响应面法优化连钱草总黄酮的提取工艺研究
目的 对连钱草的提取工艺进行进一步优化。方法 通过单因素实验确定影响连钱草总黄酮提取的三个主要因素（浓度、提取时间、液料比），以得到的三个因素为自变量，总黄酮的紫外吸光度值为响应值，采用响应面法Box-Behnken实验建立回归方程，求取最优的提取工艺参数。结果 根据实验得出提取连钱草中总黄酮的最佳甲醇浓度为37%，最佳提取时间为19 min，最佳料液比为21:1 mL/g。结论 本实验优化了连钱草总黄酮的提取工艺，能够更好的指导实践生产，为连钱草的进一步开发利用提供了更好的前景。关键词 连钱草，总黄酮，提取工艺，优化，响应面实验
目 录
1 引言 1
1.1 化学成分的研究 1
1.2 药理作用的研究 2
1.3 总黄酮提取工艺研究的及意义 3
2 材料与方法 4
2.1 仪器与设备 4
2.2 药材与试剂 4
2.3 实验方案 5
2.4 单因素实验 5
2.5 响应面实验 7
2.6 数据分析 7
3 结果与分析 7
3.1 单因素试验结果 7
3.2 响应面实验结果 11
结论 15
致谢 16
参考文献 17
1 引言
连钱草为唇形科活血丹属植物活血丹(Glechoma longituba (NaKai) Kupr.)干燥地上部分。在我国连钱草数量种类众多，不同地区各有不同的品种与叫法。如在分布较多的江苏地区被称为“江苏金钱草”，在广东地区生长的又叫“广金钱草”。连钱草性味凉辛、微苦、微寒。在临床上，连钱草多用于治疗尿石，水肿，肝胆结石，还有各种疾病，包括哮喘、支气管炎、感冒和炎症，清热解毒、散瘀消肿[1]。连钱草的化学组成较复杂，主要包括黄酮类、萜类、有机酸，挥发油等，药理研究表明，一些酚类化合物（如咖啡酸、绿原酸、迷迭香酸）都具有显著的抗氧化活性，而黄酮类化合物就是以它的抗氧化和抗辐射能力而闻名。为了充分开发利用连钱草的药用价值和提取工艺的优化，故对其多方面的研究进展进行综述。
1.1 化学成分的研究
1.1.1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
萜类化合物
萜类化合物主要有齐墩果酸、熊果酸、2羟基乌苏酸、乌苏酸等。张前军[2]等从连钱草中分离出七个三萜类化合物：白桦脂醇、白桦脂酸、熊果醇、0羟基达玛24烯酮、23β羟基20, 24二烯达玛烷、2α, 3α, 24二烯三羟基乌苏12烯28酸、豆甾4烯3, 6二酮。
齐墩果酸 熊果酸
1.1.2 黄酮和黄酮苷类化合物
黄酮和黄酮苷类化合物多为木犀草素、芹菜素、芦丁、海常素、胡萝卜苷、刺槐素、连钱草酮、槲皮素等。杨念云[3]等从用乙醇从连钱草物中得到以下黄酮类化合物：木犀草素、木犀草素7O葡萄糖醛羧酸脂、芹菜素、大波斯菊苷、芹菜素7O葡萄糖醛酸乙酯苷、山奈酚3O芸香苷、木犀草素7O葡萄糖苷、木犀草素7O葡萄糖醛酸乙酯苷、芦丁、6C葡萄糖8C葡萄糖芹菜素、6C阿拉伯糖8C葡萄糖芹菜素。
木犀草素 芹菜素
1.1.3 挥发油类化合物
挥发油主要有l薄荷酮(lmenthone)、l蒎莰酮(lpinocamphone)和l胡薄荷酮(lpulegone)。其他还包括A蒎烯、B蒎烯、柠檬烯、对聚伞花烃、异薄荷酮(isomenthone)、异蒎莰酮(isopinocamphone)、芳樟醇、薄荷醇(menthol)、A松油醇(Aterpinol)、1,8桉叶素、异松樟酮，各成分因为连钱草收集的时间、地点等其他因素的不同而不同[4]。
1.2 药理作用的研究
连钱草的药理作用有很多，主要有利尿利胆、溶石、降脂、抗炎、降血糖、抗菌以及对平滑肌的影响等方面的作用。
1.2.1 利尿利胆
连钱草甲醇提物和水提物能增强肝细胞胆汁的分泌，使胆管内的胆汁变多，内压增高，胆道括约肌得以松弛，将胆汁排出，大剂量和高浓度的连钱草的各类溶解液及浸膏，能使家兔离体肠道变强及使体子宫和肠管平滑肌收缩，还有解胆碱效果。连钱草煎剂可使小便变为酸性，促使碱性环境中的溶解[5]。
1.2.2 降血糖作用
经过对连钱草的降血糖作用机制的研究，袁春玲等人发现连钱草能够通过降低链脲佐菌素，使小鼠的血糖增高，小鼠体内SOD活性增强，降低MDA含量,能够将氧自由基对B细胞的损伤降低，来保全B细胞。因此，连钱草总黄酮有抑菌活性的作用[6]。
1.2.3 其他作用
此外，连钱草还具有抑菌、降脂、溶石的的效果，抗炎，对平滑肌作用，抗肿瘤作用等[7]。
1.3 总黄酮提取工艺研究的及意义
1.3.1 超声循环法
袁春玲[9]等人在超声条件下寻找提取连钱草总黄酮的优化条件。用正交设计法，以对提取率有影响的主要的四个因素（超声功率、时间、温度、溶剂浓度）进行研究，得到连钱草总黄酮超声提取的最佳提取条件（超声功率800 W，超声时间90(45，45) min，提取温度40℃，溶剂浓度65%）。最佳提取条件下总黄酮的质量分数为5.228%的结果。
1.3.2 大孔吸附树脂纯化法
袁春玲[10]等人以连钱草总黄酮洗脱率与纯度作为标志，固定大孔树脂分离纯化连钱草总黄酮的吸附与洗脱参数。得出药液浓度（总黄酮浓度383 mg/mL），上样量20 mL，以1.0 mL/min的速度进行吸附，5 BV纯化水、10 BV30%乙醇依次以1.0 mL/min的速度进行洗脱，效率最高，醇洗脱液浓缩后总干燥物中连钱草总黄酮的含量达68.94%的结果。
目 录
1 引言 1
1.1 化学成分的研究 1
1.2 药理作用的研究 2
1.3 总黄酮提取工艺研究的及意义 3
2 材料与方法 4
2.1 仪器与设备 4
2.2 药材与试剂 4
2.3 实验方案 5
2.4 单因素实验 5
2.5 响应面实验 7
2.6 数据分析 7
3 结果与分析 7
3.1 单因素试验结果 7
3.2 响应面实验结果 11
结论 15
致谢 16
参考文献 17
1 引言
连钱草为唇形科活血丹属植物活血丹(Glechoma longituba (NaKai) Kupr.)干燥地上部分。在我国连钱草数量种类众多，不同地区各有不同的品种与叫法。如在分布较多的江苏地区被称为“江苏金钱草”，在广东地区生长的又叫“广金钱草”。连钱草性味凉辛、微苦、微寒。在临床上，连钱草多用于治疗尿石，水肿，肝胆结石，还有各种疾病，包括哮喘、支气管炎、感冒和炎症，清热解毒、散瘀消肿[1]。连钱草的化学组成较复杂，主要包括黄酮类、萜类、有机酸，挥发油等，药理研究表明，一些酚类化合物（如咖啡酸、绿原酸、迷迭香酸）都具有显著的抗氧化活性，而黄酮类化合物就是以它的抗氧化和抗辐射能力而闻名。为了充分开发利用连钱草的药用价值和提取工艺的优化，故对其多方面的研究进展进行综述。
1.1 化学成分的研究
1.1.1 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
萜类化合物
萜类化合物主要有齐墩果酸、熊果酸、2羟基乌苏酸、乌苏酸等。张前军[2]等从连钱草中分离出七个三萜类化合物：白桦脂醇、白桦脂酸、熊果醇、0羟基达玛24烯酮、23β羟基20, 24二烯达玛烷、2α, 3α, 24二烯三羟基乌苏12烯28酸、豆甾4烯3, 6二酮。
齐墩果酸 熊果酸
1.1.2 黄酮和黄酮苷类化合物
黄酮和黄酮苷类化合物多为木犀草素、芹菜素、芦丁、海常素、胡萝卜苷、刺槐素、连钱草酮、槲皮素等。杨念云[3]等从用乙醇从连钱草物中得到以下黄酮类化合物：木犀草素、木犀草素7O葡萄糖醛羧酸脂、芹菜素、大波斯菊苷、芹菜素7O葡萄糖醛酸乙酯苷、山奈酚3O芸香苷、木犀草素7O葡萄糖苷、木犀草素7O葡萄糖醛酸乙酯苷、芦丁、6C葡萄糖8C葡萄糖芹菜素、6C阿拉伯糖8C葡萄糖芹菜素。
木犀草素 芹菜素
1.1.3 挥发油类化合物
挥发油主要有l薄荷酮(lmenthone)、l蒎莰酮(lpinocamphone)和l胡薄荷酮(lpulegone)。其他还包括A蒎烯、B蒎烯、柠檬烯、对聚伞花烃、异薄荷酮(isomenthone)、异蒎莰酮(isopinocamphone)、芳樟醇、薄荷醇(menthol)、A松油醇(Aterpinol)、1,8桉叶素、异松樟酮，各成分因为连钱草收集的时间、地点等其他因素的不同而不同[4]。
1.2 药理作用的研究
连钱草的药理作用有很多，主要有利尿利胆、溶石、降脂、抗炎、降血糖、抗菌以及对平滑肌的影响等方面的作用。
1.2.1 利尿利胆
连钱草甲醇提物和水提物能增强肝细胞胆汁的分泌，使胆管内的胆汁变多，内压增高，胆道括约肌得以松弛，将胆汁排出，大剂量和高浓度的连钱草的各类溶解液及浸膏，能使家兔离体肠道变强及使体子宫和肠管平滑肌收缩，还有解胆碱效果。连钱草煎剂可使小便变为酸性，促使碱性环境中的溶解[5]。
1.2.2 降血糖作用
经过对连钱草的降血糖作用机制的研究，袁春玲等人发现连钱草能够通过降低链脲佐菌素，使小鼠的血糖增高，小鼠体内SOD活性增强，降低MDA含量,能够将氧自由基对B细胞的损伤降低，来保全B细胞。因此，连钱草总黄酮有抑菌活性的作用[6]。
1.2.3 其他作用
此外，连钱草还具有抑菌、降脂、溶石的的效果，抗炎，对平滑肌作用，抗肿瘤作用等[7]。
1.3 总黄酮提取工艺研究的及意义
1.3.1 超声循环法
袁春玲[9]等人在超声条件下寻找提取连钱草总黄酮的优化条件。用正交设计法，以对提取率有影响的主要的四个因素（超声功率、时间、温度、溶剂浓度）进行研究，得到连钱草总黄酮超声提取的最佳提取条件（超声功率800 W，超声时间90(45，45) min，提取温度40℃，溶剂浓度65%）。最佳提取条件下总黄酮的质量分数为5.228%的结果。
1.3.2 大孔吸附树脂纯化法
袁春玲[10]等人以连钱草总黄酮洗脱率与纯度作为标志，固定大孔树脂分离纯化连钱草总黄酮的吸附与洗脱参数。得出药液浓度（总黄酮浓度383 mg/mL），上样量20 mL，以1.0 mL/min的速度进行吸附，5 BV纯化水、10 BV30%乙醇依次以1.0 mL/min的速度进行洗脱，效率最高，醇洗脱液浓缩后总干燥物中连钱草总黄酮的含量达68.94%的结果。
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