核桃分心木中多糖的提取工艺研究(附件)
摘 要目的考察核桃分心木中多糖的提取工艺条件，确定最佳提取工艺条件，提高核桃分心木多糖的产量，从而为核桃分心木多糖进一步开发利用，提供丰富的来源。方法以核桃分心木为原料，采用超声波辅助水溶液提取法，以核桃分心木多糖的得率为指标，分别研究料液比、提取时间、超声功率、提取温度等条件对多糖得率的影响，结合单因素实验，通过正交实验设计，筛选最佳提取工艺。结果核桃分心木中多糖的最佳提取工艺条件为料液比为1:20，提取时间为25min，超声功率为600W，提取温度为70℃。结论核桃分心木多糖的提取工艺经过优化后，得率明显提高，在最优的提取工艺条件下，得率为7.42%。
目 录
1概述 1
1.1 核桃分心木的药理作用 1
1.1.1免疫调节作用 1
1.1.2 抗氧化、消除自由基作用 1
1.1.3抗肿瘤作用 2
1.1.4杀菌、抗病毒作用 2
1.1.5降血糖、降血脂作用 2
1.1.6抗疲劳、防哀老作用 3
1.1.7抗辐射作用 3
1.2核桃分心木的化学成分研究 3
1.2.1 多糖类化合物 3
1.2.2 黄酮类化合物 3
1.2.3 醌类化合物 3
1.2.4 酚酸类化合物 4
1.2.5其他化合物 5
1.3核桃分心木多糖的含量测定 5
1.4核桃分心木多糖的提取工艺研究 6
1.4.1溶剂提取法 6
1.4.2酸、碱提取法 6
1.4.3酶提取法 6
1.4.4超滤法 7
1.4.5超声提取法 7
1.4.6微波提取法 7
2 实验部分 8
2.1 实验材料与仪器 8
2.2核桃分心木总多糖的含量测定方法学 9
2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备 1
2.2.2 样品溶液的制备 10
2.2.3 测定波长的选择 10
2.2.4 标准曲线的制作 10
2.2.5 精密度实验 10
2.2.6 稳定性实验 10 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.2.7 回收率 10
2.3 单因素实验 10
2.3.1 料液比对核桃分心木中总多糖得率的结果 11
2.3.2 提取时间对核桃分心木中总多糖得率的结果 11
2.3.3超声功率对核桃分心木中总多糖得率的结果 12
2.3.4 提取温度对核桃分心木中总多糖得率的结果 12
2.4正交试验结果 13
2.5三批验证 15
2.6总结 15
结 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1概述
分心木为胡桃科植物胡桃果核内的木质隔膜。又名：胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔。木质隔膜呈薄片状，多弯曲、破碎而不整齐。表面淡棕色至棕褐色，或棕黑色，略有光泽。质脆，易折断，气微，味微苦。以块大、质薄、色黄为佳[1]。近年来，人们从核桃分心木中提取各种化合物并对其中黄酮、多糖、鞣质等进行了含量测定。药理研究表明其具有补肾、抗氧化、抑菌等作用。本文主要是研究核桃分心木中多糖的提取工艺，目的是优选出核桃分心木中多糖类物质超声辅助提取的最佳工艺条件。提高核桃分心木中多糖的产率和提取效率，降低核桃分心木中多糖的开发成本，为今后临床更有效深入应用提供参考依据。
1.1 核桃分心木的药理作用
核桃分心木是中医上补气的重要药物，具有益气补中、利尿脱毒等作用，在临床有广泛的应用[2]。而多糖类化合物是其主要的有效成分之一，具有多种生理功效，现就近几年来对核桃分心木中有关多糖类化合物的药理作用研究情况作一概述。
1.1.1免疫调节作用
随着现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展，人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统发生紊乱，会导致人体哀老和多种疾病的发生，此时，细胞表面的糖分子就改变组成和结构进行异常糖基化和异常细胞代谢，通过激活与诱导巨噬细胞、T和B淋巴细胞、网状内皮系统、补体和促进干扰素、白细胞介素的生成来完成免疫双向调节作用。
1.1.2 抗氧化、消除自由基作用
自由基是一类在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子，病理情况下，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足，可以引起氧化应激反应，导致细胞的损伤甚至死亡。国内对中药核桃分心木清除自由基、减轻氧化应激损伤的作用机制十分重视，而且对其有效成分多糖类化合物也进行了研究。韩艳春[3]等用扑热息痛给小鼠灌胃，实验表明核桃分心木总多糖具有良好的抗扑热息痛所致肝组织损伤作用，其效果与核桃分心木总多糖浓度成正比，其抗扑热息痛所致肝损伤的作用机制可能与清除代谢过程中产生的自由基有关。核桃分心木总多糖可预防高血脂症引起的家兔胆固醇升高及减轻动脉粥样硬化斑块面积，作用机制可能与其抗氧化能力有关。核桃分心木总多糖对化学物诱导的小鼠DNA损伤具有保护作用，其作用机制可能是由于其能够清除化学物质与机体细胞发生反应的过程中而产生的自由基 。
杨明珠等[4]以大鼠肝脏缺血一再灌注为模型，观察失血性休克再灌注后血清转氨酶活性，血气指标的动态变化和核桃分心木总多糖对这些指标的影响。研究结果表明:失血性休克再灌注后可导致肝损伤和血气指标的变化，核桃分心木总多糖对缺血再灌损伤具有一定的防护作用，其作用机理可能主要是通过清除缺血再灌注过程中产生的大量自由基实现的。另外，杨明珠等[5]用电子自旋共振波谱仪曾观察到核桃分心木总多糖能减少人鼠心肌缺血再灌注损伤中ROS的产生。
从核桃分心木中提取的异多糖类化合物有抗氧化作用，经预处理的PC12细胞，可增强抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的活性，并可能通过稳定细胞膜结构来抑制谷氨酸盐引起的细胞损伤。
1.1.3抗肿瘤作用
多糖作为一种免疫调节剂，通过增强机体免疫力抑制或杀死肿瘤细胞，不损伤正常细胞，并且无毒。其抗肿瘤作用机理主要与提高宿主免疫力，抑制肿瘤细胞DNA， RNA的合成，改变肿瘤细胞细胞膜的生化特性，减少或防止自由基的产生、抑制细胞分裂导致肿瘤生长受抑制等因素有关。
1.1.4杀菌、抗病毒作用
大量研究表明，有许多多糖对细菌和病毒都有较为明显的抑制或杀死作用，如艾滋病毒、流感病毒、单纯疤疹病毒、巨细胞病毒等等。目前，对多糖及其衍生物的抗病毒活性研究，主要在硫酸多糖、中性多糖和糖复合物。高莉[6]进行实验发现硫酸多糖和某些多糖的硫酸化衍生物无论在体内还是体外，都显示出不同程度的抗病毒活性。多糖的抗病毒机制是通过抑制病毒对细胞的吸附，可能与多糖大分子机械性或化学性竞争病毒与细胞的结合位点有关。
目 录
1概述 1
1.1 核桃分心木的药理作用 1
1.1.1免疫调节作用 1
1.1.2 抗氧化、消除自由基作用 1
1.1.3抗肿瘤作用 2
1.1.4杀菌、抗病毒作用 2
1.1.5降血糖、降血脂作用 2
1.1.6抗疲劳、防哀老作用 3
1.1.7抗辐射作用 3
1.2核桃分心木的化学成分研究 3
1.2.1 多糖类化合物 3
1.2.2 黄酮类化合物 3
1.2.3 醌类化合物 3
1.2.4 酚酸类化合物 4
1.2.5其他化合物 5
1.3核桃分心木多糖的含量测定 5
1.4核桃分心木多糖的提取工艺研究 6
1.4.1溶剂提取法 6
1.4.2酸、碱提取法 6
1.4.3酶提取法 6
1.4.4超滤法 7
1.4.5超声提取法 7
1.4.6微波提取法 7
2 实验部分 8
2.1 实验材料与仪器 8
2.2核桃分心木总多糖的含量测定方法学 9
2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备 1
2.2.2 样品溶液的制备 10
2.2.3 测定波长的选择 10
2.2.4 标准曲线的制作 10
2.2.5 精密度实验 10
2.2.6 稳定性实验 10 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.2.7 回收率 10
2.3 单因素实验 10
2.3.1 料液比对核桃分心木中总多糖得率的结果 11
2.3.2 提取时间对核桃分心木中总多糖得率的结果 11
2.3.3超声功率对核桃分心木中总多糖得率的结果 12
2.3.4 提取温度对核桃分心木中总多糖得率的结果 12
2.4正交试验结果 13
2.5三批验证 15
2.6总结 15
结 论 16
参考文献 17
致 谢 19
1概述
分心木为胡桃科植物胡桃果核内的木质隔膜。又名：胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔。木质隔膜呈薄片状，多弯曲、破碎而不整齐。表面淡棕色至棕褐色，或棕黑色，略有光泽。质脆，易折断，气微，味微苦。以块大、质薄、色黄为佳[1]。近年来，人们从核桃分心木中提取各种化合物并对其中黄酮、多糖、鞣质等进行了含量测定。药理研究表明其具有补肾、抗氧化、抑菌等作用。本文主要是研究核桃分心木中多糖的提取工艺，目的是优选出核桃分心木中多糖类物质超声辅助提取的最佳工艺条件。提高核桃分心木中多糖的产率和提取效率，降低核桃分心木中多糖的开发成本，为今后临床更有效深入应用提供参考依据。
1.1 核桃分心木的药理作用
核桃分心木是中医上补气的重要药物，具有益气补中、利尿脱毒等作用，在临床有广泛的应用[2]。而多糖类化合物是其主要的有效成分之一，具有多种生理功效，现就近几年来对核桃分心木中有关多糖类化合物的药理作用研究情况作一概述。
1.1.1免疫调节作用
随着现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展，人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统发生紊乱，会导致人体哀老和多种疾病的发生，此时，细胞表面的糖分子就改变组成和结构进行异常糖基化和异常细胞代谢，通过激活与诱导巨噬细胞、T和B淋巴细胞、网状内皮系统、补体和促进干扰素、白细胞介素的生成来完成免疫双向调节作用。
1.1.2 抗氧化、消除自由基作用
自由基是一类在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子，病理情况下，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足，可以引起氧化应激反应，导致细胞的损伤甚至死亡。国内对中药核桃分心木清除自由基、减轻氧化应激损伤的作用机制十分重视，而且对其有效成分多糖类化合物也进行了研究。韩艳春[3]等用扑热息痛给小鼠灌胃，实验表明核桃分心木总多糖具有良好的抗扑热息痛所致肝组织损伤作用，其效果与核桃分心木总多糖浓度成正比，其抗扑热息痛所致肝损伤的作用机制可能与清除代谢过程中产生的自由基有关。核桃分心木总多糖可预防高血脂症引起的家兔胆固醇升高及减轻动脉粥样硬化斑块面积，作用机制可能与其抗氧化能力有关。核桃分心木总多糖对化学物诱导的小鼠DNA损伤具有保护作用，其作用机制可能是由于其能够清除化学物质与机体细胞发生反应的过程中而产生的自由基 。
杨明珠等[4]以大鼠肝脏缺血一再灌注为模型，观察失血性休克再灌注后血清转氨酶活性，血气指标的动态变化和核桃分心木总多糖对这些指标的影响。研究结果表明:失血性休克再灌注后可导致肝损伤和血气指标的变化，核桃分心木总多糖对缺血再灌损伤具有一定的防护作用，其作用机理可能主要是通过清除缺血再灌注过程中产生的大量自由基实现的。另外，杨明珠等[5]用电子自旋共振波谱仪曾观察到核桃分心木总多糖能减少人鼠心肌缺血再灌注损伤中ROS的产生。
从核桃分心木中提取的异多糖类化合物有抗氧化作用，经预处理的PC12细胞，可增强抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)的活性，并可能通过稳定细胞膜结构来抑制谷氨酸盐引起的细胞损伤。
1.1.3抗肿瘤作用
多糖作为一种免疫调节剂，通过增强机体免疫力抑制或杀死肿瘤细胞，不损伤正常细胞，并且无毒。其抗肿瘤作用机理主要与提高宿主免疫力，抑制肿瘤细胞DNA， RNA的合成，改变肿瘤细胞细胞膜的生化特性，减少或防止自由基的产生、抑制细胞分裂导致肿瘤生长受抑制等因素有关。
1.1.4杀菌、抗病毒作用
大量研究表明，有许多多糖对细菌和病毒都有较为明显的抑制或杀死作用，如艾滋病毒、流感病毒、单纯疤疹病毒、巨细胞病毒等等。目前，对多糖及其衍生物的抗病毒活性研究，主要在硫酸多糖、中性多糖和糖复合物。高莉[6]进行实验发现硫酸多糖和某些多糖的硫酸化衍生物无论在体内还是体外，都显示出不同程度的抗病毒活性。多糖的抗病毒机制是通过抑制病毒对细胞的吸附，可能与多糖大分子机械性或化学性竞争病毒与细胞的结合位点有关。
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