石榴皮总黄酮的提取及清除自由基作用研究
摘 要本研究以陕产石榴皮为研究对象，一是对石榴皮中活性成分总黄酮进行提取工艺研究，以总黄酮的提取率为考察指标，以单因素和正交试验对影响总黄酮提取率的关键参数进行优化。最终获得的最佳工艺条件为乙醇浓度75%，微波功率300W，提取时间3min，料液比1:20g/ml。验证实验结果表明，该最佳工艺参数稳定、可靠，适合微波法提取石榴皮总黄酮。二是对石榴皮进行活性实验研究，结果表明石榴皮总黄酮对超氧阴离子和DPPH均有一定的清除作用。本研究为石榴皮的进一步开发利用提供依据。
目 录
1 绪论 5
1.1 石榴皮的简介 5
1.1.1 来源及分布 5
1.1.2 石榴皮药用价值 5
1.1.3 石榴的其他用途 5
1.2 石榴皮研究现状 5
1.2.1 石榴皮的化学成分 6
1.3 提取黄酮类物质常用方法 7
1.3.1 溶剂提取法 7
1.3.2 超声波提取法 7
1.3.3 超临界流体萃取法 7
1.3.4 碱液提取法 7
1.3.5 双水相萃取法 8
1.3.6 酶提取法 8
1.3.7 微波提取法 8
1.4 测定黄酮含量的方法 9
1.4.1 高效液相色谱法 9
1.4.2 紫外分光光度法 9
1.5 石榴皮的药理作用 10
1.5.1 抗肿瘤作用 10
1.5.2 抗氧化作用 10
1.5.3 抗微生物活性 10
1.5.4 抗消化性溃疡的作用 10
1.6 自由基作用简介 11
1.7 课题研究的意义 11
2 总黄酮的提取工艺研究 13
2.1 材料与仪器 13
2.2 实验内容 13
2.2.1 样品前处理 13
2.2.2 标准曲线的制备 13
2.2.3 提取过程 14
2.2.4 单因素实验 15
2.2.5 正交实验 15
2.3 实验结果分析与处理 16
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.3.1 溶剂浓度 16
2.3.2 微波功率 16
2.3.3 提取时间 17
2.3.4 料液比 18
2.3.5 正交试验结果 18
2.4 验证实验 20
2.5 清除自由基作用研究 20
2.5.1 超氧阴离子（O2）清除实验 20
2.5.2 DPPH清除实验 21
2.5.3 实验结果 21
结论 25
参考文献 27
致谢 29
1 绪论
1.1 石榴皮的简介
1.1.1 来源及分布
石榴皮来源于石榴科石榴属的落叶灌木石榴的干燥果皮[1]，在热带地区不落叶，别名丹若、若榴、安石榴、金婴等，其分布非常广泛，在温带和热带都有分布，在中国大部分地区也有分布，多生于低海拔地区，对外界环境适应性强，对温度、水分及土壤的要求都不高。据记载，石榴在中国的培栽史可追溯到西汉时期，在西汉时期引入新疆,后来引至全国各地[2]，现在中国有多个主产区，其中陕西为主产区之一，主产品种有三十多个，其中较好的品种为临潼的甜石榴。
1.1.2 石榴皮药用价值
石榴的药用价值较高，多个部位都可入药,石榴叶可止泻杀虫，石榴花可治疗鼻血或外伤出血，石榴皮作为中药入药效果较好，止泻，杀虫止血作用明显。中医在临床上用于烫伤、牛皮癣、疮痈肿毒、消化道寄生虫等[3]。
1.1.3 石榴的其他用途
石榴不仅具有很高的药用价值，还在其他方面发挥其重要作用。因为石榴中含有大量维生素B、维生素C、碳水化合物等物质[4]，因此营养价值高，口感也很好，因此可用于食用；在石榴所含的各种成分中，抗氧化成分占比大，所以石榴还可用于美容；其还含花青素[5]，用于保护眼睛；石榴所开之花火红艳丽，也有人以此作为观赏植物。石榴在我国的大部分地区都有分布，其资源丰富，但食用者食用其果实之后，通常将石榴皮丢弃，造成石榴皮的利用率非常低。
1.2 石榴皮研究现状
近年来，很多研究者对石榴皮进行多方面的研究，研究报告较多，从不同方面进行研究工作，主要研究有提取方法的，从各种提取方法中找到更合适的提取方法，也有研究同种提取方法，设计不同因素进行研究，找到最优的提取因素；还有研究石榴皮中所含的化学成分，对化学成分的种类及含量进行研究；也有研究石榴皮提取物能产生的药理作用，已有研究发现石榴皮提取物有多重药理作用，药用价值高。
1.2.1 石榴皮的化学成分
石榴皮所含成分含量丰富且种类较多，每种物质之间含量不尽相同且相差较大，黄酮鞣质这两类成分含量都较高，挥发油、氨基酸及矿物质等成分含量则比较低。其成分研究较多的有鞣质、黄酮、生物碱等[6]。
黄酮类化合物
黄酮类化合物中常有三个环为母核，这三个环连接成2苯基色原酮这种特殊结构[7]，其上链接有不同的基团使黄酮类化合物种类丰富，它在天然药物中广泛存在，其中多为结晶状的固体物质，也有粉末态，其颜色多为类黄及类红色。黄酮类化合物在石榴皮中含量较丰富，且种类也较多。主要有芹菜素槲皮素、黄烷3醇、木犀草素、芦丁、黄酮醇等[8]成分，其中多数成苷，只有少部分为游离形式存在于石榴皮中。
鞣质类
鞣质在自然界广泛存在，主要存在于皮、果实、叶等部位，最主要存在于树皮之中。其是一种多元酚类物质，在石榴皮中含量非常高，一般达10%至20%左右。其中包括三大类，分别是缩合类、水解类以及复合类鞣质,其中水解鞣质含量高于缩合类，缩合类高于复合类。在鞣质类化合物中，主要含有安石榴林、安石榴苷、鞣云实精等[9]，据鞣质研究的相关资料，已知此类化合物中不同物质有十多种，可见鞣质在石榴皮中含量非常高。
目 录
1 绪论 5
1.1 石榴皮的简介 5
1.1.1 来源及分布 5
1.1.2 石榴皮药用价值 5
1.1.3 石榴的其他用途 5
1.2 石榴皮研究现状 5
1.2.1 石榴皮的化学成分 6
1.3 提取黄酮类物质常用方法 7
1.3.1 溶剂提取法 7
1.3.2 超声波提取法 7
1.3.3 超临界流体萃取法 7
1.3.4 碱液提取法 7
1.3.5 双水相萃取法 8
1.3.6 酶提取法 8
1.3.7 微波提取法 8
1.4 测定黄酮含量的方法 9
1.4.1 高效液相色谱法 9
1.4.2 紫外分光光度法 9
1.5 石榴皮的药理作用 10
1.5.1 抗肿瘤作用 10
1.5.2 抗氧化作用 10
1.5.3 抗微生物活性 10
1.5.4 抗消化性溃疡的作用 10
1.6 自由基作用简介 11
1.7 课题研究的意义 11
2 总黄酮的提取工艺研究 13
2.1 材料与仪器 13
2.2 实验内容 13
2.2.1 样品前处理 13
2.2.2 标准曲线的制备 13
2.2.3 提取过程 14
2.2.4 单因素实验 15
2.2.5 正交实验 15
2.3 实验结果分析与处理 16
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.3.1 溶剂浓度 16
2.3.2 微波功率 16
2.3.3 提取时间 17
2.3.4 料液比 18
2.3.5 正交试验结果 18
2.4 验证实验 20
2.5 清除自由基作用研究 20
2.5.1 超氧阴离子（O2）清除实验 20
2.5.2 DPPH清除实验 21
2.5.3 实验结果 21
结论 25
参考文献 27
致谢 29
1 绪论
1.1 石榴皮的简介
1.1.1 来源及分布
石榴皮来源于石榴科石榴属的落叶灌木石榴的干燥果皮[1]，在热带地区不落叶，别名丹若、若榴、安石榴、金婴等，其分布非常广泛，在温带和热带都有分布，在中国大部分地区也有分布，多生于低海拔地区，对外界环境适应性强，对温度、水分及土壤的要求都不高。据记载，石榴在中国的培栽史可追溯到西汉时期，在西汉时期引入新疆,后来引至全国各地[2]，现在中国有多个主产区，其中陕西为主产区之一，主产品种有三十多个，其中较好的品种为临潼的甜石榴。
1.1.2 石榴皮药用价值
石榴的药用价值较高，多个部位都可入药,石榴叶可止泻杀虫，石榴花可治疗鼻血或外伤出血，石榴皮作为中药入药效果较好，止泻，杀虫止血作用明显。中医在临床上用于烫伤、牛皮癣、疮痈肿毒、消化道寄生虫等[3]。
1.1.3 石榴的其他用途
石榴不仅具有很高的药用价值，还在其他方面发挥其重要作用。因为石榴中含有大量维生素B、维生素C、碳水化合物等物质[4]，因此营养价值高，口感也很好，因此可用于食用；在石榴所含的各种成分中，抗氧化成分占比大，所以石榴还可用于美容；其还含花青素[5]，用于保护眼睛；石榴所开之花火红艳丽，也有人以此作为观赏植物。石榴在我国的大部分地区都有分布，其资源丰富，但食用者食用其果实之后，通常将石榴皮丢弃，造成石榴皮的利用率非常低。
1.2 石榴皮研究现状
近年来，很多研究者对石榴皮进行多方面的研究，研究报告较多，从不同方面进行研究工作，主要研究有提取方法的，从各种提取方法中找到更合适的提取方法，也有研究同种提取方法，设计不同因素进行研究，找到最优的提取因素；还有研究石榴皮中所含的化学成分，对化学成分的种类及含量进行研究；也有研究石榴皮提取物能产生的药理作用，已有研究发现石榴皮提取物有多重药理作用，药用价值高。
1.2.1 石榴皮的化学成分
石榴皮所含成分含量丰富且种类较多，每种物质之间含量不尽相同且相差较大，黄酮鞣质这两类成分含量都较高，挥发油、氨基酸及矿物质等成分含量则比较低。其成分研究较多的有鞣质、黄酮、生物碱等[6]。
黄酮类化合物
黄酮类化合物中常有三个环为母核，这三个环连接成2苯基色原酮这种特殊结构[7]，其上链接有不同的基团使黄酮类化合物种类丰富，它在天然药物中广泛存在，其中多为结晶状的固体物质，也有粉末态，其颜色多为类黄及类红色。黄酮类化合物在石榴皮中含量较丰富，且种类也较多。主要有芹菜素槲皮素、黄烷3醇、木犀草素、芦丁、黄酮醇等[8]成分，其中多数成苷，只有少部分为游离形式存在于石榴皮中。
鞣质类
鞣质在自然界广泛存在，主要存在于皮、果实、叶等部位，最主要存在于树皮之中。其是一种多元酚类物质，在石榴皮中含量非常高，一般达10%至20%左右。其中包括三大类，分别是缩合类、水解类以及复合类鞣质,其中水解鞣质含量高于缩合类，缩合类高于复合类。在鞣质类化合物中，主要含有安石榴林、安石榴苷、鞣云实精等[9]，据鞣质研究的相关资料，已知此类化合物中不同物质有十多种，可见鞣质在石榴皮中含量非常高。
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