银杏叶提取物对酪氨酸酶抑制作用的研究
摘 要近年来，随着人们对美容美白方面的更多关注，寻找天然的美容美白成分成为医学美容方面研究的一个重点，而银杏叶在美容美白方面的颇多应用，促使我们对于中药银杏叶的美白作用以及美白成分进行评价，为其后期的应用提供一定的理论依据。酪氨酸酶是生物体内促使黑色素生成的一种关键酶，能够抑制酪氨酸酶的活性，一定程度上就可以抑制黑色素的生成，从而达到美白的效果。本课题旨在通过研究银杏叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用来评价其美白活性，为银杏叶中药材在中医美容方面的应用提供一定的理论依据。酪氨酸酶与酪氨酸合成多巴，氧化生成多巴醌，在475nm波长处多巴色素有吸收，故分别在紫外吸收波长475nm处测定银杏叶水提取物和乙醇提取物的吸收值，然后根据抑制率公式IR = {[（A-B)-(C-D)]/(A-B)｝×100 %计算出银杏叶水提取物和乙醇提取物的抑制率。结果显示，银杏叶水提取物对酪氨酸酶的抑制率为18.1 %；银杏叶乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制率为24.1 %；所以银杏叶中的脂溶性成分对酪氨酸酶有较好抑制作用，故该成分具有较强的美白功效。
目 录
1 绪论 1
1.1美白效果的评价方法 1
1.1.1生物化学法 1
1.1.2细胞生物学法 1
1.1.3动物试验法 1
1.2酪氨酸酶 2
1.2.1酪氨酸酶的作用机制 2
1.2.2酪氨酸酶的研究概况 2
1.2.3酪氨酸酶的种类及分布 3
1.3黑色素 3
1.4银杏叶 4
1.4.1 银杏叶的化学成分 4
1.4.2银杏叶的药理作用 4
2 实验材料和方法 5
2.1实验材料 5
2.1.1实验仪器 5
2.1.2实验试剂及药材 5
2.2 实验方法 6
2.2.1磷酸盐缓冲溶液的制备 6
2.2.2 酪氨酸酶溶液的制备 6
2.2.3 L多巴溶液的制备 7
2.2.4标准曲线的制备 7
2.2.5银杏叶提取物的制备 7
2.2.6银杏叶提取物对酪氨酸酶抑制作用的测定 8
2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2.7比较银杏叶水提取物和乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制效果 10
3 结果与讨论 12
3.1结果 12
3.1.1银杏叶水提取物的抑制率IR（水） 12
3.1.2银杏叶乙醇提取物的抑制率IR（乙醇） 12
3.2讨论 12
参考文献 13
致 谢 16
1 绪论
近年来，随着人们对美容美白方面的更多关注，寻找天然的美容美白成分成为医学美容方面研究的一个重点，由于人种原因或者其他原因，中国的美白祛斑市场需求极其大，美白祛斑将持续保持护肤品市场的主流地位；某些美白祛斑产品的生产厂家，由于市场竞争和职业操守的欠缺，已经造成了很多的因美容而损害皮肤的案例[1]。而银杏叶在美容美白方面的颇多应用，促使我们对于中药银杏叶的美白作用以及美白成分进行评价，为其后期的应用提供一定的理论依据[2]。目前有文献记载，酪氨酸酶可以从土豆中提取；于是我们先用酪氨酸酶标准品配制酪氨酸酶溶液，并进行全波长扫描，然后根据从土豆中提取酪氨酸酶的方法提取土豆中的酪氨酸酶，同样进行全波长扫描，结果基本重合，故本论文中用到的是土豆中提取的酪氨酸酶。
1.1美白效果的评价方法
1.1.1生物化学法
生物化学法又称酶法，是以酪氨酸酶催化酪氨酸或左旋多巴生成黑色素，通过测定溶液吸光度来检测美白中药化妆品添加剂对酪氨酸酶活性的抑制作用[3]。酶的来源主要是从蘑菇、B16黑色瘤细胞或动物皮肤中得到。尽管对黑色素生成起主要影响作用的是酪氨酸酶，但黑色素的生成经历了一系列复杂过程，受多种因素的影响[4]；所以，生物化学法不能反映它与黑色素的合成有关的其他机制。此方法测定时间短，操作简便，所需费用低，适用于对美白添加剂的大范围初筛。
1.1.2细胞生物学法
细胞试验法的实验误差较动物试验小，且重现性好，可以处理大批样品。但该方法对培养条件、检测条件要求较高，操作比较复杂，一旦细胞死亡的数量太多，就会直接影响到测试结果的准确性[5]。
1.1.3动物试验法
李玲采用UVB照射棕黄色豚鼠，照射总量为2500mJ/cm2，外涂茶多酚，3周后进行组织活检，观察是什么对黑素颗粒细胞和多巴阳性黑素细胞产生的影响[6]；马景波采用白色豚鼠通过总量为2700mJ/cm2的UVB照射建立色素沉着动物模型，给药3周后，通过MX16皮肤黑色素和血色素测试仪对黑色素值作定量测定，并进行临床观察和组织病理染色观察，表明红景天有抑制色素沉着的作用[7]。
豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布与人类的相似，试验结果重现性好，较小鼠模型更适用于评价美白中药化妆品的功效。但毕竟动物实验的结果与人体实验结果不能完全等同[8]。欧盟自2009年4月1日起已禁止在化妆品上进行动物实验[9]。
1.2酪氨酸酶
1.2.1酪氨酸酶的作用机制
黑色素在人体内的过量表达是导致雀斑、黄褐斑等色素沉着疾病的主要原因[10]。一方面，它可以通过阻止酪氨酸酶的生成和活性[11]，去抑制形成的黑色素；另外一方面，要使黑色素消减就可以通过角质细胞来完成，让黑色素变弱来达到特点的效果，并且提高皮肤的新陈代谢；它还能够缩短皮肤生理周期，来加快黑色素排出体外的速度，减少紫外线导致过多黑色素的形成[12]。近年来，酪氨酸酶被广泛应用于医学美容方面。
1.2.2酪氨酸酶的研究概况
国内外的广大学者对编码酪氨酸酶基因的结构、表达及其调控也做了一些研究[13]。我们可以将其看做是一种生物催化剂，很多复杂的有机物合成反应或者分解反应需要在高温、高强酸碱或者减压等很严苛的特定条件下才可以进行，而在生物体内，即使在十分温和的条件下，如常温、常压或近中性溶液中，许多复杂的化学反应却能够顺利进行，其根本原因就是由于生物酶的存在[14]。生物酶，通过组成我们一般将之分为两类，一类叫做简单蛋白质，这种酶则是由它的结构来决定它的活性，如脲酶、淀粉酶等；第二类则是结合蛋白质酶，这类酶想表现出自身的活性，则要加入一些辅助
目 录
1 绪论 1
1.1美白效果的评价方法 1
1.1.1生物化学法 1
1.1.2细胞生物学法 1
1.1.3动物试验法 1
1.2酪氨酸酶 2
1.2.1酪氨酸酶的作用机制 2
1.2.2酪氨酸酶的研究概况 2
1.2.3酪氨酸酶的种类及分布 3
1.3黑色素 3
1.4银杏叶 4
1.4.1 银杏叶的化学成分 4
1.4.2银杏叶的药理作用 4
2 实验材料和方法 5
2.1实验材料 5
2.1.1实验仪器 5
2.1.2实验试剂及药材 5
2.2 实验方法 6
2.2.1磷酸盐缓冲溶液的制备 6
2.2.2 酪氨酸酶溶液的制备 6
2.2.3 L多巴溶液的制备 7
2.2.4标准曲线的制备 7
2.2.5银杏叶提取物的制备 7
2.2.6银杏叶提取物对酪氨酸酶抑制作用的测定 8
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2.7比较银杏叶水提取物和乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制效果 10
3 结果与讨论 12
3.1结果 12
3.1.1银杏叶水提取物的抑制率IR（水） 12
3.1.2银杏叶乙醇提取物的抑制率IR（乙醇） 12
3.2讨论 12
参考文献 13
致 谢 16
1 绪论
近年来，随着人们对美容美白方面的更多关注，寻找天然的美容美白成分成为医学美容方面研究的一个重点，由于人种原因或者其他原因，中国的美白祛斑市场需求极其大，美白祛斑将持续保持护肤品市场的主流地位；某些美白祛斑产品的生产厂家，由于市场竞争和职业操守的欠缺，已经造成了很多的因美容而损害皮肤的案例[1]。而银杏叶在美容美白方面的颇多应用，促使我们对于中药银杏叶的美白作用以及美白成分进行评价，为其后期的应用提供一定的理论依据[2]。目前有文献记载，酪氨酸酶可以从土豆中提取；于是我们先用酪氨酸酶标准品配制酪氨酸酶溶液，并进行全波长扫描，然后根据从土豆中提取酪氨酸酶的方法提取土豆中的酪氨酸酶，同样进行全波长扫描，结果基本重合，故本论文中用到的是土豆中提取的酪氨酸酶。
1.1美白效果的评价方法
1.1.1生物化学法
生物化学法又称酶法，是以酪氨酸酶催化酪氨酸或左旋多巴生成黑色素，通过测定溶液吸光度来检测美白中药化妆品添加剂对酪氨酸酶活性的抑制作用[3]。酶的来源主要是从蘑菇、B16黑色瘤细胞或动物皮肤中得到。尽管对黑色素生成起主要影响作用的是酪氨酸酶，但黑色素的生成经历了一系列复杂过程，受多种因素的影响[4]；所以，生物化学法不能反映它与黑色素的合成有关的其他机制。此方法测定时间短，操作简便，所需费用低，适用于对美白添加剂的大范围初筛。
1.1.2细胞生物学法
细胞试验法的实验误差较动物试验小，且重现性好，可以处理大批样品。但该方法对培养条件、检测条件要求较高，操作比较复杂，一旦细胞死亡的数量太多，就会直接影响到测试结果的准确性[5]。
1.1.3动物试验法
李玲采用UVB照射棕黄色豚鼠，照射总量为2500mJ/cm2，外涂茶多酚，3周后进行组织活检，观察是什么对黑素颗粒细胞和多巴阳性黑素细胞产生的影响[6]；马景波采用白色豚鼠通过总量为2700mJ/cm2的UVB照射建立色素沉着动物模型，给药3周后，通过MX16皮肤黑色素和血色素测试仪对黑色素值作定量测定，并进行临床观察和组织病理染色观察，表明红景天有抑制色素沉着的作用[7]。
豚鼠皮肤黑素细胞和黑素小体的分布与人类的相似，试验结果重现性好，较小鼠模型更适用于评价美白中药化妆品的功效。但毕竟动物实验的结果与人体实验结果不能完全等同[8]。欧盟自2009年4月1日起已禁止在化妆品上进行动物实验[9]。
1.2酪氨酸酶
1.2.1酪氨酸酶的作用机制
黑色素在人体内的过量表达是导致雀斑、黄褐斑等色素沉着疾病的主要原因[10]。一方面，它可以通过阻止酪氨酸酶的生成和活性[11]，去抑制形成的黑色素；另外一方面，要使黑色素消减就可以通过角质细胞来完成，让黑色素变弱来达到特点的效果，并且提高皮肤的新陈代谢；它还能够缩短皮肤生理周期，来加快黑色素排出体外的速度，减少紫外线导致过多黑色素的形成[12]。近年来，酪氨酸酶被广泛应用于医学美容方面。
1.2.2酪氨酸酶的研究概况
国内外的广大学者对编码酪氨酸酶基因的结构、表达及其调控也做了一些研究[13]。我们可以将其看做是一种生物催化剂，很多复杂的有机物合成反应或者分解反应需要在高温、高强酸碱或者减压等很严苛的特定条件下才可以进行，而在生物体内，即使在十分温和的条件下，如常温、常压或近中性溶液中，许多复杂的化学反应却能够顺利进行，其根本原因就是由于生物酶的存在[14]。生物酶，通过组成我们一般将之分为两类，一类叫做简单蛋白质，这种酶则是由它的结构来决定它的活性，如脲酶、淀粉酶等；第二类则是结合蛋白质酶，这类酶想表现出自身的活性，则要加入一些辅助
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