乌头地上部分乌头碱提取工艺研究
摘 要研究乌头碱的最佳提取工艺，为科学有效的提取乌头碱提供依据。本研究选用L9(34)正交表进行试验，以氨水浓度、乙醚用量和冷浸时间三个为因素，设计3个水平，用高效液相色谱测定提取物中乌头碱的含量，考察影响乌头碱提取的因素水平。最终筛选出较适宜的提取工艺为用10%氨试液浸润，15倍乙醚浸提，冷浸24h。该实验提取工艺简便、易行，可用于乌头地上部分对乌头碱的提取。目 录
1 绪论
1.1 选题的背景 1
1.2 乌头地上部分的化学成分 1
1.3乌头碱的药理作用及临床 1
1.3.1 乌头碱对心血管的作用 1
1.3.2 乌头碱的免疫抑制作用 1
1.3.3 乌头碱的局麻作用 2
1.3.4 乌头碱的抗炎作用 2
1.3.5 乌头碱的抗肿瘤作用 2
1.3.6 乌头碱的镇痛作用 2
1.3.7 乌头碱的临床应用及注意事项 2
1.4 乌头碱的毒性研究 3
1.4.1 降低乌头碱的方法 3
1.4.2 乌头碱的中毒原因 3
1.4.3 乌头碱的中毒表现 3
1.4.4 乌头碱的中毒预防 4
1.4.5 乌头碱中毒后的治疗 4
1.5 提取方法研究 5
1.5.1 浸渍法 5
1.5.2 超声波提取法 5
1.5.3 渗漉法 5
1.5.4 酶提取法 5
1.5.5 超临界提取法 6
1.5.6 微波萃取法 6
1.6 发展前景 6
2 实验内容
2.1 实验仪器与药材 8
2.1.1 仪器 8
2.1.2 药材 8
2.2 实验方法与结果 8
2.2.1 正交实验设计 8
2.2.2 色谱条件 8
2.2.3 对照品溶液的制备 9
2.2.4 供试品溶液的制备 9
2.2.5 标准曲线的制备 9
2.2.6 精密度试验 10
2.2.7 稳定性试验 10
8
2.1.2 药材 8
2.2 实验方法与结果 8
2.2.1 正交实验设计 8
2.2.2 色谱条件 8
2.2.3 对照品溶液的制备 9
2.2.4 供试品溶液的制备 9
2.2.5 标准曲线的制备 9
2.2.6 精密度试验 10
2.2.7 稳定性试验 10
2.2.8 重现性试验 10
2.2.9 加样回收率试验 11
2.2.10 样品含量测定 11
2.3 正交试验结果与方差分析 11
2.3.1 正交试验结果 11
2.3.2 分差分析 12
2.4 讨论 12
结论 14
参考文献 15
致谢 15
1 绪论
1.1 选题的背景
乌头（Aconitum）为毛茛科乌头属植物[1]，传统以母根和子根入药，母根能祛风除湿，温经止痛，用于风寒湿痹、心腹冷痛、寒疝作痛；子根能回阳救逆，补火助阳，散寒止痛，用于亡阳虚脱、肢冷脉微、胸痹心痛、脘腹冷痛、肾阳虚衰等。前提研究发现乌头地上部分生物碱含量较高，有开发利用的潜力，本研究探讨乌头地上部分的提取工艺，为开发利用提供参考。
1.2 乌头地上部分的化学成分
乌头地上部分中总生物碱的含量为2.3%，主要成分为乌头碱，乌头碱容易溶解在氯仿、乙醚和乙醇中，另外还有活性成分为苯甲酰下乌头（bencoylhypaconine）、中乌头碱（mesaconitine）、杰斯乌头胺（jasaconitine）、苯甲酰乌头（benzoylaconine）、塔技乌头胺（talatisamine）与苯甲酰中乌头胺（benzoylmesaconine）等[6]。这类成分的分子结构中，因为14位的羟基芳酰化和8位羟基的乙酰化，因而乌头在中药中被划分为毒性中药，乌头碱是乌头中最主要的毒性成分[7]。
1.3 乌头碱的药理作用及临床
1.3.1 乌头碱对心血管的作用
一定含量的乌头碱可以使心脏作用增强，会使心率变得缓慢，能降低血压[8]，成为乌头碱的治疗量，乌头碱可使钠通道的稳态激活曲线左移，是一个钠通道激动剂，同时具有正性肌力效应，它可通过激动钠通道增加Na+内流来提高心肌收缩力。张世忠等[9]根据这一报道研究了乌头碱与钾离子通道激动剂合用对离体大鼠心脏的正性肌力作用，得出乌头碱对心功能减退的心脏具有强心作用，激动心肌钾通道可显著增强乌头碱的强心作用和有效浓度范围，临床上用小剂量的乌头碱来研究各种治疗高血压和抗心律失常的药。
1.3.2 乌头碱的免疫抑制作用
乌头碱对免疫器官的影响也是比较大，对体液免疫平均都具有免疫抑制的作用。它不仅能对T淋巴细胞及其亚群产生抑制作用，而且还导致B淋巴细胞的功能也受到了影响。其最佳的免疫抑制作用期为用药一个星期到半个月左右。
1.3.3 乌头碱的局麻作用
乌头碱对机体有着麻醉的作用，它能刺激部分皮肤表层的感觉神经末稍，先兴奋神经，使其产生瘙痒和灼热的感觉，随后就会麻醉机体，使机体丧失知觉。乌头碱对神经肌肉接头活动和神经干复合电位首先是阻遏兴奋神经末稍的传导，也可使神经干完全丧失兴奋和传导冲动的能力。
1.3.4 乌头碱的抗炎作用
乌头碱可以明显减少炎症渗出物中铂族元素的含量，以及明显抑制组胺及五羟色胺引起的毛细血管壁的通透性增强，减轻炎症的反应。可治疗过敏性鼻炎，类风湿性关节炎等各种炎症。
1.3.5 乌头碱的抗肿瘤作用
乌头碱抑制及抗肿瘤转移研究从20世纪开始。 因为乌头碱有明显的毒性而极少涉及临床。曾有1例胰腺癌患者接受过乌头注射液肌肉注射2mL，连续注射将近一个月，一天注射一次，连续三个疗程，癌细胞一直稳定不变。但是病种只是限于消化道肿瘤[10]。
1.3.6 乌头碱的镇痛作用
用电来刺激鼠尾法实验，小鼠腹腔注射乌头碱并且加以70%乙醇浸剂。具有镇痛作用，临床上用于缓解癌痛，乌头碱的注射液对各种各样疼痛都有镇痛的效果，对胀痛、隐痛和钝痛的效果更为明显，虽然其镇痛效果没有吗啡类药物作用明显，但是持续作用长。尤其适用于消化系统癌痛[11]，外用时能麻痹周围神经末梢、产生发汗作用。但是上述方法有毒性反应，且乌头碱的治疗指数比吗啡小。
1.3.7 乌头碱的临床应用及注意事项
用于心动过速，高血压等各种疾病的治疗，采用小剂量乌头碱治疗心动过速及高血压效果较好，但易产生中毒反应，比较不容易控制。是研究心律不齐的工具药品，利用乌头碱的心室纤颤作用机制来制作心律不齐的模型，共同研究对抗心律不齐的各种药物[12]。临床采用了化学与药理的多种现代化研究方法，旨在用现代科学技术诠释深
1 绪论
1.1 选题的背景 1
1.2 乌头地上部分的化学成分 1
1.3乌头碱的药理作用及临床 1
1.3.1 乌头碱对心血管的作用 1
1.3.2 乌头碱的免疫抑制作用 1
1.3.3 乌头碱的局麻作用 2
1.3.4 乌头碱的抗炎作用 2
1.3.5 乌头碱的抗肿瘤作用 2
1.3.6 乌头碱的镇痛作用 2
1.3.7 乌头碱的临床应用及注意事项 2
1.4 乌头碱的毒性研究 3
1.4.1 降低乌头碱的方法 3
1.4.2 乌头碱的中毒原因 3
1.4.3 乌头碱的中毒表现 3
1.4.4 乌头碱的中毒预防 4
1.4.5 乌头碱中毒后的治疗 4
1.5 提取方法研究 5
1.5.1 浸渍法 5
1.5.2 超声波提取法 5
1.5.3 渗漉法 5
1.5.4 酶提取法 5
1.5.5 超临界提取法 6
1.5.6 微波萃取法 6
1.6 发展前景 6
2 实验内容
2.1 实验仪器与药材 8
2.1.1 仪器 8
2.1.2 药材 8
2.2 实验方法与结果 8
2.2.1 正交实验设计 8
2.2.2 色谱条件 8
2.2.3 对照品溶液的制备 9
2.2.4 供试品溶液的制备 9
2.2.5 标准曲线的制备 9
2.2.6 精密度试验 10
2.2.7 稳定性试验 10
8
2.1.2 药材 8
2.2 实验方法与结果 8
2.2.1 正交实验设计 8
2.2.2 色谱条件 8
2.2.3 对照品溶液的制备 9
2.2.4 供试品溶液的制备 9
2.2.5 标准曲线的制备 9
2.2.6 精密度试验 10
2.2.7 稳定性试验 10
2.2.8 重现性试验 10
2.2.9 加样回收率试验 11
2.2.10 样品含量测定 11
2.3 正交试验结果与方差分析 11
2.3.1 正交试验结果 11
2.3.2 分差分析 12
2.4 讨论 12
结论 14
参考文献 15
致谢 15
1 绪论
1.1 选题的背景
乌头（Aconitum）为毛茛科乌头属植物[1]，传统以母根和子根入药，母根能祛风除湿，温经止痛，用于风寒湿痹、心腹冷痛、寒疝作痛；子根能回阳救逆，补火助阳，散寒止痛，用于亡阳虚脱、肢冷脉微、胸痹心痛、脘腹冷痛、肾阳虚衰等。前提研究发现乌头地上部分生物碱含量较高，有开发利用的潜力，本研究探讨乌头地上部分的提取工艺，为开发利用提供参考。
1.2 乌头地上部分的化学成分
乌头地上部分中总生物碱的含量为2.3%，主要成分为乌头碱，乌头碱容易溶解在氯仿、乙醚和乙醇中，另外还有活性成分为苯甲酰下乌头（bencoylhypaconine）、中乌头碱（mesaconitine）、杰斯乌头胺（jasaconitine）、苯甲酰乌头（benzoylaconine）、塔技乌头胺（talatisamine）与苯甲酰中乌头胺（benzoylmesaconine）等[6]。这类成分的分子结构中，因为14位的羟基芳酰化和8位羟基的乙酰化，因而乌头在中药中被划分为毒性中药，乌头碱是乌头中最主要的毒性成分[7]。
1.3 乌头碱的药理作用及临床
1.3.1 乌头碱对心血管的作用
一定含量的乌头碱可以使心脏作用增强，会使心率变得缓慢，能降低血压[8]，成为乌头碱的治疗量，乌头碱可使钠通道的稳态激活曲线左移，是一个钠通道激动剂，同时具有正性肌力效应，它可通过激动钠通道增加Na+内流来提高心肌收缩力。张世忠等[9]根据这一报道研究了乌头碱与钾离子通道激动剂合用对离体大鼠心脏的正性肌力作用，得出乌头碱对心功能减退的心脏具有强心作用，激动心肌钾通道可显著增强乌头碱的强心作用和有效浓度范围，临床上用小剂量的乌头碱来研究各种治疗高血压和抗心律失常的药。
1.3.2 乌头碱的免疫抑制作用
乌头碱对免疫器官的影响也是比较大，对体液免疫平均都具有免疫抑制的作用。它不仅能对T淋巴细胞及其亚群产生抑制作用，而且还导致B淋巴细胞的功能也受到了影响。其最佳的免疫抑制作用期为用药一个星期到半个月左右。
1.3.3 乌头碱的局麻作用
乌头碱对机体有着麻醉的作用，它能刺激部分皮肤表层的感觉神经末稍，先兴奋神经，使其产生瘙痒和灼热的感觉，随后就会麻醉机体，使机体丧失知觉。乌头碱对神经肌肉接头活动和神经干复合电位首先是阻遏兴奋神经末稍的传导，也可使神经干完全丧失兴奋和传导冲动的能力。
1.3.4 乌头碱的抗炎作用
乌头碱可以明显减少炎症渗出物中铂族元素的含量，以及明显抑制组胺及五羟色胺引起的毛细血管壁的通透性增强，减轻炎症的反应。可治疗过敏性鼻炎，类风湿性关节炎等各种炎症。
1.3.5 乌头碱的抗肿瘤作用
乌头碱抑制及抗肿瘤转移研究从20世纪开始。 因为乌头碱有明显的毒性而极少涉及临床。曾有1例胰腺癌患者接受过乌头注射液肌肉注射2mL，连续注射将近一个月，一天注射一次，连续三个疗程，癌细胞一直稳定不变。但是病种只是限于消化道肿瘤[10]。
1.3.6 乌头碱的镇痛作用
用电来刺激鼠尾法实验，小鼠腹腔注射乌头碱并且加以70%乙醇浸剂。具有镇痛作用，临床上用于缓解癌痛，乌头碱的注射液对各种各样疼痛都有镇痛的效果，对胀痛、隐痛和钝痛的效果更为明显，虽然其镇痛效果没有吗啡类药物作用明显，但是持续作用长。尤其适用于消化系统癌痛[11]，外用时能麻痹周围神经末梢、产生发汗作用。但是上述方法有毒性反应，且乌头碱的治疗指数比吗啡小。
1.3.7 乌头碱的临床应用及注意事项
用于心动过速，高血压等各种疾病的治疗，采用小剂量乌头碱治疗心动过速及高血压效果较好，但易产生中毒反应，比较不容易控制。是研究心律不齐的工具药品，利用乌头碱的心室纤颤作用机制来制作心律不齐的模型，共同研究对抗心律不齐的各种药物[12]。临床采用了化学与药理的多种现代化研究方法，旨在用现代科学技术诠释深
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