独活总香豆素的提取工艺优化
摘 要本论文主要对独活总香豆素的提取工艺进行了实验研究。实验中采用超声波提取法提取独活中的总香豆素，选取乙醇作为提取溶剂，在单因素试验的基础上，通过正交试验设计对独活总香豆素提取工艺进行优化，考察了乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间三个因素对独活总香豆素提取率的影响，将紫外-可见分光光度法作为检测手段，以总香豆素的提取得率为评价指标，优选出最佳提取工艺条件，并对该工艺进行验证，优化的提取工艺参数为60％的乙醇、溶剂倍量10倍、提取时间20min。最终得出该提取方法对独活药材中香豆素类成分提取效率较高，操作经济省时，合理可靠，为独活的进一步分析研究提供科学依据。目 录
1 概述
1.1 选题背景 1
1.2 独活的基源研究 1
1.3 独活化学成分研究 2
1.3.1 香豆素类 2
1.3.2 挥发油类 2
1.3.3 其他成分 3
1.4 独活药理活性研究 3
1.4.1 抗炎、镇痛及镇静作用 3
1.4.2 对心血管系统的作用 3
1.4.3 抗氧化作用 3
1.4.4 抗菌作用 3
1.4.5 抗肿瘤活性 4
1.4.6 延缓脑组织细胞凋亡 4
1.4.7 其他活性 4
1.5 独活临床应用研究 4
1.5.1 祛风湿止痹痛 4
1.5.2 伏风头晕牙痛 5
1.5.3 解表散风治外感 5
1.5.4 其他应用 5
1.6 提取方法研究现状 5
2 实验部分
2.1 仪器与试药 7
2.1.1 仪器 7
2.1.2 试药 7
2.2 含量测定方法的建立 7
2.2.1 对照品溶液的制备 7
2.2.2 供试品溶液的制备 7
2.2.3 检测波长的选择 7
2.2.4 标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 9
2.2.6 稳定性试验 9
2.2.7 重复性试验 9
2.2.8 加样回收率试验
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
r /> 2.2 含量测定方法的建立 7
2.2.1 对照品溶液的制备 7
2.2.2 供试品溶液的制备 7
2.2.3 检测波长的选择 7
2.2.4 标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 9
2.2.6 稳定性试验 9
2.2.7 重复性试验 9
2.2.8 加样回收率试验 10
2.3 提取工艺的优选 10
2.3.1 单因素试验 10
2.3.2 正交试验 14
2.4 验证实验 16
3 结果与讨论
3.1 结果 17
3.2 讨论 17
结论 18
参考文献 19
致谢 21
1概述
1.1 选题背景
独活为伞形科当归属植物重齿毛当归（Angelica Pubescens Maxim f.）的干燥根，是一种常见的中药，始载于《神农本草经》，被列为上品。其性温，味辛苦，归肝、肾、膀胱经，具有祛风除湿、通痹止痛之功效，用于风寒湿痹、腰膝疼痛、少阴扶风疼痛、风寒协湿头痛。独活的化学成分复杂繁多，国内外学者做出了大量研究，发现独活中最主要的化学成分是香豆素类化合物，其中又以蛇床子素含量最高，另外还含有挥发油类、植物甾醇、有机酸类、糖类等。现代药理研究发现，香豆素类化合物具有多方面的药理作用，包括镇静镇痛、抗炎、抗肿瘤、降压、抗辐射、抗菌、抗氧化、抗凝血等，在医药、卫生等领域具有广泛的应用价值。
由于独活香豆素类化合物分子量小，合成简单，生物利用度高，而且具有良好的药理活性，受到了众多学者的高度关注和广泛研究。因此，从独活中提取出香豆素类成分及对其提取工艺进行优化具有极其重要的意义。目前，独活总香豆素的提取方法有回流提取法和浸提法，由于传统的提取方法存在影响药效、步骤复杂、耗能高、纯度低、有机溶剂消耗量大等问题，难以满足市场要求，有必要开发与应用新的技术和工艺。而超声波提取法正是近年来新发展起来的一种中药有效成分的提取方法，研究表明，超声波能增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出的次数，缩短提取时间，超声波提取法具有提取时间短、提取效率高、耗能低的特点。所以，本论文采用超声提取法提取独活总香豆素，通过正交试验优化提取工艺条件。
1.2 独活的基源研究
独活是伞形科当归属植物，常用重齿毛当归的干燥根形式，喜阴湿环境，生长于山坡、林下草丛中。其香气浓重，味苦辛，有麻舌感[1,2]。分春初秋末两季采挖，保留主根，去除其他杂根和泥沙，烘干至水分减少50%左右,放置2～3天，待其变软后再烘至全干，切片，生用。独活的主根较为粗短，呈圆柱形，平均长度2.5cm，直径3cm左右。主根有环纹，有多列叶柄痕并呈环状，茎痕呈凹陷状并占据主根中央位置。独活质地坚硬，断面皮部显灰白色，木质部显灰黄色至黄棕色。支根大部分呈弯曲状，表面有纵纹，外观呈现灰棕色或黄棕色。
独活在我国分布较广，主产于四川、湖北、安徽等地，以生长于四川品质为优。历代本草对其植物来源说法不一,现在也因地区不同，差异不同，分类也不同，分为伞形科独活属和当归属。独活的主成分为香豆素类化合物,含量由高到低依次为甲氧基欧芹素、二氢欧山芹醇和二氢欧山芹醇醋酸酯等。按商品来源、规模、应用习惯和本草记载等方面综合考虑，大致可分为四大类: 肉独活类、牛尾独活类、九眼独活类、其它类。
1.3 独活化学成分研究
独活的化学成分复杂繁多，国内外学者做出了大量研究，迄今发现其最主要的化学成分为香豆素类化合物，此外，报道较多的为挥发油类，其它还包括植物甾醇、有机酸、糖类等。随着时代进步,科技手段逐步提高，独活中的化学成分必将被研究得越来越透彻。
1.3.1 香豆素类
目前，据文献报道，从独活中提取分离得到的香豆素类已经达到了70多种,主要有四大类[3]：分别为简单类，呋喃类，吡喃类，双香豆素类，此外还有少部分香豆素苷类。其主要有二氢山芹醇及其乙酸酯、蛇床子素、异欧前胡素、紫花前胡苷、花椒毒素、香相内酯、毛当归醇、当归醇D、G、B、二氢欧山芹当归酸酯以及γ氨基丁酸等。
张才煜等[4]通过对独活化学成分的研究分析,发现蛇床子素在独活的有效成分香豆素类中所占的含量最高。Liu JH等[5]从独活二氯甲烷提取物中分离到了一种新化合物,经过谱学数据鉴定，确定为香豆素类化合物。丁希飞等[6]对采于湖北省五峰县重齿毛当归根部的水溶性成分进行了研究，分离得到了5个香豆素化合物和7个香豆素苷化合物。雷雨等[7]对野生独活茎的化学成分研究，分离鉴定了10个化合物，分别为尿囊素、衡州乌药碱、1N甲基乌药碱、鹅掌揪碱、腺嘌呤核苷、尿嘧啶核苷、蔗糖、葡萄糖、β谷甾醇、胡萝卜苷。
1.3.2 挥发油类
独活根的香气浓郁,挥发油含量较高。挥发性成分主要是一些萜类和醇类化合物。目前，从独活挥发油中分离和鉴定出的挥发油有80多种。蒲兰香等[8]对不同地域独活药材的根进行了挥发油的提取及鉴定分析，研究发现不
1 概述
1.1 选题背景 1
1.2 独活的基源研究 1
1.3 独活化学成分研究 2
1.3.1 香豆素类 2
1.3.2 挥发油类 2
1.3.3 其他成分 3
1.4 独活药理活性研究 3
1.4.1 抗炎、镇痛及镇静作用 3
1.4.2 对心血管系统的作用 3
1.4.3 抗氧化作用 3
1.4.4 抗菌作用 3
1.4.5 抗肿瘤活性 4
1.4.6 延缓脑组织细胞凋亡 4
1.4.7 其他活性 4
1.5 独活临床应用研究 4
1.5.1 祛风湿止痹痛 4
1.5.2 伏风头晕牙痛 5
1.5.3 解表散风治外感 5
1.5.4 其他应用 5
1.6 提取方法研究现状 5
2 实验部分
2.1 仪器与试药 7
2.1.1 仪器 7
2.1.2 试药 7
2.2 含量测定方法的建立 7
2.2.1 对照品溶液的制备 7
2.2.2 供试品溶液的制备 7
2.2.3 检测波长的选择 7
2.2.4 标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 9
2.2.6 稳定性试验 9
2.2.7 重复性试验 9
2.2.8 加样回收率试验
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
r /> 2.2 含量测定方法的建立 7
2.2.1 对照品溶液的制备 7
2.2.2 供试品溶液的制备 7
2.2.3 检测波长的选择 7
2.2.4 标准曲线的绘制 8
2.2.5 精密度试验 9
2.2.6 稳定性试验 9
2.2.7 重复性试验 9
2.2.8 加样回收率试验 10
2.3 提取工艺的优选 10
2.3.1 单因素试验 10
2.3.2 正交试验 14
2.4 验证实验 16
3 结果与讨论
3.1 结果 17
3.2 讨论 17
结论 18
参考文献 19
致谢 21
1概述
1.1 选题背景
独活为伞形科当归属植物重齿毛当归（Angelica Pubescens Maxim f.）的干燥根，是一种常见的中药，始载于《神农本草经》，被列为上品。其性温，味辛苦，归肝、肾、膀胱经，具有祛风除湿、通痹止痛之功效，用于风寒湿痹、腰膝疼痛、少阴扶风疼痛、风寒协湿头痛。独活的化学成分复杂繁多，国内外学者做出了大量研究，发现独活中最主要的化学成分是香豆素类化合物，其中又以蛇床子素含量最高，另外还含有挥发油类、植物甾醇、有机酸类、糖类等。现代药理研究发现，香豆素类化合物具有多方面的药理作用，包括镇静镇痛、抗炎、抗肿瘤、降压、抗辐射、抗菌、抗氧化、抗凝血等，在医药、卫生等领域具有广泛的应用价值。
由于独活香豆素类化合物分子量小，合成简单，生物利用度高，而且具有良好的药理活性，受到了众多学者的高度关注和广泛研究。因此，从独活中提取出香豆素类成分及对其提取工艺进行优化具有极其重要的意义。目前，独活总香豆素的提取方法有回流提取法和浸提法，由于传统的提取方法存在影响药效、步骤复杂、耗能高、纯度低、有机溶剂消耗量大等问题，难以满足市场要求，有必要开发与应用新的技术和工艺。而超声波提取法正是近年来新发展起来的一种中药有效成分的提取方法，研究表明，超声波能增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出的次数，缩短提取时间，超声波提取法具有提取时间短、提取效率高、耗能低的特点。所以，本论文采用超声提取法提取独活总香豆素，通过正交试验优化提取工艺条件。
1.2 独活的基源研究
独活是伞形科当归属植物，常用重齿毛当归的干燥根形式，喜阴湿环境，生长于山坡、林下草丛中。其香气浓重，味苦辛，有麻舌感[1,2]。分春初秋末两季采挖，保留主根，去除其他杂根和泥沙，烘干至水分减少50%左右,放置2～3天，待其变软后再烘至全干，切片，生用。独活的主根较为粗短，呈圆柱形，平均长度2.5cm，直径3cm左右。主根有环纹，有多列叶柄痕并呈环状，茎痕呈凹陷状并占据主根中央位置。独活质地坚硬，断面皮部显灰白色，木质部显灰黄色至黄棕色。支根大部分呈弯曲状，表面有纵纹，外观呈现灰棕色或黄棕色。
独活在我国分布较广，主产于四川、湖北、安徽等地，以生长于四川品质为优。历代本草对其植物来源说法不一,现在也因地区不同，差异不同，分类也不同，分为伞形科独活属和当归属。独活的主成分为香豆素类化合物,含量由高到低依次为甲氧基欧芹素、二氢欧山芹醇和二氢欧山芹醇醋酸酯等。按商品来源、规模、应用习惯和本草记载等方面综合考虑，大致可分为四大类: 肉独活类、牛尾独活类、九眼独活类、其它类。
1.3 独活化学成分研究
独活的化学成分复杂繁多，国内外学者做出了大量研究，迄今发现其最主要的化学成分为香豆素类化合物，此外，报道较多的为挥发油类，其它还包括植物甾醇、有机酸、糖类等。随着时代进步,科技手段逐步提高，独活中的化学成分必将被研究得越来越透彻。
1.3.1 香豆素类
目前，据文献报道，从独活中提取分离得到的香豆素类已经达到了70多种,主要有四大类[3]：分别为简单类，呋喃类，吡喃类，双香豆素类，此外还有少部分香豆素苷类。其主要有二氢山芹醇及其乙酸酯、蛇床子素、异欧前胡素、紫花前胡苷、花椒毒素、香相内酯、毛当归醇、当归醇D、G、B、二氢欧山芹当归酸酯以及γ氨基丁酸等。
张才煜等[4]通过对独活化学成分的研究分析,发现蛇床子素在独活的有效成分香豆素类中所占的含量最高。Liu JH等[5]从独活二氯甲烷提取物中分离到了一种新化合物,经过谱学数据鉴定，确定为香豆素类化合物。丁希飞等[6]对采于湖北省五峰县重齿毛当归根部的水溶性成分进行了研究，分离得到了5个香豆素化合物和7个香豆素苷化合物。雷雨等[7]对野生独活茎的化学成分研究，分离鉴定了10个化合物，分别为尿囊素、衡州乌药碱、1N甲基乌药碱、鹅掌揪碱、腺嘌呤核苷、尿嘧啶核苷、蔗糖、葡萄糖、β谷甾醇、胡萝卜苷。
1.3.2 挥发油类
独活根的香气浓郁,挥发油含量较高。挥发性成分主要是一些萜类和醇类化合物。目前，从独活挥发油中分离和鉴定出的挥发油有80多种。蒲兰香等[8]对不同地域独活药材的根进行了挥发油的提取及鉴定分析，研究发现不
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