河蚬多糖对正常小鼠免疫功能的作用研究
目 录
1 引言 1
1.1 多糖的药理作用 1
1.2 多糖免疫调节作用的研究进展 2
1.3 河蚬活性成分的研究现状 4
1.4 本实验的探究背景及意义 5
2 实验部分 6
2.1 实验材料 6
2.2 主要试剂及药品 6
2.3 主要实验仪器 6
2.4 试验方法 7
2.5 数据统计处理 9
3 结果与讨论 9
3.1 河蚬多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 9
3.2 小鼠碳廓清实验 12
3.3 对小鼠免疫器官脏器指数的影响 13
3.4 对小鼠迟发型过敏反应（DTH）的影响 14
结论 16
致谢 17
参考文献 18
1 引言
目前，越来越多的研究倾向于天然药物，由于陆地自然资源的紧张与环境问题日益突出，人们将目光逐渐转移至海洋。因为海洋生物丰富多样，海洋资源十分广泛，表明海洋是人类的另一个天然药物之源。根据我国医疗药物记载，早在公元前300年就有海洋药物的药用记载。至今已有不少文献研究表明，海洋药物具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、增强免疫等生物活性。
河蚬是一种贝壳类水生动物，在我国的江河湖海中分布十分广泛，可以说天然资源丰富。它们生存在水底泥土表层，以水中浮游生物为食物，生长、繁殖力十分旺盛。当然除自然资源，河蚬也可以进行人工饲养。有资料表明，河蚬多糖及蛋白具有抗病毒的特性，由于其含糖量较少，现在对于河蚬多糖的研究报道较少。近几年由于多糖的生物活性多样，使多糖在保健食品和临床的应用日益广泛。基于河蚬来源广，价格低，生物活性多等特点，本文将重点研究河 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
蚬的活性成分之一—多糖。
1.1 多糖的药理作用
1.1.1 整肠和解毒
有报告指出，海藻多糖中则含有较多的鼠李糖，如果长期口服褐藻酸，酸性条件下能在胃中形成一种凝胶保护膜，对胃内创伤有覆盖、保护和预防粘膜炎症的作用，同时对消化道炎症，如恶心、呕吐、疼痛等也有明显的改善作用。并且能抑制重金属锶、铬、铝在体内积累，具有解毒作用[1]。
1.1.2 增强巨噬细胞功能
在机体的免疫系统中，巨噬细胞具有吞噬功能，具有吞噬外来异物和直接杀伤病原体的，同时还能产生肿瘤坏死因子及NO等免疫活性物质杀伤靶细胞，从而发挥其免疫调节作用。由于巨噬细胞在免疫系统中的重要作用，而一直受到重视，特别是在免疫应答和机体防御系统方面。它能表达出几十种有活性的酶，且能产生上百种生物活性物质，是体内最重要的免疫细胞之一。
张庆[2]等人的研究表明多糖能够影响小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF及其mRNA的表达，从而增强巨噬细胞功能。李春明[3]等指出，灵芝多糖能使巨噬细胞中cGMP浓度增加，激活蛋白激酶A，从而激活巨噬细胞来增强免疫功能。
1.1.3 增强淋巴细胞活性
淋巴细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞等，机体的淋巴细胞组成了各个免疫器官，在免疫反应中发挥重要作用。
其中，抗原特异性淋巴细胞在受到抗原刺激后能发生特异性免疫应答，称为T细胞和B细胞[4]。淋巴细胞在机体的细胞免疫和体液免疫诱导中均有重要作用，作为免疫细胞主要有两方面作用：即介导迟发型变态反应和直接杀伤靶细胞。B细胞通过其分泌的抗体行使其免疫功能，活化后的细胞还具有加工和呈递抗原给T细胞的[5]。
1.1.4 增加抗体产生
B细胞分泌的抗体可以执行多种免疫功能。能与抗原特异性结合生成复合物，从而被吞噬细胞清除。抗体还能和抗原结合后再结合补体，使补体活化，杀灭病原体。
现有多种报告指出植物多糖，动物多糖均能促进抗体的产生，使免疫能力增加。SBHan[6]等在细胞水平上研究了从AK根中分离得到的多糖的免疫活性。表明AK多糖能直接促进机体的细胞增殖，增加体内抗体的含量，但不影响干扰素的表达或体外T细胞增殖。研究结果还表明，AK多糖直接激活B细胞，但不作用于T细胞。
1.1.5 其他作用
海洋动物天然产物以抗癌活性方面的研究最多，其次是抗病毒的活性（特别是抗HIV）[7]，另外，抗氧化、抗心血管病（降压、降血脂等）、抗菌、神经生长与功能调节活性等方面的报道也比较多。还有很多研究表明，河蚬多糖具有抗疲劳、降血压、调血脂、抗炎、抗肿瘤等作用。
1.2 多糖免疫调节作用的研究进展
随着人们生活条件的改善，人们对于养生、保健等问题的关注越来越多，为了增强体质，有人选择锻炼，有人选择健康饮食，主要目的都是为了增强机体免疫力。根据上文可知，多糖具有很多药理作用，大量免疫实验证明，多糖能在人体发挥多途径、多层面的免疫调节作用。以下就从多糖对免疫器官和免疫细胞的调节进行具体介绍。
1.2.1 对免疫器官的影响
脾脏、胸腺是机体B细胞和T细胞产生、成熟的场所，是重要的免疫器官。能够及时清除机体病原体，防止病原体侵入人体重要防御系统，直接或间接的影响人体的免疫能力，与疾病的发生和治疗有很大关系。很多免疫研究表明，多糖一般能促进小鼠的免疫器官发育，尤其对发育缺陷或者受到某种免疫抑制的动物机体的免疫器官作用最明显。使用环磷酰胺对小鼠进行免疫抑制时，发现牛膝多糖可以显著缓解环磷酰胺对免疫器官的抑制作用，并且呈现计量相关性[8]。
声殿荣[9]等报道指出，香菇多糖在5 mg/kg和l0 mg/kg的剂量情况下都能显著提高小鼠免疫抑制情况下的脾脏和胸腺指数。梁华平[10]等人在研究黄芪多糖对创伤小鼠模型的影响时发现，黄芪多糖可以显著的拮抗创伤对小鼠胸腺和脾脏重量的减轻。李新华等[11]研究表明，百合多糖可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫器官指数。张立显等[12]的研究表明给正常小鼠口服云芝多糖能刺激其脾脏与胸腺的发育，有利于增强免疫功能。刘洋[13]等人的研究显示，FLP对正常小鼠体重和脏器指数都有增强趋势。
总之，大量研究结果表明，大部分活性多糖都能够有效的剌激免疫脏器的发育，抵抗免疫抑制导致的免疫脏器萎缩，从而提高动物机体的整体免疫能力。
1.2.2 多糖对免疫细胞的影响
免疫细胞包括淋巴细胞和辅助细胞两类，能直接参与免疫应答。在免疫应答中，淋巴细胞起核心作用，吞噬细胞和树突状细胞起辅助作用。本文主要探究了多糖对巨噬细胞的影响。巨噬细胞由单核细胞衍化而来，能直接吞噬侵入体内的有害异物，清除机体自由基以及代谢废物，同时还能加工、呈递抗原信息给靶细胞，是机体免疫功能的基础。
1.3.3 微量元素
有关试验表明[18，19]，河规体内含铁、锌、铬、硒、铜、锰等具有特殊生理功能的微量元素。铁是血红蛋白的重要组成部分，参与体内氧的运送和组织呼吸过程；锌参与体内许多金属酶组成、促进组织再生、维持性机能状态等；硒作为谷胱甘肽过氧化酶的活性中心元素成分参与机体物质能量的代谢，具有保护心血管、降解重金属毒性、抗肿瘤等特殊作用；铬具有预防动脉硬化、促进胰岛素等作用[29]；锰在增强人体免疫功能、抗衰老和补肾壮阳方面具有重要作用。然而，有关这些重要微量元素在河蚬体内的存在形式及其保健作用机理研究尚未见报道，其降解作用机理、硒的存在形式等尚不清楚。因此，以后也可以加强这方面的探索。
1 引言 1
1.1 多糖的药理作用 1
1.2 多糖免疫调节作用的研究进展 2
1.3 河蚬活性成分的研究现状 4
1.4 本实验的探究背景及意义 5
2 实验部分 6
2.1 实验材料 6
2.2 主要试剂及药品 6
2.3 主要实验仪器 6
2.4 试验方法 7
2.5 数据统计处理 9
3 结果与讨论 9
3.1 河蚬多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 9
3.2 小鼠碳廓清实验 12
3.3 对小鼠免疫器官脏器指数的影响 13
3.4 对小鼠迟发型过敏反应（DTH）的影响 14
结论 16
致谢 17
参考文献 18
1 引言
目前，越来越多的研究倾向于天然药物，由于陆地自然资源的紧张与环境问题日益突出，人们将目光逐渐转移至海洋。因为海洋生物丰富多样，海洋资源十分广泛，表明海洋是人类的另一个天然药物之源。根据我国医疗药物记载，早在公元前300年就有海洋药物的药用记载。至今已有不少文献研究表明，海洋药物具有抗炎、抗肿瘤、抗病毒、增强免疫等生物活性。
河蚬是一种贝壳类水生动物，在我国的江河湖海中分布十分广泛，可以说天然资源丰富。它们生存在水底泥土表层，以水中浮游生物为食物，生长、繁殖力十分旺盛。当然除自然资源，河蚬也可以进行人工饲养。有资料表明，河蚬多糖及蛋白具有抗病毒的特性，由于其含糖量较少，现在对于河蚬多糖的研究报道较少。近几年由于多糖的生物活性多样，使多糖在保健食品和临床的应用日益广泛。基于河蚬来源广，价格低，生物活性多等特点，本文将重点研究河 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
蚬的活性成分之一—多糖。
1.1 多糖的药理作用
1.1.1 整肠和解毒
有报告指出，海藻多糖中则含有较多的鼠李糖，如果长期口服褐藻酸，酸性条件下能在胃中形成一种凝胶保护膜，对胃内创伤有覆盖、保护和预防粘膜炎症的作用，同时对消化道炎症，如恶心、呕吐、疼痛等也有明显的改善作用。并且能抑制重金属锶、铬、铝在体内积累，具有解毒作用[1]。
1.1.2 增强巨噬细胞功能
在机体的免疫系统中，巨噬细胞具有吞噬功能，具有吞噬外来异物和直接杀伤病原体的，同时还能产生肿瘤坏死因子及NO等免疫活性物质杀伤靶细胞，从而发挥其免疫调节作用。由于巨噬细胞在免疫系统中的重要作用，而一直受到重视，特别是在免疫应答和机体防御系统方面。它能表达出几十种有活性的酶，且能产生上百种生物活性物质，是体内最重要的免疫细胞之一。
张庆[2]等人的研究表明多糖能够影响小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF及其mRNA的表达，从而增强巨噬细胞功能。李春明[3]等指出，灵芝多糖能使巨噬细胞中cGMP浓度增加，激活蛋白激酶A，从而激活巨噬细胞来增强免疫功能。
1.1.3 增强淋巴细胞活性
淋巴细胞包括T淋巴细胞、B淋巴细胞等，机体的淋巴细胞组成了各个免疫器官，在免疫反应中发挥重要作用。
其中，抗原特异性淋巴细胞在受到抗原刺激后能发生特异性免疫应答，称为T细胞和B细胞[4]。淋巴细胞在机体的细胞免疫和体液免疫诱导中均有重要作用，作为免疫细胞主要有两方面作用：即介导迟发型变态反应和直接杀伤靶细胞。B细胞通过其分泌的抗体行使其免疫功能，活化后的细胞还具有加工和呈递抗原给T细胞的[5]。
1.1.4 增加抗体产生
B细胞分泌的抗体可以执行多种免疫功能。能与抗原特异性结合生成复合物，从而被吞噬细胞清除。抗体还能和抗原结合后再结合补体，使补体活化，杀灭病原体。
现有多种报告指出植物多糖，动物多糖均能促进抗体的产生，使免疫能力增加。SBHan[6]等在细胞水平上研究了从AK根中分离得到的多糖的免疫活性。表明AK多糖能直接促进机体的细胞增殖，增加体内抗体的含量，但不影响干扰素的表达或体外T细胞增殖。研究结果还表明，AK多糖直接激活B细胞，但不作用于T细胞。
1.1.5 其他作用
海洋动物天然产物以抗癌活性方面的研究最多，其次是抗病毒的活性（特别是抗HIV）[7]，另外，抗氧化、抗心血管病（降压、降血脂等）、抗菌、神经生长与功能调节活性等方面的报道也比较多。还有很多研究表明，河蚬多糖具有抗疲劳、降血压、调血脂、抗炎、抗肿瘤等作用。
1.2 多糖免疫调节作用的研究进展
随着人们生活条件的改善，人们对于养生、保健等问题的关注越来越多，为了增强体质，有人选择锻炼，有人选择健康饮食，主要目的都是为了增强机体免疫力。根据上文可知，多糖具有很多药理作用，大量免疫实验证明，多糖能在人体发挥多途径、多层面的免疫调节作用。以下就从多糖对免疫器官和免疫细胞的调节进行具体介绍。
1.2.1 对免疫器官的影响
脾脏、胸腺是机体B细胞和T细胞产生、成熟的场所，是重要的免疫器官。能够及时清除机体病原体，防止病原体侵入人体重要防御系统，直接或间接的影响人体的免疫能力，与疾病的发生和治疗有很大关系。很多免疫研究表明，多糖一般能促进小鼠的免疫器官发育，尤其对发育缺陷或者受到某种免疫抑制的动物机体的免疫器官作用最明显。使用环磷酰胺对小鼠进行免疫抑制时，发现牛膝多糖可以显著缓解环磷酰胺对免疫器官的抑制作用，并且呈现计量相关性[8]。
声殿荣[9]等报道指出，香菇多糖在5 mg/kg和l0 mg/kg的剂量情况下都能显著提高小鼠免疫抑制情况下的脾脏和胸腺指数。梁华平[10]等人在研究黄芪多糖对创伤小鼠模型的影响时发现，黄芪多糖可以显著的拮抗创伤对小鼠胸腺和脾脏重量的减轻。李新华等[11]研究表明，百合多糖可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫器官指数。张立显等[12]的研究表明给正常小鼠口服云芝多糖能刺激其脾脏与胸腺的发育，有利于增强免疫功能。刘洋[13]等人的研究显示，FLP对正常小鼠体重和脏器指数都有增强趋势。
总之，大量研究结果表明，大部分活性多糖都能够有效的剌激免疫脏器的发育，抵抗免疫抑制导致的免疫脏器萎缩，从而提高动物机体的整体免疫能力。
1.2.2 多糖对免疫细胞的影响
免疫细胞包括淋巴细胞和辅助细胞两类，能直接参与免疫应答。在免疫应答中，淋巴细胞起核心作用，吞噬细胞和树突状细胞起辅助作用。本文主要探究了多糖对巨噬细胞的影响。巨噬细胞由单核细胞衍化而来，能直接吞噬侵入体内的有害异物，清除机体自由基以及代谢废物，同时还能加工、呈递抗原信息给靶细胞，是机体免疫功能的基础。
1.3.3 微量元素
有关试验表明[18，19]，河规体内含铁、锌、铬、硒、铜、锰等具有特殊生理功能的微量元素。铁是血红蛋白的重要组成部分，参与体内氧的运送和组织呼吸过程；锌参与体内许多金属酶组成、促进组织再生、维持性机能状态等；硒作为谷胱甘肽过氧化酶的活性中心元素成分参与机体物质能量的代谢，具有保护心血管、降解重金属毒性、抗肿瘤等特殊作用；铬具有预防动脉硬化、促进胰岛素等作用[29]；锰在增强人体免疫功能、抗衰老和补肾壮阳方面具有重要作用。然而，有关这些重要微量元素在河蚬体内的存在形式及其保健作用机理研究尚未见报道，其降解作用机理、硒的存在形式等尚不清楚。因此，以后也可以加强这方面的探索。
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