莲子心提取物的急性利尿作用及机制研究
目录
1 绪论 4
1．1 莲子心研究概况 4
1．2 中药及有效成分的利尿活性研究进展 8
1．3 研究内容 9
2 实验 9
2．1 实验材料 9
2．2 实验方法 10
2．3 结果 11
2．4 讨论 14
结 论 16
致 谢 17
参 考 文 献 18
1 绪论
莲子心为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的成熟种子的绿色幼叶及胚根，主要产于湖北，江浙，福建等地。《本草纲目》记载其具有清心安神，归心肺肾三经，固精止血等功效，药用价值广泛。研究表明莲子心内含有生物碱（甲基莲心碱、莲心碱、异莲心碱等）、叶绿素、黄酮、谷甾醇、挥发油和有机酸等化学成分[1]；莲子心生物碱具有降血压、降血糖血脂、抗心律失常、保护心肌缺血、抑制血小板聚集、强心、等药理作用。本实验莲子心提取物的急性利尿作用并讨论其机制，对莲子心最佳醇提取工艺进行初探，为其临床应用和开发研究提供参考。
1．1 莲子心研究概况
博大精深的中医为我们留下了丰富的药物宝库，从《黄帝内经》,到东汉张仲景《伤寒杂病论》,再到明朝李时珍的《本草纲目》,先贤记载了无数可以入药的植物。莲子心这一天然资源的宝贵在于，它伴随着我国悠久的历史，一直显示着多方面的医药和保健价值。因此高效、安全开发利用莲子心具有非常重要的意义。
1.1.1 化学成分
(1)生物碱类化合物
研究表明莲子心生物碱主要含甲基莲心碱(Neferine)、莲心碱(Liensinine)、异莲心碱(Isoliensinine)属于双苄基异喹 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
啉类，在生物碱中含量最多；莲心季铵碱C18H24O3N＋(Lotusine)属于单苄基异喹啉类，最具有效药理活性；荷叶碱(Nuciferine)、甲基紫堇杷灵(Methylcorypalline)、前荷叶碱(Pronuciferine)、去甲基乌药碱(Demethylcoclaurine)、亚美罂粟碱(armepavine)、牛角花素(Lotusine)等生物碱[2，3]。
(2)黄酮类化合物
研究发现莲子心含有金丝桃甙(Hyperin)、芸香甙(Rutin)、木樨草素(Galuteolin)等黄酮类物质。近年来随着人们对黄酮类物质认识的加深，莲子心黄酮类物质也越来越引起人们的关注。目前关于莲子心黄酮类物质的研究主要在于其提取工艺及检测方法的研究。如杨明等[4]以乙醇为溶剂，研究莲子心黄酮类物质的微波、超声波提取工艺，确定其工艺参数分别是超声波法乙醇浓度为80%，pH值为6.5，辐射时间为40min；微波法的pH值为9，微波功率406W，微波处理时间为20s。
1.1.2 提取方法
(1) 生物碱的提取
生物碱的提取有多种方法，如水提取(WE)法、半仿生提取(SBE)法、水提取醇沉(WE)法、半仿生提取醇沉(SBE)法、冷浸法、离子交换法、连续提取法(热提法)等。水提取(WE)法：精确称取莲子心20g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，旋转蒸发浓缩定溶至100mL。
水提取醇沉(WE)法：精确称取莲子心30g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，将提取液浓缩至80mL，加入乙醇，要使乙醇浓度达到60％，24小时静置，用滤纸过滤，滤液全部回收乙醇，定溶至100mL。
半仿生提取(SBE)法：精确称取莲子心40g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取PH分别为5.0、6.0、8.0时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，旋转蒸发浓缩定溶至100mL。
半仿生醇沉(提取(SBE)法:精确称取莲子心40g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取PH分别为5.0、6.0、8.0时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，将提取液浓缩至80mL，加入乙醇，要使乙醇浓度达到60％，24小时静置，用滤纸过滤，滤液全部回收乙醇，定溶至100mL[5]。
(2) 黄酮类化合物的提取及分析检测
目前，黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、酶辅助提取法、高压脉冲电场技术超声波辅助提取法、微波提取法、超临界萃取法及超声波辅助提取法等。
溶剂提取法是黄酮类化合物提取中较常用的一种提取法。溶剂提取法主要依据各种黄酮类化合物的溶解性、极性不同，从而使其分离出，是黄酮类化合物的一种初级分离法。由于黄酮类化合物中的黄酮苷类物质及双黄铜、查儿酮等少数苷元类能溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，而大多数甙元类物质不溶于水，只溶于乙醚、氯仿等有机溶剂[6]，且用水作为提取溶剂，提取液易变质，杂质浸出多，不利于分离纯化，所以一般不直接采用水为溶剂来直接提取黄酮类物质。目前溶剂提取法 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
多采用水-有机溶剂的混合溶液为提取溶剂，而其中属水-乙醇、水-甲醇为最常使用。如王晓梅等[7]采用正交试验法优化并确定新疆蔷薇红景天黄酮类化合物的最佳提取工艺条件：提取溶剂为90%甲醇，料液比为1:50，提取时间为45min，并重复回流提取3次，得率为13.4%。
超声波常被应用于辅助溶剂提取法，从而提高有效成分的提取率，缩短提取时间。超声波辅助提取法是利用超声波在溶剂体系中作用产生许多空穴，而这些空穴的瞬间生成、生长、崩溃，可产生高达几千个大气压的瞬时压力，形成空化效应[8]。在这种空化效应下，植物细胞受到严重损伤破坏，从而加速有效成分的溶出，提高黄酮的提取率。由于超声波辅助提取法是一种物理提取法，因此超声波辅助提取法具有不破坏被浸提物的活性、萃取时间短、效率高、反应条件温和等优点，目前已被广泛应用于黄酮类化合物的分离提取。
1.1.1 药理作用
（1）降压作用
从莲子心中提取的Lie有短时的降压作用，而莲心季铵碱具有强而持久的降压作用[9]。胡文淑等[10]对甲基莲心碱的降压作用做了较详细的研究。在较大剂量(6 mg/kg)iv 后，对正常血压、醋酸去氧皮质酮(DOCA)盐型高血压和肾性高血压大鼠都有降压作用，在较小剂量(6 mg/kg)iv 时，也能明显降低大鼠血压，甲基莲心碱2种不同剂量降低舒张压的幅度大于收缩压，其降压机理并非通过阻断植物神经节所致，也初步排除了与α、β及Μ受体的关系。猫后肢血管灌流实验证明，该药具有明显的降低血管阻力作用，认为可能是通过扩张外周血管而产生持久的降压作用，提示甲基莲心碱能明显抑制血管平滑肌依内钙的收缩反应。甲基莲心碱对麻醉、肾性、DOCA型高血压大鼠、麻醉猫、清醒正常大鼠、正常家兔都能引起快速、剂量依赖性降压作用，猫椎动脉及脑内注射0.6 mg/kg甲基莲心碱无明显降压作用，表明甲基莲心碱是一种有效的抗高血压药，对血管平滑肌有直接扩张作用。甲基莲心碱对自发性高血压大鼠也有明显的降压作用，ig给药降压作用可维持3 h以上[11]。 Nef能有效降低各种动物的血压，随剂量增加而作用加强，作用时间也延长。椎动脉及脑室内注射Nef的实验结果表明，Nef不是神经节阻断剂。Nef对降低舒张压的作用明显大于收缩压。Nef的降压作用可能是直接扩张血管平滑肌所致。
1 绪论 4
1．1 莲子心研究概况 4
1．2 中药及有效成分的利尿活性研究进展 8
1．3 研究内容 9
2 实验 9
2．1 实验材料 9
2．2 实验方法 10
2．3 结果 11
2．4 讨论 14
结 论 16
致 谢 17
参 考 文 献 18
1 绪论
莲子心为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的成熟种子的绿色幼叶及胚根，主要产于湖北，江浙，福建等地。《本草纲目》记载其具有清心安神，归心肺肾三经，固精止血等功效，药用价值广泛。研究表明莲子心内含有生物碱（甲基莲心碱、莲心碱、异莲心碱等）、叶绿素、黄酮、谷甾醇、挥发油和有机酸等化学成分[1]；莲子心生物碱具有降血压、降血糖血脂、抗心律失常、保护心肌缺血、抑制血小板聚集、强心、等药理作用。本实验莲子心提取物的急性利尿作用并讨论其机制，对莲子心最佳醇提取工艺进行初探，为其临床应用和开发研究提供参考。
1．1 莲子心研究概况
博大精深的中医为我们留下了丰富的药物宝库，从《黄帝内经》,到东汉张仲景《伤寒杂病论》,再到明朝李时珍的《本草纲目》,先贤记载了无数可以入药的植物。莲子心这一天然资源的宝贵在于，它伴随着我国悠久的历史，一直显示着多方面的医药和保健价值。因此高效、安全开发利用莲子心具有非常重要的意义。
1.1.1 化学成分
(1)生物碱类化合物
研究表明莲子心生物碱主要含甲基莲心碱(Neferine)、莲心碱(Liensinine)、异莲心碱(Isoliensinine)属于双苄基异喹 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
啉类，在生物碱中含量最多；莲心季铵碱C18H24O3N＋(Lotusine)属于单苄基异喹啉类，最具有效药理活性；荷叶碱(Nuciferine)、甲基紫堇杷灵(Methylcorypalline)、前荷叶碱(Pronuciferine)、去甲基乌药碱(Demethylcoclaurine)、亚美罂粟碱(armepavine)、牛角花素(Lotusine)等生物碱[2，3]。
(2)黄酮类化合物
研究发现莲子心含有金丝桃甙(Hyperin)、芸香甙(Rutin)、木樨草素(Galuteolin)等黄酮类物质。近年来随着人们对黄酮类物质认识的加深，莲子心黄酮类物质也越来越引起人们的关注。目前关于莲子心黄酮类物质的研究主要在于其提取工艺及检测方法的研究。如杨明等[4]以乙醇为溶剂，研究莲子心黄酮类物质的微波、超声波提取工艺，确定其工艺参数分别是超声波法乙醇浓度为80%，pH值为6.5，辐射时间为40min；微波法的pH值为9，微波功率406W，微波处理时间为20s。
1.1.2 提取方法
(1) 生物碱的提取
生物碱的提取有多种方法，如水提取(WE)法、半仿生提取(SBE)法、水提取醇沉(WE)法、半仿生提取醇沉(SBE)法、冷浸法、离子交换法、连续提取法(热提法)等。水提取(WE)法：精确称取莲子心20g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，旋转蒸发浓缩定溶至100mL。
水提取醇沉(WE)法：精确称取莲子心30g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，将提取液浓缩至80mL，加入乙醇，要使乙醇浓度达到60％，24小时静置，用滤纸过滤，滤液全部回收乙醇，定溶至100mL。
半仿生提取(SBE)法：精确称取莲子心40g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取PH分别为5.0、6.0、8.0时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，旋转蒸发浓缩定溶至100mL。
半仿生醇沉(提取(SBE)法:精确称取莲子心40g，8倍量加水，浸泡30分钟，常压加热冷凝回流，3次提取PH分别为5.0、6.0、8.0时间为2小时、1小时、1小时，用棉花过滤提取液，合并3次提取液，将提取液浓缩至80mL，加入乙醇，要使乙醇浓度达到60％，24小时静置，用滤纸过滤，滤液全部回收乙醇，定溶至100mL[5]。
(2) 黄酮类化合物的提取及分析检测
目前，黄酮类化合物的提取方法主要有溶剂提取法、酶辅助提取法、高压脉冲电场技术超声波辅助提取法、微波提取法、超临界萃取法及超声波辅助提取法等。
溶剂提取法是黄酮类化合物提取中较常用的一种提取法。溶剂提取法主要依据各种黄酮类化合物的溶解性、极性不同，从而使其分离出，是黄酮类化合物的一种初级分离法。由于黄酮类化合物中的黄酮苷类物质及双黄铜、查儿酮等少数苷元类能溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，而大多数甙元类物质不溶于水，只溶于乙醚、氯仿等有机溶剂[6]，且用水作为提取溶剂，提取液易变质，杂质浸出多，不利于分离纯化，所以一般不直接采用水为溶剂来直接提取黄酮类物质。目前溶剂提取法 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
多采用水-有机溶剂的混合溶液为提取溶剂，而其中属水-乙醇、水-甲醇为最常使用。如王晓梅等[7]采用正交试验法优化并确定新疆蔷薇红景天黄酮类化合物的最佳提取工艺条件：提取溶剂为90%甲醇，料液比为1:50，提取时间为45min，并重复回流提取3次，得率为13.4%。
超声波常被应用于辅助溶剂提取法，从而提高有效成分的提取率，缩短提取时间。超声波辅助提取法是利用超声波在溶剂体系中作用产生许多空穴，而这些空穴的瞬间生成、生长、崩溃，可产生高达几千个大气压的瞬时压力，形成空化效应[8]。在这种空化效应下，植物细胞受到严重损伤破坏，从而加速有效成分的溶出，提高黄酮的提取率。由于超声波辅助提取法是一种物理提取法，因此超声波辅助提取法具有不破坏被浸提物的活性、萃取时间短、效率高、反应条件温和等优点，目前已被广泛应用于黄酮类化合物的分离提取。
1.1.1 药理作用
（1）降压作用
从莲子心中提取的Lie有短时的降压作用，而莲心季铵碱具有强而持久的降压作用[9]。胡文淑等[10]对甲基莲心碱的降压作用做了较详细的研究。在较大剂量(6 mg/kg)iv 后，对正常血压、醋酸去氧皮质酮(DOCA)盐型高血压和肾性高血压大鼠都有降压作用，在较小剂量(6 mg/kg)iv 时，也能明显降低大鼠血压，甲基莲心碱2种不同剂量降低舒张压的幅度大于收缩压，其降压机理并非通过阻断植物神经节所致，也初步排除了与α、β及Μ受体的关系。猫后肢血管灌流实验证明，该药具有明显的降低血管阻力作用，认为可能是通过扩张外周血管而产生持久的降压作用，提示甲基莲心碱能明显抑制血管平滑肌依内钙的收缩反应。甲基莲心碱对麻醉、肾性、DOCA型高血压大鼠、麻醉猫、清醒正常大鼠、正常家兔都能引起快速、剂量依赖性降压作用，猫椎动脉及脑内注射0.6 mg/kg甲基莲心碱无明显降压作用，表明甲基莲心碱是一种有效的抗高血压药，对血管平滑肌有直接扩张作用。甲基莲心碱对自发性高血压大鼠也有明显的降压作用，ig给药降压作用可维持3 h以上[11]。 Nef能有效降低各种动物的血压，随剂量增加而作用加强，作用时间也延长。椎动脉及脑室内注射Nef的实验结果表明，Nef不是神经节阻断剂。Nef对降低舒张压的作用明显大于收缩压。Nef的降压作用可能是直接扩张血管平滑肌所致。
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