超声波提取葛根灯盏细辛中总黄酮的提取工艺研究(附件)
本人签名 日期 摘 要目的该论文主要利用超声提取法对灯盏细辛和葛根中的总黄酮成分进行提取工艺研究。方法通过超声提取法对该实验进行单因素考察以及方法学考察，并且在此基础上，设计一个以提取工艺中主要应用的乙醇溶液浓度、乙醇用量、提取时间的因素水平表做正交试验，应用紫外分光光度法测定总黄酮含量，实验结果显示葛根和灯盏细辛中总黄酮提取工艺的最佳参数是乙醇溶液浓度为90%、超声提取时间10min、乙醇用量(加醇量)为1:12时，灯盏细辛和葛根中总黄酮的提取率可以达到19.59%。讨论优选出最佳的提取工艺参数，为市场上的灯盏细辛、葛根的研究提供理论依据和工业化生产奠定基础。超声提取法提取效率高，操作简便，可以省时间，是提取总黄酮的较好方法。
目 录
1 绪论
1.1葛根和灯盏细辛的来源、特征及功能主治 1
1.1.1葛根和灯盏细辛的来源及特征 1
1.1.2葛根和灯盏细辛的功能主治 1
1.2灯盏细辛和葛根的药理作用及化学成分 1
1.2.1灯盏细辛的药理作用 1
1.2.2葛根的药理作用 3
1.2.3葛根的有效成分 5
1.2.4灯盏细辛的化学成分 5
1.3超声波的提取研究 5
2实验部分
2.1仪器与材料 7
2.1.1仪器 7
2.1.2 试剂及药材 7
2.1.3 药材处理 7
2.2实验方法及结果 7
2.2.1 方法学考察 7
2.2.2单因素考察 10
2.2.3正交试验设计 14
讨论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1葛根和灯盏细辛的来源、特征及功能主治
1.1.1葛根和灯盏细辛的来源及特征
葛根为豆科植物野葛的干燥根，秋、冬二季采挖。野葛大多趁鲜时候纵切为长方形厚片或小方块，长5～35cm,厚0.5～1cm。外皮淡棕色，有纵皱纹，粗糙。切面黄白色，纹理不明显。质韧，纤维性强。无臭，味微甜。粉葛多呈圆柱形、 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
类纺锤形或半圆柱形，长12～15cm，直径4～8cm；有的为纵切或斜切的厚片，大小不一。表面黄白色或淡棕色，未去外皮的呈灰棕色。横切面可见由纤维形成的浅棕色同心性环纹，纵切面可见由纤维形成的数条纵纹。
灯盏花又名灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬[Erigeron breuiscapus (Vant) Hand]Mazz的干燥全草。秋季茎叶茂盛花开时采收，洗净，鲜用或晒干。
1.1.2葛根和灯盏细辛的功能主治
葛根性凉，味甘、辛，归脾胃经，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻、除烦止渴之功效。用于外感发热头痛、口渴、消渴、斑疹不透、热痢、泄泻的治疗[1]。葛根有发汗、退热作用，可以和柴胡等配伍使用于表热症；与麻黄、桂枝、芍药共同使用可治疗患有无汗、恶风者的风寒表症。配伍黄连、黄芩等可治疗湿热泻痢等症。灯盏细辛具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛等功效[2]。
因此近年来有大量的专家对葛根和灯盏细辛进行研究，通过药理实验，将其中的有效成分、无效成分以及毒性成分分离出来，将有利于患者的药效成分进行研究并应用于患者，使其在临床治疗上广泛应用。
1.2灯盏细辛和葛根的药理作用及化学成分
1.2.1灯盏细辛的药理作用
1.2.1.1对脑血管系统的作用
(1) 对脑缺血/再灌注损失的保护作用。周弋人等[3]采用大鼠脑缺血/再灌注模型，将实验中大鼠分为脑缺血/再灌注损失组，短期给药组（腹腔内注射灯盏细辛7d）、较长期给药组（腹腔内注射灯盏细辛28d）和正常对照组4组。分别于建模后1小时、1周、2周、4周末进行神经功能评分。结果显示各组神经行为学评分差值及脑梗死体积间比较有统计学差异（P<.05），且较长期给药组效果优于短期给药组（P<.05）。可是在电镜下观察显示较长时期给药组大鼠脑组织病理学改变较轻。表明较长疗程灯盏细辛治疗对脑缺血恢复期的神经保护作用较短期治疗明显。
(2) 对脑功能的改善作用。郭莉莉等[4]，将Wistar 大鼠42只，随机分为5组，用双侧脑室注射β淀粉样蛋白联合腹腔注射D半乳糖方法建立痴呆大鼠模型。采用Morriss水迷宫方法检测大鼠学习记忆能力、比色法检测乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性。与正常组和假手术组相比，模型组大鼠在定向航行和空间探索中逃避潜伏期时间和穿越平台时间延长，穿越平台次数减少（P<.05）；脑组织中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性升高，血浆中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性降低（P<.05），经过灯盏细辛治疗后痴呆大鼠学习记忆能力有所提高，胆碱酯酶活性趋向于正常（P<.05）。说明灯盏细辛可以使痴呆大鼠的学习记忆力提高，可促进胆碱酯酶活性趋向于正常。
1.2.1.2对心血管系统的作用
灯盏花中含有的总黄酮可以使异丙肾上腺素诱发的大鼠减轻心肌缺血性损伤；静脉注射灯盏花总黄酮溶液100mg/kg能够麻醉大鼠，血压明显的降低，因为没有加快心率和增强心肌收缩力，所以对它的血流动力学参数影响也不明显。因为血压下降，减轻了心脏后负荷，从而降低了心肌耗氧量，射血阻抗降低！导致心缩期相对缩短，舒张期相对延长，有利于冠脉灌流！改善了心肌供血[5]。
1.2.1.3对凝血功能的作用
灯盏花注射液8ml/kg iv于兔后，通过减少血小板数及抑制血小板聚集，抑制兔体内凝血功能，和促进纤溶酶活性等环节，对体外血栓形成有所抑制。家兔体外血浆药物浓度为23mg/ml时，能抑制血小板聚集。
1.2.1.4其他作用
灯盏细辛对实验性的青光眼有很好的保护作用[6]。同时还有保肝作用。然而不是每个药物除了最主要的药理作用，就没有其他的作用了。还可以在生活当中发现其他的作用，灯盏花在生活中与蒸鸡蛋服用，对脑溢血后遗瘫患者的治疗疗效有很大的帮助。
1.2.2葛根的药理作用
1.2.2.1保护心脑血管
(1) 扩张血管，改善微循环。葛根黄酮能够使冠脉血流量明显增加，可松弛血管平滑肌，使外周阻力降低。静脉注射葛根黄酮使缺血压氧含量增加，乳酸含量降低，对改善正常和缺血、梗塞心肌的代谢有良好的影响。张令刚[7]通过治疗急性冠脉综合征患者发现，葛根素注射液可以通过多个环节来影响急患者相关内皮损伤、免疫、炎症与细胞因子，能够有效改善内皮功能，从而达到保护血管内皮的作用。
(2) 改善心肌状况。葛根素在心肌细胞的缺氧损伤和富氧损伤中尤为表现出了重要的作用。李军等[8]通过研究心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞的凋亡，发现葛根素能够通过提高大鼠心肌组织中的细胞凋亡抑制基因Bcl2、凋亡效应分子Caspase 3等蛋白质的表达以及降低促凋亡基因Bax的mRNA表达来对控心肌组织细胞的凋亡起到调控作用，保护心肌组织。
目 录
1 绪论
1.1葛根和灯盏细辛的来源、特征及功能主治 1
1.1.1葛根和灯盏细辛的来源及特征 1
1.1.2葛根和灯盏细辛的功能主治 1
1.2灯盏细辛和葛根的药理作用及化学成分 1
1.2.1灯盏细辛的药理作用 1
1.2.2葛根的药理作用 3
1.2.3葛根的有效成分 5
1.2.4灯盏细辛的化学成分 5
1.3超声波的提取研究 5
2实验部分
2.1仪器与材料 7
2.1.1仪器 7
2.1.2 试剂及药材 7
2.1.3 药材处理 7
2.2实验方法及结果 7
2.2.1 方法学考察 7
2.2.2单因素考察 10
2.2.3正交试验设计 14
讨论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1葛根和灯盏细辛的来源、特征及功能主治
1.1.1葛根和灯盏细辛的来源及特征
葛根为豆科植物野葛的干燥根，秋、冬二季采挖。野葛大多趁鲜时候纵切为长方形厚片或小方块，长5～35cm,厚0.5～1cm。外皮淡棕色，有纵皱纹，粗糙。切面黄白色，纹理不明显。质韧，纤维性强。无臭，味微甜。粉葛多呈圆柱形、 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
类纺锤形或半圆柱形，长12～15cm，直径4～8cm；有的为纵切或斜切的厚片，大小不一。表面黄白色或淡棕色，未去外皮的呈灰棕色。横切面可见由纤维形成的浅棕色同心性环纹，纵切面可见由纤维形成的数条纵纹。
灯盏花又名灯盏细辛，为菊科植物短葶飞蓬[Erigeron breuiscapus (Vant) Hand]Mazz的干燥全草。秋季茎叶茂盛花开时采收，洗净，鲜用或晒干。
1.1.2葛根和灯盏细辛的功能主治
葛根性凉，味甘、辛，归脾胃经，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻、除烦止渴之功效。用于外感发热头痛、口渴、消渴、斑疹不透、热痢、泄泻的治疗[1]。葛根有发汗、退热作用，可以和柴胡等配伍使用于表热症；与麻黄、桂枝、芍药共同使用可治疗患有无汗、恶风者的风寒表症。配伍黄连、黄芩等可治疗湿热泻痢等症。灯盏细辛具有散寒解表、祛风除湿、活血化瘀、通经活络、消炎止痛等功效[2]。
因此近年来有大量的专家对葛根和灯盏细辛进行研究，通过药理实验，将其中的有效成分、无效成分以及毒性成分分离出来，将有利于患者的药效成分进行研究并应用于患者，使其在临床治疗上广泛应用。
1.2灯盏细辛和葛根的药理作用及化学成分
1.2.1灯盏细辛的药理作用
1.2.1.1对脑血管系统的作用
(1) 对脑缺血/再灌注损失的保护作用。周弋人等[3]采用大鼠脑缺血/再灌注模型，将实验中大鼠分为脑缺血/再灌注损失组，短期给药组（腹腔内注射灯盏细辛7d）、较长期给药组（腹腔内注射灯盏细辛28d）和正常对照组4组。分别于建模后1小时、1周、2周、4周末进行神经功能评分。结果显示各组神经行为学评分差值及脑梗死体积间比较有统计学差异（P<.05），且较长期给药组效果优于短期给药组（P<.05）。可是在电镜下观察显示较长时期给药组大鼠脑组织病理学改变较轻。表明较长疗程灯盏细辛治疗对脑缺血恢复期的神经保护作用较短期治疗明显。
(2) 对脑功能的改善作用。郭莉莉等[4]，将Wistar 大鼠42只，随机分为5组，用双侧脑室注射β淀粉样蛋白联合腹腔注射D半乳糖方法建立痴呆大鼠模型。采用Morriss水迷宫方法检测大鼠学习记忆能力、比色法检测乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性。与正常组和假手术组相比，模型组大鼠在定向航行和空间探索中逃避潜伏期时间和穿越平台时间延长，穿越平台次数减少（P<.05）；脑组织中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性升高，血浆中乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性降低（P<.05），经过灯盏细辛治疗后痴呆大鼠学习记忆能力有所提高，胆碱酯酶活性趋向于正常（P<.05）。说明灯盏细辛可以使痴呆大鼠的学习记忆力提高，可促进胆碱酯酶活性趋向于正常。
1.2.1.2对心血管系统的作用
灯盏花中含有的总黄酮可以使异丙肾上腺素诱发的大鼠减轻心肌缺血性损伤；静脉注射灯盏花总黄酮溶液100mg/kg能够麻醉大鼠，血压明显的降低，因为没有加快心率和增强心肌收缩力，所以对它的血流动力学参数影响也不明显。因为血压下降，减轻了心脏后负荷，从而降低了心肌耗氧量，射血阻抗降低！导致心缩期相对缩短，舒张期相对延长，有利于冠脉灌流！改善了心肌供血[5]。
1.2.1.3对凝血功能的作用
灯盏花注射液8ml/kg iv于兔后，通过减少血小板数及抑制血小板聚集，抑制兔体内凝血功能，和促进纤溶酶活性等环节，对体外血栓形成有所抑制。家兔体外血浆药物浓度为23mg/ml时，能抑制血小板聚集。
1.2.1.4其他作用
灯盏细辛对实验性的青光眼有很好的保护作用[6]。同时还有保肝作用。然而不是每个药物除了最主要的药理作用，就没有其他的作用了。还可以在生活当中发现其他的作用，灯盏花在生活中与蒸鸡蛋服用，对脑溢血后遗瘫患者的治疗疗效有很大的帮助。
1.2.2葛根的药理作用
1.2.2.1保护心脑血管
(1) 扩张血管，改善微循环。葛根黄酮能够使冠脉血流量明显增加，可松弛血管平滑肌，使外周阻力降低。静脉注射葛根黄酮使缺血压氧含量增加，乳酸含量降低，对改善正常和缺血、梗塞心肌的代谢有良好的影响。张令刚[7]通过治疗急性冠脉综合征患者发现，葛根素注射液可以通过多个环节来影响急患者相关内皮损伤、免疫、炎症与细胞因子，能够有效改善内皮功能，从而达到保护血管内皮的作用。
(2) 改善心肌状况。葛根素在心肌细胞的缺氧损伤和富氧损伤中尤为表现出了重要的作用。李军等[8]通过研究心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞的凋亡，发现葛根素能够通过提高大鼠心肌组织中的细胞凋亡抑制基因Bcl2、凋亡效应分子Caspase 3等蛋白质的表达以及降低促凋亡基因Bax的mRNA表达来对控心肌组织细胞的凋亡起到调控作用，保护心肌组织。
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