高效液相色谱法测定牛奶中维生素c的含量(附件)
摘 要随着生活水平的不断提高，人们对牛奶的认识和需求量也不断增加，近年来随着牛奶行业的迅速发展，牛奶的质量也备受关注。牛奶中含有丰富的钙、蛋白质、维生素等营养元素，通过饮用牛奶也补充人体所需的钙和维生素，其中维生素C是一种重要而特殊的水溶性维生素，理化性质最不稳定[1]，易在加工中遭到破坏，故测定牛奶中维生素C的含量尤为重要。本文采用高效液相色谱法来测定牛奶中维生素C的含量。在常温下以0.1 mol/L 盐酸做溶剂，超声30min得到供试品溶液，并与标准系列进行比较，以保留时间作为定性条件，以峰面积定量条件。实验结果表明,以0.05 mol/L 磷酸二氢钾：甲醇（96:4）为流动相，经C18色谱柱分离，回收率可达到97.9%—99. 7%，相对标准偏差为0.60%-0.84%。本实验方法选择性好，灵敏度高，操作简便快捷，重复性好，具有很高的实用价值。 目 录
1 文献综述
1.2牛奶的概述及功效 1
1.2.1牛奶的概述 1
1.2.2牛奶的功效 2
1.3维生素C概述 3
1.3.1维生素C的简介 3
1.3.2维生素C的生理功能 4
1.4维生素C的含量测定的方法 5
1.4.1碘量法 5
1.4.2邻苯二胺荧光法 5
1.4.3紫外分光光度法 5
1.4.4高效液相色谱法 6
1.5选题目的及论文思路 8
2 实验部分
2.1实验仪器及试剂 9
2.2实验操作 10
2.2.1标准品溶液制备 10
2.2.2供试液制备 10
2.2.3色谱条件 10
2.3结果与分析 10
2.3.1色谱图 10
2.3.2提取液的选择 11
2.3.3检测波长的选择 11
2.3.4柱温的选择 11
2.3.5流速和流动相的选择 12
2.3.6线性关系与标准曲线的绘制 12
2.3.7测定及其精密度的考察 13
2.3.8回收率 13
2.3.9供试液、标准品浓度对
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
2.3.1色谱图 10
2.3.2提取液的选择 11
2.3.3检测波长的选择 11
2.3.4柱温的选择 11
2.3.5流速和流动相的选择 12
2.3.6线性关系与标准曲线的绘制 12
2.3.7测定及其精密度的考察 13
2.3.8回收率 13
2.3.9供试液、标准品浓度对检测结果的影响 14
2.3.10流动相比例对检测结果的影响 14
2.4结论 15
参考文献 17
致谢 19
1 文献综述
1.1引言
维生素C（又名抗坏血酸）与人体健康关系密切，具有分子结构最为简单，理化性质最不稳定，人体每日需要量最大等特殊性质，在维持人体正常功能方面具有多种重要的作用。近几年来，我国居民日常膳食中维生素C 的摄入量呈逐年下降趋势。而牛奶中含有丰富的钙、蛋白质、维生素等营养元素，易消化吸收（通过牛奶中维生素C与钙的相互作用，促进两者的吸收）[2]。所以越来越多的民众认识到牛奶的营养价值，也通过饮用牛奶也补充人体所需的钙和维生素，牛奶已经在日常生活中扮演日益重要的角色。但市场上牛奶品种多，质量难以保证，且存放时间对牛奶中的营养物质含量的影响也很大。近年来随着牛奶行业的迅速发展，牛奶的质量也备受关注。本论文对不同品种的牛奶进行研究，建立一种方法简便，准确度高的检测方法，用于检测不同品种牛奶的检测。
1.2牛奶的概述及功效
1.2.1牛奶的概述
牛奶中含有100多种物质，且种类复杂，主要成份有水、脂肪、磷脂、蛋白质、乳糖、无机盐，维生素等[3]。同时也含有与生命活动密切相关的维生素和矿物质等。牛奶是流体性食物，食用方便、容易消化吸收，是最古老的天然饮料之一。牛奶含有丰富的矿物质外，还含有大量的钙，人体需要摄取大量的钙来构建骨骼和牙齿[4]。每100克牛奶所含营养素如下表1.1。
表1.1 每100克牛奶所含营养素
物质种类
含量
热量
54.00kcal
蛋白质
3.00g
脂肪
3.20g
碳水化合物
3.40g
维生素A
24.00ug
硫胺素
0.03mg
核黄素
0.14mg
尼克酸
0.10mg
维生素C
1.00mg
维生素E
0.21mg
钙、磷、钠、镁、铁、锌、硒、铜、锰、钾
胆固醇
104.00mg、73.00mg、37.20mg、11.00mg、0.30mg、1.94mg、0.02mg、0.03mg、109.00mg、15.00mg
0.42mg
由此可知牛奶中维生素C的含量很低，约占牛奶比重的十万分之一,维生素C受热易分解，所以经过高温灭菌的牛奶维生素C的含量会更低。牛奶是一种胶体，稠度很大，并且牛奶中物质种类较多，所以在提取维生素C时，不仅要考虑不能使维生素C分解，而且还要考虑维生素C的纯度。
1.2.2牛奶的功效
牛奶具有补肺养胃、生津润肠之功效，对人体具有镇静安神作用，对糖尿病久病、口渴便秘、体虚、气血不足、脾胃不和者有益。喝牛奶能促进睡眠安稳，泡牛奶浴可以治失眠；牛奶中的碘、锌和卵磷脂能大大提高大脑的工作效率；牛奶中的镁元素会促进心脏和神经系统的耐疲劳性；牛奶能润泽肌肤，经常饮用可使皮肤白皙、光滑，增加弹性；基于酵素的作用，牛奶还有消炎、消肿及缓和皮肤紧张的功效[5]；儿童常喝鲜奶有助于身体的发育，因为钙能促进骨骼发育；老人喝牛奶可补足钙质需求量，减少骨骼萎缩，降低骨质疏松症的发生概率，使身体柔韧度增加。
1.3维生素C概述
1.3.1维生素C的简介
维生素C是一个含有6个碳原子环形内脂化合物，含有4个羟基显酸性，环形结构有烯醇式结构，所以维生素C极不稳定，维生素C共有4 种异构体（L 抗坏血酸、D 异抗坏血酸、D 抗坏血酸、L 异抗坏血酸），其中L抗坏血酸具有很高的生物活性，其他异构体皆没有生物活性，具有生物活性的只有L抗坏血酸，其他异构体皆没有生物活性，所以通常所说的维生素C 指L抗坏血酸[6]。维生素C的分子结构简单，理化性质如下：
维生素C分子结构式
（1）性状：无色晶体
（2）熔点：190～192℃
（3）溶解性：水溶性维生素（
1 文献综述
1.2牛奶的概述及功效 1
1.2.1牛奶的概述 1
1.2.2牛奶的功效 2
1.3维生素C概述 3
1.3.1维生素C的简介 3
1.3.2维生素C的生理功能 4
1.4维生素C的含量测定的方法 5
1.4.1碘量法 5
1.4.2邻苯二胺荧光法 5
1.4.3紫外分光光度法 5
1.4.4高效液相色谱法 6
1.5选题目的及论文思路 8
2 实验部分
2.1实验仪器及试剂 9
2.2实验操作 10
2.2.1标准品溶液制备 10
2.2.2供试液制备 10
2.2.3色谱条件 10
2.3结果与分析 10
2.3.1色谱图 10
2.3.2提取液的选择 11
2.3.3检测波长的选择 11
2.3.4柱温的选择 11
2.3.5流速和流动相的选择 12
2.3.6线性关系与标准曲线的绘制 12
2.3.7测定及其精密度的考察 13
2.3.8回收率 13
2.3.9供试液、标准品浓度对
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
2.3.1色谱图 10
2.3.2提取液的选择 11
2.3.3检测波长的选择 11
2.3.4柱温的选择 11
2.3.5流速和流动相的选择 12
2.3.6线性关系与标准曲线的绘制 12
2.3.7测定及其精密度的考察 13
2.3.8回收率 13
2.3.9供试液、标准品浓度对检测结果的影响 14
2.3.10流动相比例对检测结果的影响 14
2.4结论 15
参考文献 17
致谢 19
1 文献综述
1.1引言
维生素C（又名抗坏血酸）与人体健康关系密切，具有分子结构最为简单，理化性质最不稳定，人体每日需要量最大等特殊性质，在维持人体正常功能方面具有多种重要的作用。近几年来，我国居民日常膳食中维生素C 的摄入量呈逐年下降趋势。而牛奶中含有丰富的钙、蛋白质、维生素等营养元素，易消化吸收（通过牛奶中维生素C与钙的相互作用，促进两者的吸收）[2]。所以越来越多的民众认识到牛奶的营养价值，也通过饮用牛奶也补充人体所需的钙和维生素，牛奶已经在日常生活中扮演日益重要的角色。但市场上牛奶品种多，质量难以保证，且存放时间对牛奶中的营养物质含量的影响也很大。近年来随着牛奶行业的迅速发展，牛奶的质量也备受关注。本论文对不同品种的牛奶进行研究，建立一种方法简便，准确度高的检测方法，用于检测不同品种牛奶的检测。
1.2牛奶的概述及功效
1.2.1牛奶的概述
牛奶中含有100多种物质，且种类复杂，主要成份有水、脂肪、磷脂、蛋白质、乳糖、无机盐，维生素等[3]。同时也含有与生命活动密切相关的维生素和矿物质等。牛奶是流体性食物，食用方便、容易消化吸收，是最古老的天然饮料之一。牛奶含有丰富的矿物质外，还含有大量的钙，人体需要摄取大量的钙来构建骨骼和牙齿[4]。每100克牛奶所含营养素如下表1.1。
表1.1 每100克牛奶所含营养素
物质种类
含量
热量
54.00kcal
蛋白质
3.00g
脂肪
3.20g
碳水化合物
3.40g
维生素A
24.00ug
硫胺素
0.03mg
核黄素
0.14mg
尼克酸
0.10mg
维生素C
1.00mg
维生素E
0.21mg
钙、磷、钠、镁、铁、锌、硒、铜、锰、钾
胆固醇
104.00mg、73.00mg、37.20mg、11.00mg、0.30mg、1.94mg、0.02mg、0.03mg、109.00mg、15.00mg
0.42mg
由此可知牛奶中维生素C的含量很低，约占牛奶比重的十万分之一,维生素C受热易分解，所以经过高温灭菌的牛奶维生素C的含量会更低。牛奶是一种胶体，稠度很大，并且牛奶中物质种类较多，所以在提取维生素C时，不仅要考虑不能使维生素C分解，而且还要考虑维生素C的纯度。
1.2.2牛奶的功效
牛奶具有补肺养胃、生津润肠之功效，对人体具有镇静安神作用，对糖尿病久病、口渴便秘、体虚、气血不足、脾胃不和者有益。喝牛奶能促进睡眠安稳，泡牛奶浴可以治失眠；牛奶中的碘、锌和卵磷脂能大大提高大脑的工作效率；牛奶中的镁元素会促进心脏和神经系统的耐疲劳性；牛奶能润泽肌肤，经常饮用可使皮肤白皙、光滑，增加弹性；基于酵素的作用，牛奶还有消炎、消肿及缓和皮肤紧张的功效[5]；儿童常喝鲜奶有助于身体的发育，因为钙能促进骨骼发育；老人喝牛奶可补足钙质需求量，减少骨骼萎缩，降低骨质疏松症的发生概率，使身体柔韧度增加。
1.3维生素C概述
1.3.1维生素C的简介
维生素C是一个含有6个碳原子环形内脂化合物，含有4个羟基显酸性，环形结构有烯醇式结构，所以维生素C极不稳定，维生素C共有4 种异构体（L 抗坏血酸、D 异抗坏血酸、D 抗坏血酸、L 异抗坏血酸），其中L抗坏血酸具有很高的生物活性，其他异构体皆没有生物活性，具有生物活性的只有L抗坏血酸，其他异构体皆没有生物活性，所以通常所说的维生素C 指L抗坏血酸[6]。维生素C的分子结构简单，理化性质如下：
维生素C分子结构式
（1）性状：无色晶体
（2）熔点：190～192℃
（3）溶解性：水溶性维生素（
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