注射剂热原检测及控制(附件)
本人签名： 日期： 摘 要 以复方曲肽注射液为研究对象，采用细菌内毒素检查法进行检查；以细菌内毒素检查用水（BET水）1:4稀释本供试品，对0.125 EU/mL 标示灵敏度的不同厂家的鲎试剂均无明显干扰作用；以1:4稀释供试品，再以0.125 EU/mL标示灵敏度的鲎试剂检测复方曲肽注射液的细菌内毒素，所得结果与家兔法相同，进而探讨注射剂生产过程中人、机、料、环四个方面控制细菌内毒素的控制，为加强质量控制提供依据。本文所建立的复方曲肽注射液细菌内毒素检测方法操作简便，灵敏度高，适于注射剂热原的检测。 目 录
1 绪论
1.1药品概述 1
1.2热原及其检测原理 1
2 材料与方法
2.1试剂 3
2.2仪器 3
2.3方法 3
2.3.1细菌内毒素限值确定 3
2.3.2样品的最大有效稀释倍数确定 3
2.3.3鲎试剂灵敏度复核 3
2.3.4干扰实验 4
2.4结果 4
2.4.1鲎试剂灵敏度复核实验结果 4
2.4.2干扰实验结果 4
2.4.3复方曲肽注射液凝胶法细菌内毒检查结果 5
2.5讨论 6
2.5.1操作注意事项 6
2.5.2鲎试剂对药品生产质控的意义 6
2.5.3内毒素检查在多组分生化药中的应用 7
3 注射剂生产中细菌内毒素控制
3.1细菌内毒素发病机制及特点 8
3.2细菌内毒素与热原 8
3.3去除细菌内毒素的方法 8
3.4注射剂生产过程控制细菌内毒素的措施 9
3.4.1以人员为途径对药品进行质控 9
3.4.2以生产设备为途径对药品进行质控 10
3.4.3以原辅料为途径对药品进行质控 10
3.4.4以环境为途径对药品进行质控 11
结 论 12
参考文献 13
致 谢 15
1 绪
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
/> 3.4注射剂生产过程控制细菌内毒素的措施 9
3.4.1以人员为途径对药品进行质控 9
3.4.2以生产设备为途径对药品进行质控 10
3.4.3以原辅料为途径对药品进行质控 10
3.4.4以环境为途径对药品进行质控 11
结 论 12
参考文献 13
致 谢 15
1 绪论
1.1药品概述
复方曲肽注射液（Compound Troxerutinand Poreine Cerebroside Injection）是由多种神经节苷脂、曲克芦丁及多肽等组成的多组分生化药注射剂。对于注射剂的定义一般都是一样的，从其定义可知，注射剂是无菌溶液。由于注射剂不是从胃肠道吸收而作用于人体的，所以就避免了肝脏的影响，起效也就十分迅速，且作用比较可靠[1]。由于注射剂的使用风险较大，所以注射剂的质量要安全、稳定、可靠，中国药典对注射剂的质量要求是：①无菌：即注射剂内不应有任何活的微生物存在，生产中必须采用适当的方法灭菌，使微生物残存概率小于106。这儿的无菌不是绝对的没有菌，而是应用《中国药典》规定的方法检查不到菌。②无热原：注射剂内不应含热原，特别是用量一次超过5ml以上、供静脉注射或脊椎注射的注射剂，生产中必须采用合适的方法除热源，如酸碱法、活性炭吸附、超滤等，关键的生产步骤辅以内毒素检查，达到控制生产中热源的目的。③澄明度：应符合澄明度检查的要求。④渗透压：应该符合标准的要求。⑤安全性：注射剂首先应对人体是安全的，上市前应做药理、毒理试验，证明该药对机体无毒性和刺激性。⑥pH值：注射剂应具有与血液相等或相近的pH值。⑦稳定性：注射剂必须具有必要的物理稳定性和化学稳定性，以确保产品在贮存期安全、有效[2]。
1.2热原及其检测原理
热原是指能引起恒温动物体温异常升高的物质，包括内生致热原、外致热原及某些体内产物。注射剂质量要求中的无热原是指无外致热原，包括革兰氏阳性细菌：全菌体、代谢产物、细胞壁中的肽聚糖[3]；革兰氏阴性细菌：全菌体、代谢产物、肽聚糖，尤其是细胞壁中所含的内毒素（endotoxin，ET）[4]。热原主要是内毒素，内毒素的主要成分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），LPS主要致热及毒性部分为脂质A（Lipid A），其具有高水溶性，高耐热性，难以灭活及清除，有极强的发热效应，是最常见的外致热原，所以通常热原就是指细菌内毒素[5]。
凝胶法鲎试剂原理：鲎试剂内的Enzyme and solidification protein gel，在适宜的条件下，被细菌内毒素激活，鲎试剂产生凝集反应形成凝胶[6]。本研究选用凝胶法测试多组分生化药注射剂细菌内毒素。探讨生产中控制细菌内毒素污染的方法，为加强产品质量控制提供依据[7]。
复方曲肽注射液中的曲克芦丁有抗凝血、防止血栓形成的作用，活性多肽、多种氨基酸等血脑屏障透过率高，能较好的改善中枢神经神经元的代谢，进而改善脑内神经胞缺氧状态，保护缺氧的脑组织[8]。复方曲肽注射液热原检查方法为家兔法，家兔法检查是以终产品为检查对象的静态质量控制模式，存在灵敏度不高，无法精确定量细菌内毒素的量，且操作十分繁琐，检验成本较高等缺点。复方曲肽注射液生产中缺少事前热原污染监控指标，不利于生产过程内毒素的有效控制。以鲎试剂为工具建立的细菌内毒素检查法则为生产过程内毒素控制提供了一个有效的方法[9]。应用操作简单的细菌内毒素检查项取代热原检查成了研究的热点，也是发展的趋势，中华人民共和国药典中也有越来越多的药品使用鲎试剂检查[10]。本研究在新版药典附录凝胶法的基础上，探讨建立复方曲肽注射液细菌内毒素检查法，并以此法与家兔法结果进行比较，实现生产过程中细菌内毒素动态监控。
2 材料与方法
2.1试剂
细菌内毒素检查用水（购自中国药品生物制品检定所，规格5ml/支，批号160107）；凝胶法鲎试剂（科德角国际生物医学科技（北京）有限公司，规格0.1ml/支，批号151127、151216，灵敏度0.125EU/ml）；细菌内毒素工作标准品（上海锐谷生物科技有限公司，规格100EU/支，批号151236）；复方曲肽注射液（吉林步长制药有限公司，批号2160101、20160102、20160103，规格2ml/支）。
2.2仪器
恒温水浴锅购自天津津立仪器设备科技发展有限公司，去热源枪头和移液枪购自北京海天友诚科技有限公司。
2.3方法
2.3
1 绪论
1.1药品概述 1
1.2热原及其检测原理 1
2 材料与方法
2.1试剂 3
2.2仪器 3
2.3方法 3
2.3.1细菌内毒素限值确定 3
2.3.2样品的最大有效稀释倍数确定 3
2.3.3鲎试剂灵敏度复核 3
2.3.4干扰实验 4
2.4结果 4
2.4.1鲎试剂灵敏度复核实验结果 4
2.4.2干扰实验结果 4
2.4.3复方曲肽注射液凝胶法细菌内毒检查结果 5
2.5讨论 6
2.5.1操作注意事项 6
2.5.2鲎试剂对药品生产质控的意义 6
2.5.3内毒素检查在多组分生化药中的应用 7
3 注射剂生产中细菌内毒素控制
3.1细菌内毒素发病机制及特点 8
3.2细菌内毒素与热原 8
3.3去除细菌内毒素的方法 8
3.4注射剂生产过程控制细菌内毒素的措施 9
3.4.1以人员为途径对药品进行质控 9
3.4.2以生产设备为途径对药品进行质控 10
3.4.3以原辅料为途径对药品进行质控 10
3.4.4以环境为途径对药品进行质控 11
结 论 12
参考文献 13
致 谢 15
1 绪
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
/> 3.4注射剂生产过程控制细菌内毒素的措施 9
3.4.1以人员为途径对药品进行质控 9
3.4.2以生产设备为途径对药品进行质控 10
3.4.3以原辅料为途径对药品进行质控 10
3.4.4以环境为途径对药品进行质控 11
结 论 12
参考文献 13
致 谢 15
1 绪论
1.1药品概述
复方曲肽注射液（Compound Troxerutinand Poreine Cerebroside Injection）是由多种神经节苷脂、曲克芦丁及多肽等组成的多组分生化药注射剂。对于注射剂的定义一般都是一样的，从其定义可知，注射剂是无菌溶液。由于注射剂不是从胃肠道吸收而作用于人体的，所以就避免了肝脏的影响，起效也就十分迅速，且作用比较可靠[1]。由于注射剂的使用风险较大，所以注射剂的质量要安全、稳定、可靠，中国药典对注射剂的质量要求是：①无菌：即注射剂内不应有任何活的微生物存在，生产中必须采用适当的方法灭菌，使微生物残存概率小于106。这儿的无菌不是绝对的没有菌，而是应用《中国药典》规定的方法检查不到菌。②无热原：注射剂内不应含热原，特别是用量一次超过5ml以上、供静脉注射或脊椎注射的注射剂，生产中必须采用合适的方法除热源，如酸碱法、活性炭吸附、超滤等，关键的生产步骤辅以内毒素检查，达到控制生产中热源的目的。③澄明度：应符合澄明度检查的要求。④渗透压：应该符合标准的要求。⑤安全性：注射剂首先应对人体是安全的，上市前应做药理、毒理试验，证明该药对机体无毒性和刺激性。⑥pH值：注射剂应具有与血液相等或相近的pH值。⑦稳定性：注射剂必须具有必要的物理稳定性和化学稳定性，以确保产品在贮存期安全、有效[2]。
1.2热原及其检测原理
热原是指能引起恒温动物体温异常升高的物质，包括内生致热原、外致热原及某些体内产物。注射剂质量要求中的无热原是指无外致热原，包括革兰氏阳性细菌：全菌体、代谢产物、细胞壁中的肽聚糖[3]；革兰氏阴性细菌：全菌体、代谢产物、肽聚糖，尤其是细胞壁中所含的内毒素（endotoxin，ET）[4]。热原主要是内毒素，内毒素的主要成分为脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），LPS主要致热及毒性部分为脂质A（Lipid A），其具有高水溶性，高耐热性，难以灭活及清除，有极强的发热效应，是最常见的外致热原，所以通常热原就是指细菌内毒素[5]。
凝胶法鲎试剂原理：鲎试剂内的Enzyme and solidification protein gel，在适宜的条件下，被细菌内毒素激活，鲎试剂产生凝集反应形成凝胶[6]。本研究选用凝胶法测试多组分生化药注射剂细菌内毒素。探讨生产中控制细菌内毒素污染的方法，为加强产品质量控制提供依据[7]。
复方曲肽注射液中的曲克芦丁有抗凝血、防止血栓形成的作用，活性多肽、多种氨基酸等血脑屏障透过率高，能较好的改善中枢神经神经元的代谢，进而改善脑内神经胞缺氧状态，保护缺氧的脑组织[8]。复方曲肽注射液热原检查方法为家兔法，家兔法检查是以终产品为检查对象的静态质量控制模式，存在灵敏度不高，无法精确定量细菌内毒素的量，且操作十分繁琐，检验成本较高等缺点。复方曲肽注射液生产中缺少事前热原污染监控指标，不利于生产过程内毒素的有效控制。以鲎试剂为工具建立的细菌内毒素检查法则为生产过程内毒素控制提供了一个有效的方法[9]。应用操作简单的细菌内毒素检查项取代热原检查成了研究的热点，也是发展的趋势，中华人民共和国药典中也有越来越多的药品使用鲎试剂检查[10]。本研究在新版药典附录凝胶法的基础上，探讨建立复方曲肽注射液细菌内毒素检查法，并以此法与家兔法结果进行比较，实现生产过程中细菌内毒素动态监控。
2 材料与方法
2.1试剂
细菌内毒素检查用水（购自中国药品生物制品检定所，规格5ml/支，批号160107）；凝胶法鲎试剂（科德角国际生物医学科技（北京）有限公司，规格0.1ml/支，批号151127、151216，灵敏度0.125EU/ml）；细菌内毒素工作标准品（上海锐谷生物科技有限公司，规格100EU/支，批号151236）；复方曲肽注射液（吉林步长制药有限公司，批号2160101、20160102、20160103，规格2ml/支）。
2.2仪器
恒温水浴锅购自天津津立仪器设备科技发展有限公司，去热源枪头和移液枪购自北京海天友诚科技有限公司。
2.3方法
2.3
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