑木耳粗多糖得率影响显著。通过单因素试验，最终确定了黑木耳粗多糖的最佳提取工艺为：粉末粒度60目、碱液浓度0.3mol/L、提取温度80℃、料液比1:40、提取时间2h，在此工艺条件下，黑木耳粗多糖的得率为11.3%。黑木耳粗多糖经过分离纯化，得到精制的黑木耳多糖，本论文采用硫酸-苯酚法来测定精制黑木耳多糖的含量。以无水葡萄糖为对照，建立了黑木耳多糖含量测定的方法学，试验表明所建立的方法学线性关系良好，精密度和回收率均符合要求。精制后的黑木耳多糖，多糖含量为90.6%，纯度较好。目 录
1 黑木耳多糖的研究概况
1.1黑木耳多糖的药理作用 1
1.1.1抗凝血和抗血栓作用 1
1.1.2降血脂作用 2
1.1.3抗衰老作用 2
1.1.4抗肿瘤作用 2
1.1.5调节免疫功能 2
1.1.6运动机能的作用 3
1.2黑木耳多糖的结构 3
1.3黑木耳多糖的提取工艺 3
1.3.1热水提取法 3
1.3.2碱液提取法 4
1.3.3酶提取法 4
1.3.4超声波酶提取法 4
1.3.5微波提取法 5
2 黑木耳多糖含量测定方法学的建立
2.1仪器与试药 6
2.1.1仪器 6
2.1.2试药...6
2.2黑木耳多糖含量测定的方法学的建立 6
2.2.1黑木耳多糖的一般提取流程 6
2.2.2溶液的配置 6
2.2.3测定方法 7
2.2.4紫外吸收波长的选择 7
2.2.5标准曲线的绘制 7
2.2.6稳定性试验 8
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
/> 2.1.1仪器 6
2.1.2试药...6
2.2黑木耳多糖含量测定的方法学的建立 6
2.2.1黑木耳多糖的一般提取流程 6
2.2.2溶液的配置 6
2.2.3测定方法 7
2.2.4紫外吸收波长的选择 7
2.2.5标准曲线的绘制 7
2.2.6稳定性试验 8
2.2.7精密度 8
2.2.8回收率试验 9
2.3小结 9
3 黑木耳多糖的提取工艺研究
3.1 仪器与试药 10
3.1.1仪器 10
3.1.2试药 10
3.2实验方法与内容 10
3.2.1 黑木耳多糖的提取流程图 10
3.2.2不同黑木耳粉末粒度对多糖得率的影响 11
3.2.3不同浓度的碱液对黑木耳多糖得率的影响 11
3.2.4不同浸提温度对黑木耳多糖得率的影响 12
3.2.5不同料液比对黑木耳多糖得率的影响 13
3.2.6不同浸提时间对黑木耳多糖得率的影响 14
3.2.7最优提取工艺验证 14
3.3黑木耳多糖的分离纯化 15
3.3.1黑木耳多糖的脱蛋白 15
3.3.2黑木耳多糖的脱色 15
3.3.3黑木耳多糖的纯化 15
3.3.4精制黑木耳多糖的含量测定 15
3.4小结 15
结论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 黑木耳多糖的研究概况
黑木耳(Auricularia auricular (L.ex Hook.) Underwood)隶属于真菌门、担子菌、木耳目、木耳科、木耳属，别名有光木耳、木耳、云耳、木蛾、耳子、木茸、木菌等，是著名药食兼用真菌。我国是世界上黑木耳产量最多的国家之一，黑木耳在我国的自然分布很广。早在明朝《本草纲目》中，就有黑木耳药理活性的相关记录，记载木耳生于朽木之上，性甘，主治益气不饥，强志轻身，痔疮的治疗、血液的净化等作用。
黑木耳含有多种化学成分包括腺苷类、黑木耳色素、留醇类物质、卵 脂、脑 脂和鞘 脂、黄酮、黑木耳多糖等,其中糖类是黑木耳的主要活性物质。黑木耳中含有较多的多糖，黑木耳多糖作为生物活性的重要 物质，具有抗肿瘤、抗血栓、抗辐射、降血糖、降血脂、清除氧自由基、调节免疫等多种生物功能，成为医药领域的一大研究热点。我国逐渐也开始了对黑木耳多糖的研究，并取得了一系列的成果。
现就近年来黑木耳多糖的药理作用、黑木耳多糖的结构和提取工艺等方面的研究概况总结如下。
1.1黑木耳多糖的药理作用
1.1.1 抗凝血和抗血栓作用
根据报道黑木耳可延长血凝时间，用黑木耳多糖做体内实验，实验表明静滴、腹部注射、灌胃的形式说明其具有拟凝血作用，体外实验结果表明黑木耳多糖对家兔凝血酶原时间无影响，但可明显延长家兔的部分凝血时间，黑木耳多糖作体外实验，对凝血酶的原时间没有影响但是时间增加，申建和等[1]报道。研究指出，灌胃给药木耳多糖，可明显延长家兔纤维蛋白血栓和特异性血栓的形成时间；实验结果说明，用黑木耳多糖在灌胃的过程中，能增加家兔血栓的形成时间，缩短血栓长度；减少血栓重量；降低血小板粘附度；减少血小板数量；黑木耳多糖有很好的的抗凝血和抗血栓活性。并且说明豚鼠蛋白容散时间减短，可以使血浆的蛋白元下降，使酶的活性提高。Yoona SJ等[2] 他们还将黑木耳多糖和阿司匹林的抗凝血效果进行了比较，认为可将前者作为抗凝血、抗血小板聚集及抗血栓的新化合物进行开发和利用。金燕贻[3]等研究表明急性冠状动脉闭塞后局部心肌的氧供需平衡是心肌损伤大小的决定性因素。血管扩张剂通过其血液动力学作用，有可能改善这一平衡。潘生丁是一强力的血管扩张剂，同时还有强力的抗血栓作用。
1.1.2 降血脂作用
黑木耳多糖具有降血脂的作用，经常在临床上治疗高血脂和一些心脑血管疾病。于国萍等[4]证明了黑木耳多糖有明显的降血脂作用。研究了甘油三酯、总胆固醇、低高密度脂蛋白通过高脂小鼠模型用不同的浓度看对其的影响。实验说明，多糖组小鼠血清（甘油三酯、总胆固醇、低高密度脂）比高脂组的低，但高密度脂蛋白比高脂组的显高，表明黑木耳多糖具有降血脂的作用。唐娟等[5]用糖尿病和正常的小鼠做实验主要研究黑木耳多糖具有降血糖的功能，用小鼠为110、210、410mg/kg。结论；质量分数为200mg/kg上的血糖值下降，对正常的小鼠无影响。
1.1.3 抗衰老作用
据报道黑木耳多糖能使果蝇寿命增长，使小鼠在缺氧时间存活长[6]。实验证明，黑木耳多糖可降低衰老心肌比模型组，增加脑和肝中SOD活力；能过抑制组织活性，同时可增加果蝇的飞翔能力[7]。
史亚丽等[8]建立的模型小鼠（负重游泳）研究粗多糖的抗衰老，建立小鼠模型组后，使血浆中的酶活性下降，肝脏和心肌等组织内超氧化物歧化酶活性提高。说明黑木耳的多糖能升高超氧化物歧化酶的活性，说明具有抗衰老的作用。检测结果表明AAPIIa具有抗衰老作用机制可使胸腺细胞周期改变，对其凋亡有抑制作用，使死亡率减少[9]。药物浓度范围在200600ug/mL时给药黑木耳中性多糖和黑木耳酸性多糖的细胞细胞存活率均为50%。在黑木耳中性和酸性的多糖的条件下，细胞的活下机率为51%在药材的浓度210600ug/mL情况下[10]。
1.1.4 抗肿瘤作
1 黑木耳多糖的研究概况
1.1黑木耳多糖的药理作用 1
1.1.1抗凝血和抗血栓作用 1
1.1.2降血脂作用 2
1.1.3抗衰老作用 2
1.1.4抗肿瘤作用 2
1.1.5调节免疫功能 2
1.1.6运动机能的作用 3
1.2黑木耳多糖的结构 3
1.3黑木耳多糖的提取工艺 3
1.3.1热水提取法 3
1.3.2碱液提取法 4
1.3.3酶提取法 4
1.3.4超声波酶提取法 4
1.3.5微波提取法 5
2 黑木耳多糖含量测定方法学的建立
2.1仪器与试药 6
2.1.1仪器 6
2.1.2试药...6
2.2黑木耳多糖含量测定的方法学的建立 6
2.2.1黑木耳多糖的一般提取流程 6
2.2.2溶液的配置 6
2.2.3测定方法 7
2.2.4紫外吸收波长的选择 7
2.2.5标准曲线的绘制 7
2.2.6稳定性试验 8
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
/> 2.1.1仪器 6
2.1.2试药...6
2.2黑木耳多糖含量测定的方法学的建立 6
2.2.1黑木耳多糖的一般提取流程 6
2.2.2溶液的配置 6
2.2.3测定方法 7
2.2.4紫外吸收波长的选择 7
2.2.5标准曲线的绘制 7
2.2.6稳定性试验 8
2.2.7精密度 8
2.2.8回收率试验 9
2.3小结 9
3 黑木耳多糖的提取工艺研究
3.1 仪器与试药 10
3.1.1仪器 10
3.1.2试药 10
3.2实验方法与内容 10
3.2.1 黑木耳多糖的提取流程图 10
3.2.2不同黑木耳粉末粒度对多糖得率的影响 11
3.2.3不同浓度的碱液对黑木耳多糖得率的影响 11
3.2.4不同浸提温度对黑木耳多糖得率的影响 12
3.2.5不同料液比对黑木耳多糖得率的影响 13
3.2.6不同浸提时间对黑木耳多糖得率的影响 14
3.2.7最优提取工艺验证 14
3.3黑木耳多糖的分离纯化 15
3.3.1黑木耳多糖的脱蛋白 15
3.3.2黑木耳多糖的脱色 15
3.3.3黑木耳多糖的纯化 15
3.3.4精制黑木耳多糖的含量测定 15
3.4小结 15
结论 16
参考文献 17
致 谢 19
1 黑木耳多糖的研究概况
黑木耳(Auricularia auricular (L.ex Hook.) Underwood)隶属于真菌门、担子菌、木耳目、木耳科、木耳属，别名有光木耳、木耳、云耳、木蛾、耳子、木茸、木菌等，是著名药食兼用真菌。我国是世界上黑木耳产量最多的国家之一，黑木耳在我国的自然分布很广。早在明朝《本草纲目》中，就有黑木耳药理活性的相关记录，记载木耳生于朽木之上，性甘，主治益气不饥，强志轻身，痔疮的治疗、血液的净化等作用。
黑木耳含有多种化学成分包括腺苷类、黑木耳色素、留醇类物质、卵 脂、脑 脂和鞘 脂、黄酮、黑木耳多糖等,其中糖类是黑木耳的主要活性物质。黑木耳中含有较多的多糖，黑木耳多糖作为生物活性的重要 物质，具有抗肿瘤、抗血栓、抗辐射、降血糖、降血脂、清除氧自由基、调节免疫等多种生物功能，成为医药领域的一大研究热点。我国逐渐也开始了对黑木耳多糖的研究，并取得了一系列的成果。
现就近年来黑木耳多糖的药理作用、黑木耳多糖的结构和提取工艺等方面的研究概况总结如下。
1.1黑木耳多糖的药理作用
1.1.1 抗凝血和抗血栓作用
根据报道黑木耳可延长血凝时间，用黑木耳多糖做体内实验，实验表明静滴、腹部注射、灌胃的形式说明其具有拟凝血作用，体外实验结果表明黑木耳多糖对家兔凝血酶原时间无影响，但可明显延长家兔的部分凝血时间，黑木耳多糖作体外实验，对凝血酶的原时间没有影响但是时间增加，申建和等[1]报道。研究指出，灌胃给药木耳多糖，可明显延长家兔纤维蛋白血栓和特异性血栓的形成时间；实验结果说明，用黑木耳多糖在灌胃的过程中，能增加家兔血栓的形成时间，缩短血栓长度；减少血栓重量；降低血小板粘附度；减少血小板数量；黑木耳多糖有很好的的抗凝血和抗血栓活性。并且说明豚鼠蛋白容散时间减短，可以使血浆的蛋白元下降，使酶的活性提高。Yoona SJ等[2] 他们还将黑木耳多糖和阿司匹林的抗凝血效果进行了比较，认为可将前者作为抗凝血、抗血小板聚集及抗血栓的新化合物进行开发和利用。金燕贻[3]等研究表明急性冠状动脉闭塞后局部心肌的氧供需平衡是心肌损伤大小的决定性因素。血管扩张剂通过其血液动力学作用，有可能改善这一平衡。潘生丁是一强力的血管扩张剂，同时还有强力的抗血栓作用。
1.1.2 降血脂作用
黑木耳多糖具有降血脂的作用，经常在临床上治疗高血脂和一些心脑血管疾病。于国萍等[4]证明了黑木耳多糖有明显的降血脂作用。研究了甘油三酯、总胆固醇、低高密度脂蛋白通过高脂小鼠模型用不同的浓度看对其的影响。实验说明，多糖组小鼠血清（甘油三酯、总胆固醇、低高密度脂）比高脂组的低，但高密度脂蛋白比高脂组的显高，表明黑木耳多糖具有降血脂的作用。唐娟等[5]用糖尿病和正常的小鼠做实验主要研究黑木耳多糖具有降血糖的功能，用小鼠为110、210、410mg/kg。结论；质量分数为200mg/kg上的血糖值下降，对正常的小鼠无影响。
1.1.3 抗衰老作用
据报道黑木耳多糖能使果蝇寿命增长，使小鼠在缺氧时间存活长[6]。实验证明，黑木耳多糖可降低衰老心肌比模型组，增加脑和肝中SOD活力；能过抑制组织活性，同时可增加果蝇的飞翔能力[7]。
史亚丽等[8]建立的模型小鼠（负重游泳）研究粗多糖的抗衰老，建立小鼠模型组后，使血浆中的酶活性下降，肝脏和心肌等组织内超氧化物歧化酶活性提高。说明黑木耳的多糖能升高超氧化物歧化酶的活性，说明具有抗衰老的作用。检测结果表明AAPIIa具有抗衰老作用机制可使胸腺细胞周期改变，对其凋亡有抑制作用，使死亡率减少[9]。药物浓度范围在200600ug/mL时给药黑木耳中性多糖和黑木耳酸性多糖的细胞细胞存活率均为50%。在黑木耳中性和酸性的多糖的条件下，细胞的活下机率为51%在药材的浓度210600ug/mL情况下[10]。
1.1.4 抗肿瘤作
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/zygc/1236.html
