响应面法优化黑果枸杞多糖的微波提取工艺
摘 要本次课题的主要内容是利用响应面法对黑果枸杞中多糖的微波提取工艺进行优化实验，通过具体的实验选择出最佳的微波提取工艺条件。本次实验课题首先采用单因素实验的方法，分别测试微波功率、微波时间、液料比对黑果枸杞多糖得率的影响，通过实验测试出这三个因素的对于黑果枸杞多糖的提取后，然后采用响应面法，进一步的确定微波提取黑果枸杞中多糖的最佳的条件微波功率457.19Hz，微波时间是125.43，料液比是1:32.81，其得率是8.51633%；根据现实可操作性，对条件进行修改，最终选择的组合是微波功率是460Hz，料液比为1:30，微波时间是125s，多糖得率为8.496%，并且通过验证这些条件可靠，可以简单有效的提取黑果枸杞中的多糖成分。
目 录
1. 概述 1
1.1. 选题背景 1
1.2. 枸杞的生物活性与作用 1
1.2.1. 抗氧化、改善睡眠 1
1.2.2. 抗疲劳、降血糖、治疗肝病 2
1.2.3. 延缓衰老、增强免疫力 2
1.2.4. 抗辐射 2
1.2.5. 明目作用 3
1.2.6. 抗癌作用 3
1.3. 枸杞多糖现有的提取方法 3
1.3.1. 水提醇沉法 3
1.3.2. 超声波辅助法 4
1.3.3. 微波辅助提取法 5
1.3.4. 酶解法 6
1.4. 实验方法选择和实验意义 6
2. 实验 8
2.1. 实验仪器与材料 8
2.1.1. 实验仪器 8
2.1.2. 试剂与药材 8
2.2. 标准品溶液和供试品溶液的制备 8
2.2.1. 原料的预处理 8
2.2.2. 配制葡萄糖标准品溶液 9
2.2.3. 供试品的制备 9
2.3. 多糖含量测定 9
2.3.1. 绘制标准曲线 9
表21葡萄糖标准曲线数据 9
2.4. 试验测试验证 10
2.4.1. 精密度验证实验 10
表22精密度试验结果 10
2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
.4.2. 重复性验证实验 10
2.4.3. 稳定性试验 11
2.4.4. 总结 11
2.5. 多糖含量的测定方法 11
2.5.1. 枸杞多糖控制单因素法提取试验 11
2.5.2. 微波频率对多糖提取率的影响 12
2.5.3. 微波时间对提取率的影响 13
2.5.4. 料液比对提取率的影响 14
2.6. 响应曲面优化试验 15
2.6.1. 响应曲面优化试验结果 15
2.6.2. 结果分析 17
2.6.3. 多元二次回归方程的计算 18
2.6.4. 证等高线和三维响应曲面图分析 18
2.6.5. 优化最佳因素 22
2.6.6. 最佳因素验证和调整 22
2.7. 小结 23
3. 结 论 24
参考文献 25
致 谢 27
概述
选题背景
黑果枸杞即是黑枸杞，拉丁文名：Lycium ruthenicum Murr，是一种茄科类的极具有药物价值的中药材植物，果实中含有丰富的紫红色素、多糖、花青素等极易溶于水，属天然的水溶性花色甙黄酮类
黑枸杞中含有多糖。而多糖对免疫起到正调节的作用。其中主要有效成分为枸杞多糖。药物研究中多次权威机构通过实验数据发现多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降压、解毒、抗辐射等功效枸杞多糖就越来越受到人们的关注。
枸杞的生物活性与作用
抗氧化、改善睡眠
黑果枸杞在改善睡眠方面也有着很好的作用，黑果枸杞中也富含花青素，近些年通过对花青素的研究发现，花青素有着保护细胞的作用，能有效的防止细胞中脂质被自由基氧化所造成的细胞膜损伤，并且花青素是一种可以直接脑部给药的物质，花青素能有效的穿过人体的血脑屏障，相比与其他化学物质，花青素能直接穿过血脑屏障可以有效的保护脑神经细胞，使得脑神经细胞不被氧化，保持细胞膜的完整，不被损害，这对人脑有着非常大的作用，通过使用黑果枸杞可以保护大脑神经细胞的细胞膜完整，使有害物质和毒素不能进入，从而使脑组织稳定，进而改善睡眠。
刘洋[1]用对黑果枸杞叶粗多糖及其纯化后的5个组分的多糖分别进行了体外还原能力及清除自由基能力的考察，结果表明，粗多糖及纯化后的多糖均具有不同程度的抗氧化能力。研究发现，黑果枸杞粗多糖的抗氧化能力也随着枸杞多糖的浓度的不断增大而增大，并且枸杞多糖的抗氧化能力比精制的多糖要强的多。
抗疲劳、降血糖、治疗肝病
黑果枸杞多糖具有一定的抗疲劳、降低血糖的生理功效。
陈晓琴[2]等将小鼠在水中负重游泳时间作为参考，发现黑果枸杞多糖干预后小鼠的负重游泳时间延长；同时，在比较多糖在三组不同的小鼠模型中，发现糖尿病可以通过黑果枸杞多糖进行一定的防治。
郭音[3]等通过将黑果枸杞多糖作用于五种不同情况的小鼠组，并从中发现用黑果枸杞多糖处理过的小鼠小组在阻塞性黄疸致肝损伤相比其余的四组小鼠有一定的恢复，并推测其作用机制可能与NFkB信号通路有关，为阻塞性黄疸的治疗指明了一个新的理论方向。
延缓衰老、增强免疫力
黑果枸杞中含有的多糖、花色素，研究表明多糖具有提高免疫力的效果，并且花色素使有效的自由基清除剂，花色素的作用人体后，可以延缓细胞组织衰老，使机体有活力，从而达到延年益寿的效果。
刘杰，潘晓秋[4]等在实验中建立了含有D半乳糖致衰老的小鼠模型，通过测定血液丙二醛（MDA）等确定了枸杞多糖对小鼠细胞衰老的抑制作用。
王建东，马吉锋[5]等使用枸杞和黄芪多糖作为试剂，对小白鼠进行灌胃，灌胃后对小鼠外周血 IgG、IgM 含量进行了测试，结果显示枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液红细胞数量的影响极大的促使体内淋巴细胞的增多，从而增强免疫力。
抗辐射
黑果枸杞有着抗辐射的功能，枸杞多糖可以减轻紫外线对细胞辐射，一般认为紫外线会对皮肤中的成纤维细胞氧化损伤,并且引起细胞中脂质过氧化反应，从而降低细胞的增殖能力、脂质的氧化还会对细胞膜造成进一步的破坏。
黄庚娣，贺芳[6]等通过对小鼠单核白细胞进行紫外线照射，分别设计了MTT法、中性红吞噬法和Griess法检测来检测受紫外照射后的小鼠单核白细胞的存活率、一氧化氮的分泌量和白细胞的吞噬能力。实验结果显示，被紫外线处理过的小鼠单核白细胞发生氧化作用并且收到了损伤，但是在结果中用枸杞多糖处理小鼠单核白细胞的无论是存活率或者吞噬能力都有显著提高，和其他未经过枸杞多糖处理的小鼠单核白细胞相比一氧化氮的分泌水平有着明显的降低，通过对实验结果的分析充分的说明枸杞多糖对紫外线有着一定的抗辐射能力，能减少细胞的损伤。
目 录
1. 概述 1
1.1. 选题背景 1
1.2. 枸杞的生物活性与作用 1
1.2.1. 抗氧化、改善睡眠 1
1.2.2. 抗疲劳、降血糖、治疗肝病 2
1.2.3. 延缓衰老、增强免疫力 2
1.2.4. 抗辐射 2
1.2.5. 明目作用 3
1.2.6. 抗癌作用 3
1.3. 枸杞多糖现有的提取方法 3
1.3.1. 水提醇沉法 3
1.3.2. 超声波辅助法 4
1.3.3. 微波辅助提取法 5
1.3.4. 酶解法 6
1.4. 实验方法选择和实验意义 6
2. 实验 8
2.1. 实验仪器与材料 8
2.1.1. 实验仪器 8
2.1.2. 试剂与药材 8
2.2. 标准品溶液和供试品溶液的制备 8
2.2.1. 原料的预处理 8
2.2.2. 配制葡萄糖标准品溶液 9
2.2.3. 供试品的制备 9
2.3. 多糖含量测定 9
2.3.1. 绘制标准曲线 9
表21葡萄糖标准曲线数据 9
2.4. 试验测试验证 10
2.4.1. 精密度验证实验 10
表22精密度试验结果 10
2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
.4.2. 重复性验证实验 10
2.4.3. 稳定性试验 11
2.4.4. 总结 11
2.5. 多糖含量的测定方法 11
2.5.1. 枸杞多糖控制单因素法提取试验 11
2.5.2. 微波频率对多糖提取率的影响 12
2.5.3. 微波时间对提取率的影响 13
2.5.4. 料液比对提取率的影响 14
2.6. 响应曲面优化试验 15
2.6.1. 响应曲面优化试验结果 15
2.6.2. 结果分析 17
2.6.3. 多元二次回归方程的计算 18
2.6.4. 证等高线和三维响应曲面图分析 18
2.6.5. 优化最佳因素 22
2.6.6. 最佳因素验证和调整 22
2.7. 小结 23
3. 结 论 24
参考文献 25
致 谢 27
概述
选题背景
黑果枸杞即是黑枸杞，拉丁文名：Lycium ruthenicum Murr，是一种茄科类的极具有药物价值的中药材植物，果实中含有丰富的紫红色素、多糖、花青素等极易溶于水，属天然的水溶性花色甙黄酮类
黑枸杞中含有多糖。而多糖对免疫起到正调节的作用。其中主要有效成分为枸杞多糖。药物研究中多次权威机构通过实验数据发现多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降压、解毒、抗辐射等功效枸杞多糖就越来越受到人们的关注。
枸杞的生物活性与作用
抗氧化、改善睡眠
黑果枸杞在改善睡眠方面也有着很好的作用，黑果枸杞中也富含花青素，近些年通过对花青素的研究发现，花青素有着保护细胞的作用，能有效的防止细胞中脂质被自由基氧化所造成的细胞膜损伤，并且花青素是一种可以直接脑部给药的物质，花青素能有效的穿过人体的血脑屏障，相比与其他化学物质，花青素能直接穿过血脑屏障可以有效的保护脑神经细胞，使得脑神经细胞不被氧化，保持细胞膜的完整，不被损害，这对人脑有着非常大的作用，通过使用黑果枸杞可以保护大脑神经细胞的细胞膜完整，使有害物质和毒素不能进入，从而使脑组织稳定，进而改善睡眠。
刘洋[1]用对黑果枸杞叶粗多糖及其纯化后的5个组分的多糖分别进行了体外还原能力及清除自由基能力的考察，结果表明，粗多糖及纯化后的多糖均具有不同程度的抗氧化能力。研究发现，黑果枸杞粗多糖的抗氧化能力也随着枸杞多糖的浓度的不断增大而增大，并且枸杞多糖的抗氧化能力比精制的多糖要强的多。
抗疲劳、降血糖、治疗肝病
黑果枸杞多糖具有一定的抗疲劳、降低血糖的生理功效。
陈晓琴[2]等将小鼠在水中负重游泳时间作为参考，发现黑果枸杞多糖干预后小鼠的负重游泳时间延长；同时，在比较多糖在三组不同的小鼠模型中，发现糖尿病可以通过黑果枸杞多糖进行一定的防治。
郭音[3]等通过将黑果枸杞多糖作用于五种不同情况的小鼠组，并从中发现用黑果枸杞多糖处理过的小鼠小组在阻塞性黄疸致肝损伤相比其余的四组小鼠有一定的恢复，并推测其作用机制可能与NFkB信号通路有关，为阻塞性黄疸的治疗指明了一个新的理论方向。
延缓衰老、增强免疫力
黑果枸杞中含有的多糖、花色素，研究表明多糖具有提高免疫力的效果，并且花色素使有效的自由基清除剂，花色素的作用人体后，可以延缓细胞组织衰老，使机体有活力，从而达到延年益寿的效果。
刘杰，潘晓秋[4]等在实验中建立了含有D半乳糖致衰老的小鼠模型，通过测定血液丙二醛（MDA）等确定了枸杞多糖对小鼠细胞衰老的抑制作用。
王建东，马吉锋[5]等使用枸杞和黄芪多糖作为试剂，对小白鼠进行灌胃，灌胃后对小鼠外周血 IgG、IgM 含量进行了测试，结果显示枸杞多糖、黄芪多糖及其组合对血液红细胞数量的影响极大的促使体内淋巴细胞的增多，从而增强免疫力。
抗辐射
黑果枸杞有着抗辐射的功能，枸杞多糖可以减轻紫外线对细胞辐射，一般认为紫外线会对皮肤中的成纤维细胞氧化损伤,并且引起细胞中脂质过氧化反应，从而降低细胞的增殖能力、脂质的氧化还会对细胞膜造成进一步的破坏。
黄庚娣，贺芳[6]等通过对小鼠单核白细胞进行紫外线照射，分别设计了MTT法、中性红吞噬法和Griess法检测来检测受紫外照射后的小鼠单核白细胞的存活率、一氧化氮的分泌量和白细胞的吞噬能力。实验结果显示，被紫外线处理过的小鼠单核白细胞发生氧化作用并且收到了损伤，但是在结果中用枸杞多糖处理小鼠单核白细胞的无论是存活率或者吞噬能力都有显著提高，和其他未经过枸杞多糖处理的小鼠单核白细胞相比一氧化氮的分泌水平有着明显的降低，通过对实验结果的分析充分的说明枸杞多糖对紫外线有着一定的抗辐射能力，能减少细胞的损伤。
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