超声法优选鸡血藤多糖的提取工艺(附件)
摘 要本论文利用单因素实验结合响应曲面法优化鸡血藤中多糖的超声提取工艺。通过响应曲面法来分析单因素，研究料液比,提取时间及超声频率对鸡血藤多糖的提取率的影响。通过鸡血藤的多糖测定确定料液比为1:30、提取时间20 min、提取频率60 KHz，通过超声法提取鸡血藤多糖在响应曲面法的分析下，找到了最优的工艺，该法不仅降低实验时间，其稳定、简单、高效率的特点为鸡血藤多糖提取工艺的优化提供了参考。 目 录
摘 要 I
1 绪论 1
1.1 研究的背景和意义 1
1.2 超声提取鸡血藤多糖的相关研究 2
1.2.1 多糖的结构与活性的关系 2
1.2.2 鸡血藤的化学成分 2
1.2.3 鸡血藤的药理活性 4
1.2.4 多糖常用的提取方法 4
2 实验分析 7
2.1 实验材料和方法 7
2.1.1 实验材料 7
2.1.2 实验方法 7
2.1.2.3标准曲线的制备 7
2.1.2.4响应曲面法 8
2.2 实验结果分析 8
2.2.1 单因素实验结果 8
2.2.2 响应面法设计 11
2.2.3响应曲面法分析 12
2.2.4小结 14
结论 15
参考文献 16
致谢 19
1 绪论
鸡血藤，最早记载于《本草备要》，是一种具有活血化瘀作用的中药[1]。鸡血藤为豆科(Leguminosae)密花豆属植物密花豆（Spatholobussuberectus Dunn）的干燥藤茎，其性温，味苦、甘，归肝、肾经，具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效[2]。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等症。鸡血藤的基源植物主要有25个种和变种，分属豆科和五味子科的6个属，其中在商品中出现有密花豆、香花崖豆藤、大血藤及常春油麻藤[3]。本研究所选鸡血藤为密花豆的藤茎，产于广东。
1.1 研究的背景和意义
从七十年代到现在，伴随着现代医学、细胞分子学、生物学、病毒学等研究的深入，科研人员发现在生物体中存
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
之功效[2]。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等症。鸡血藤的基源植物主要有25个种和变种，分属豆科和五味子科的6个属，其中在商品中出现有密花豆、香花崖豆藤、大血藤及常春油麻藤[3]。本研究所选鸡血藤为密花豆的藤茎，产于广东。
1.1 研究的背景和意义
从七十年代到现在，伴随着现代医学、细胞分子学、生物学、病毒学等研究的深入，科研人员发现在生物体中存在的多糖具有很大的研究意义和研究价值，并且多糖在一些生物体中比较复杂 [4]。生物体细胞表面的抗原多是一些糖链残基；生物体中大多数的功能蛋白也是或多或少地结合有糖链的糖蛋白；并且细胞表面的糖链含有非常丰富的生物学信息，糖链分子量的变化、糖链所含残基的变化及糖链三维空间结构的变化预示了细胞的各种生理状态，如分裂、转化、病变等。可以说糖类化合物决定了细胞表面各种作用的特异性，同时多糖类物质还参与了细胞各种生理活动的调节[5]。因而经过近三十年的研究，多糖类化合物己经发展为一种免疫疗法，通过激活免疫细胞来提高机体的免疫功能，同时对于正常的细胞没有毒副作用，在这一点上它对肿瘤的治疗比手术、化疗和放疗都要优越的多[6]。关于多糖的结构以及生物功能的研究已经成为蛋白质和核酸后的第3个探索生命奥秘的重要里程。多糖因其广泛和无毒，在抗氧化衰老、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和调节血糖等方面的药理作用显著，表现出了良好的发展应用前景，对多糖的分离提取、药理作用和结构成分的研究已成为一大热点。
本文主要以鸡血藤为例，分析鸡血藤当中的多糖的提取。本次研究采用BoxBehnken试验法对工艺进行优化，选取最佳工艺参数，从单因素方面来考察，提高了其生产效率，从而提高鸡血藤多糖的核心竞争力，使其在市场上所占的份额上升，促进企业进一步发展。在保证疗效不变的情况下提高多糖的提取，使得鸡血藤的治疗效果有所增强，为后续人们继续研究提供了良好的参照。因此，本次研究对鸡血藤多糖的提取工艺的大生产提供了很好的参考意义。
1.2 超声提取鸡血藤多糖的相关研究
1.2.1 多糖的结构与活性的关系
1.2.1.1抗肿瘤作用与结构关系
通过对具有抗肿瘤作用的多糖进行研究发现，从菌体中提取得到的活性多糖一般由葡萄糖组成，而且葡聚糖主链上一般均有(1,6键[7]。如从奇果菌属分离出来的具有抗肿瘤活性的奇果菌多糖，基本结构是(1,3结合的直链葡萄糖，3分子中有1分子的R 1, 6侧链葡聚糖[8]。从猪岑菌种的菌体中分离得到多种多糖级分，其抗肿瘤活性的部分也是带（1→6）支链的(（1→3）D葡聚糖。从香菇中提取得到的抗肿瘤多糖，也是由(（1→3）结合的直链葡聚糖构成，以5个单糖残基分子上有2个分子的比率，在葡萄糖残基6位有R结合的侧链葡萄糖分子[9]。
其次由植物中提取的抗肿瘤活性多糖一般由半乳糖醛酸等组成，如从禾本科植物磐竹中提取的由木糖、阿拉伯糖及半乳糖等组成的磐竹多糖 [10]。Mien JE.等从紫松果竹分离的由阿拉伯糖和半乳糖等组成的多糖，可促进巨噬细胞产生肿瘤细胞坏死因子[11]。有些果聚糖也具有抗不同肿瘤的活性，如高等植物一支黄花的(1, 2结合的果聚糖，具有抗肿瘤作用[12]。
1.2.1.2硫酸化多糖抑制HIV病毒与结构的关系
硫酸盐阴离子对硫酸化多糖抑制HIV病毒是离子结构。如小分子量的牛膝多搪有增强免疫力的作用，但不抗病毒，引入一定量的硫酸基团后，就有了较强的抗乙型肝炎病毒HbsAg和HbeAg的活性[13]。香菇多糖[14]具有抗肿瘤的活性在硫酸化以后，也就具有了抗HIV的活性，能够对病变的细胞产生抑制，硫酸根在抑制HIV且生长的过程起了重要作用,一般每个单糖单位含有23个SO42能够获得最佳的抗HIVI活性。
1.2.2 鸡血藤的化学成分
到目前为止，对鸡血藤的化学成分研究已经有很多的学者在研究，从结构类型来看，主要是黄酮类，甾醇类，萜类，内酯类和其他类型的各种化合物[15]。成军[16]等分离鉴定得到白桦脂酸、二十五烷酸(单甘油酷等5种化合物，且都是首次在鸡血藤中发现的；舒顺利[17]等也首次在鸡血藤中分离出染料木素和羊红擅醇；冯洁等则首次在鸡血藤中分离出鹰嘴豆芽素、阿弗洛莫生等4种化合物；郑岩[18]等也在密花豆属中首次分离到3轻基9甲氧基紫檀烷、芒柄花素钠、7，4’二羟基3’甲氧基异黄酮。许多的研究人员在鸡血藤的脂溶性成分，水溶性成分等发现了新的化合物，这些成果对我们了解和研究鸡血藤起到了重要的作用。
与此同时，很多研究人员也对鸡
摘 要 I
1 绪论 1
1.1 研究的背景和意义 1
1.2 超声提取鸡血藤多糖的相关研究 2
1.2.1 多糖的结构与活性的关系 2
1.2.2 鸡血藤的化学成分 2
1.2.3 鸡血藤的药理活性 4
1.2.4 多糖常用的提取方法 4
2 实验分析 7
2.1 实验材料和方法 7
2.1.1 实验材料 7
2.1.2 实验方法 7
2.1.2.3标准曲线的制备 7
2.1.2.4响应曲面法 8
2.2 实验结果分析 8
2.2.1 单因素实验结果 8
2.2.2 响应面法设计 11
2.2.3响应曲面法分析 12
2.2.4小结 14
结论 15
参考文献 16
致谢 19
1 绪论
鸡血藤，最早记载于《本草备要》，是一种具有活血化瘀作用的中药[1]。鸡血藤为豆科(Leguminosae)密花豆属植物密花豆（Spatholobussuberectus Dunn）的干燥藤茎，其性温，味苦、甘，归肝、肾经，具有活血补血，调经止痛，舒筋活络之功效[2]。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等症。鸡血藤的基源植物主要有25个种和变种，分属豆科和五味子科的6个属，其中在商品中出现有密花豆、香花崖豆藤、大血藤及常春油麻藤[3]。本研究所选鸡血藤为密花豆的藤茎，产于广东。
1.1 研究的背景和意义
从七十年代到现在，伴随着现代医学、细胞分子学、生物学、病毒学等研究的深入，科研人员发现在生物体中存
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
之功效[2]。用于月经不调，痛经，经闭，风湿痹痛，麻木瘫痪，血虚萎黄等症。鸡血藤的基源植物主要有25个种和变种，分属豆科和五味子科的6个属，其中在商品中出现有密花豆、香花崖豆藤、大血藤及常春油麻藤[3]。本研究所选鸡血藤为密花豆的藤茎，产于广东。
1.1 研究的背景和意义
从七十年代到现在，伴随着现代医学、细胞分子学、生物学、病毒学等研究的深入，科研人员发现在生物体中存在的多糖具有很大的研究意义和研究价值，并且多糖在一些生物体中比较复杂 [4]。生物体细胞表面的抗原多是一些糖链残基；生物体中大多数的功能蛋白也是或多或少地结合有糖链的糖蛋白；并且细胞表面的糖链含有非常丰富的生物学信息，糖链分子量的变化、糖链所含残基的变化及糖链三维空间结构的变化预示了细胞的各种生理状态，如分裂、转化、病变等。可以说糖类化合物决定了细胞表面各种作用的特异性，同时多糖类物质还参与了细胞各种生理活动的调节[5]。因而经过近三十年的研究，多糖类化合物己经发展为一种免疫疗法，通过激活免疫细胞来提高机体的免疫功能，同时对于正常的细胞没有毒副作用，在这一点上它对肿瘤的治疗比手术、化疗和放疗都要优越的多[6]。关于多糖的结构以及生物功能的研究已经成为蛋白质和核酸后的第3个探索生命奥秘的重要里程。多糖因其广泛和无毒，在抗氧化衰老、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和调节血糖等方面的药理作用显著，表现出了良好的发展应用前景，对多糖的分离提取、药理作用和结构成分的研究已成为一大热点。
本文主要以鸡血藤为例，分析鸡血藤当中的多糖的提取。本次研究采用BoxBehnken试验法对工艺进行优化，选取最佳工艺参数，从单因素方面来考察，提高了其生产效率，从而提高鸡血藤多糖的核心竞争力，使其在市场上所占的份额上升，促进企业进一步发展。在保证疗效不变的情况下提高多糖的提取，使得鸡血藤的治疗效果有所增强，为后续人们继续研究提供了良好的参照。因此，本次研究对鸡血藤多糖的提取工艺的大生产提供了很好的参考意义。
1.2 超声提取鸡血藤多糖的相关研究
1.2.1 多糖的结构与活性的关系
1.2.1.1抗肿瘤作用与结构关系
通过对具有抗肿瘤作用的多糖进行研究发现，从菌体中提取得到的活性多糖一般由葡萄糖组成，而且葡聚糖主链上一般均有(1,6键[7]。如从奇果菌属分离出来的具有抗肿瘤活性的奇果菌多糖，基本结构是(1,3结合的直链葡萄糖，3分子中有1分子的R 1, 6侧链葡聚糖[8]。从猪岑菌种的菌体中分离得到多种多糖级分，其抗肿瘤活性的部分也是带（1→6）支链的(（1→3）D葡聚糖。从香菇中提取得到的抗肿瘤多糖，也是由(（1→3）结合的直链葡聚糖构成，以5个单糖残基分子上有2个分子的比率，在葡萄糖残基6位有R结合的侧链葡萄糖分子[9]。
其次由植物中提取的抗肿瘤活性多糖一般由半乳糖醛酸等组成，如从禾本科植物磐竹中提取的由木糖、阿拉伯糖及半乳糖等组成的磐竹多糖 [10]。Mien JE.等从紫松果竹分离的由阿拉伯糖和半乳糖等组成的多糖，可促进巨噬细胞产生肿瘤细胞坏死因子[11]。有些果聚糖也具有抗不同肿瘤的活性，如高等植物一支黄花的(1, 2结合的果聚糖，具有抗肿瘤作用[12]。
1.2.1.2硫酸化多糖抑制HIV病毒与结构的关系
硫酸盐阴离子对硫酸化多糖抑制HIV病毒是离子结构。如小分子量的牛膝多搪有增强免疫力的作用，但不抗病毒，引入一定量的硫酸基团后，就有了较强的抗乙型肝炎病毒HbsAg和HbeAg的活性[13]。香菇多糖[14]具有抗肿瘤的活性在硫酸化以后，也就具有了抗HIV的活性，能够对病变的细胞产生抑制，硫酸根在抑制HIV且生长的过程起了重要作用,一般每个单糖单位含有23个SO42能够获得最佳的抗HIVI活性。
1.2.2 鸡血藤的化学成分
到目前为止，对鸡血藤的化学成分研究已经有很多的学者在研究，从结构类型来看，主要是黄酮类，甾醇类，萜类，内酯类和其他类型的各种化合物[15]。成军[16]等分离鉴定得到白桦脂酸、二十五烷酸(单甘油酷等5种化合物，且都是首次在鸡血藤中发现的；舒顺利[17]等也首次在鸡血藤中分离出染料木素和羊红擅醇；冯洁等则首次在鸡血藤中分离出鹰嘴豆芽素、阿弗洛莫生等4种化合物；郑岩[18]等也在密花豆属中首次分离到3轻基9甲氧基紫檀烷、芒柄花素钠、7，4’二羟基3’甲氧基异黄酮。许多的研究人员在鸡血藤的脂溶性成分，水溶性成分等发现了新的化合物，这些成果对我们了解和研究鸡血藤起到了重要的作用。
与此同时，很多研究人员也对鸡
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