铁筷子地上部分多糖含量测定(附件)
摘 要铁筷子(Helleborus thibetanus Franch.)为陕西省太白山区著名的“七药”之一。其他名称还有胡子七、黑毛七、小山桃儿七、红毛七、猪毛七、嚏根草等。其经常以根及根茎入药，功效主要有：清热解毒、活血散瘀、消肿止痛。可治疗膀胱炎、尿道炎、疮疖肿毒、跌打损伤、捞伤等症。《贵州民间方药集》:镇静，镇咳，止喘。治跌打损伤，腰酸背痛。《贵阳民间药草》:治风湿骨痛，气滞腹痛。本实验主要对于陕产铁快子地上部分多糖含量进行测定。主要利用水提醇沉法对铁筷子多糖进行提取，再利用紫外分光光度法结合苯酚-硫酸法对铁筷子多糖进行含量测定。利用此提取工艺使铁筷子多糖的提取﹑分离及纯化操作简单且效果高，为合理利用铁筷子提供理论支持，为准确测定多糖含量提供可靠依据；紫外可见分光光度法结合苯酚一硫酸法，操作简单便捷，准确性高，灵敏度好，用此方法来测定陕产铁筷子多糖的含量十分可靠。 目 录
1 引言
2 文献研究
2.1 铁筷子简介 3
2.2 陕产铁筷子发展现状及药理作用 4
2.2.1 强心作用 4
2.2.2 抗肿瘤作用 4
2.2.3 其它作用 5
2.3 中药铁筷子多糖的研究进展 5
2.4 多糖的提取和含量测定方法 5
2.5 前景展望 6
3 实验研究
3.1 仪器和药品 7
3.1.1 仪器 7
3.1.2 药品 7
3.2 方法与结果 7
3.2.1 铁筷子地上部分多糖的提取分离 7
3.2.3 5％苯酚溶液的制备 8
3.2.4 铁筷子多糖溶液的配置 8
3.2.5 葡萄糖标准品测定条件的选择 8
3.2.6 标准曲线的绘制 8
3.2.7 正交试验设计 9
3.2.8 换算因子的计算 10
3.2.9 铁筷子地上部分多糖含量测定 10
3.3 方法学考察 11
3.3.1 精密度试验 11
3.3.2 稳定性试验 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
3.2.5 葡萄糖标准品测定条件的选择 8
3.2.6 标准曲线的绘制 8
3.2.7 正交试验设计 9
3.2.8 换算因子的计算 10
3.2.9 铁筷子地上部分多糖含量测定 10
3.3 方法学考察 11
3.3.1 精密度试验 11
3.3.2 稳定性试验 12
3.3.3 加样回收率试验 12
3.4 结果与讨论 13
结论 14
参考文献 15
致谢 17
1 引言
随着科技的发展，人们对植物多糖的不断提取应用研究中，科学家们认识到到从植物中提取的植物多糖对人们的身体健康具有非常重要的作用。从目前已有的研究中可以看出植物多糖具有调节免疫力、抗肿瘤、降血糖血脂、抗辐射、抗病毒、抗炎、抗疲劳、抗衰老等生物活性功能。目前人们已成功地将从近百种植物中提取出的多糖广泛地应用于保健及医疗事业中。随着植物多糖的广泛应用，铁筷子多糖以他显著的效果也受到了人们的高度重视。铁筷子多糖的作用不仅可以减慢癌细胞在身体内外快速增殖的速度，还可以减少癌细胞克隆集落形成，使体内肿瘤生长速度明显减慢，抑瘤率达53.41%，由于它能很好的加强人体免疫力对外界的抵抗功能所以对癌细胞才有以上提到的如此良好的抑制作用。并且铁筷子多糖可同时明显诱导细胞合成IL2，IL3[12]。
陕西作为铁筷子的产地横跨多个气候带，陕南北亚热带候与关中北部暖温带气候、中温带气候南北气候差异较大。从大体上看，春生季节虽降水量少但气温回升温暖干燥。时常会有风沙天气，夏长季节气候较热雨量较多，偶尔会有伏旱天气，秋收季节气温回降气候凉爽，湿润较大。冬藏季节气温降至最低由于雨雪量减少所以气候变的寒冷且干燥。但全年平均气温比较适宜为13.7℃，从东南向西北逐渐递减。陕西生态环境条件多样，植物资源非常丰富，种类繁多。据全国第六次森林资源连续清查成果数据中得知陕西现有林地670.39万公顷其中天然林467.59万公顷。其中秦巴山区、关山、黄龙山和桥山为主要的森林覆盖区。森林覆盖率达到了32.6%。特别是素有“生物基因库”之称的秦岭巴山，包含野生种子植物珍贵资源为3300多种，约占全国的10%。珍稀植物30种，药用植物800种左右[3]。拥有许多我全国珍惜药用植物。例如：铁筷子、天麻、杜仲、苦杏仁、甘草等。这些药用植物在全国都具有非常重要的地位。
目前铁筷子多以野生为主，且以根茎入药，随着铁筷子不断的开发使用，铁筷子的用量日渐增大,每年的消耗远远超出了野生铁筷子的生长量,使铁筷子资源日趋枯竭。因此，对铁筷子的资源保护及合理利用尤为重要，本课题主要利用水提醇沉法对设备没有特殊要求，生产成本较低等优点，对陕产铁筷子地上部分多糖进行提取。另采用紫外分光光度法结法合苯酚—硫酸测定陕产铁筷子多糖含量[4]。
通过对陕产铁快子地上部分多糖含量的测定，本着对药物的保护及优选优质资源和合理的开发利用，提供科学的依据，以保证其可持续发展。
2 文献研究
2.1 铁筷子简介
铁筷子属毛莨科植物全世界约有25种，主要分布于欧洲东南部和亚洲西部[5]，其中铁筷子为我国特有单种属植物，主要分布在陕西西南部秦岭地区如太白县山区、眉县红河谷山区；甘肃南部如成县、陇南、天水、甘南等地，青海以及四川西部。多年生草本植物，是陕西太白著名的“七药”之一，别名有黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、见春花、钻石风、嚏根草等。是以根及根茎入药，是陕西民间的一种中草药，疗效确切显著。其性凉味苦,有小毒,具有清热解毒、活血散瘀、消肿止痛之功效。为多年生草本植物，生长于海拔1100～3700的山地林或灌木丛中，主要以根状茎及根入药[6]。但中药铁筷子也有以茎叶入药的，具有清热解毒，活血散瘀，消肿止痛的作用。用于膀胱炎，尿道炎，疮疡肿毒，跌打损伤等。铁筷子含有多糖、皂苷、黄酮类、酚类、挥发油等多种成分[7]。
照片如下所示：
图1.1 幼年时的铁筷子
图1.2 铁筷子的叶子
2.2 陕产铁筷子的药理作用
2.2.1 强心作用
铁筷子的强心作用[8]中的成份对猪和猫的试验中，测得其生物活性：猪最低致死量0.516±0.0211 mg/kg (I)，0.213±0.0108 mg/kg (II)，0.234±0.0072 mg/kg(III)，描最低致死量0.102±0.0047 mg/kg(I)，0.079±0.0024 mg/kg(II)，0.096±0.0042 mg/kg(III)，试验表明此类强心类物质具有良好的强心活性[9]。
吕富华[10]等对国产铁筷子苷的强心作用做了研究，测得其生物活性：猫最低致死量79±11.14 μg/kg，鸽最低致死量66±9
1 引言
2 文献研究
2.1 铁筷子简介 3
2.2 陕产铁筷子发展现状及药理作用 4
2.2.1 强心作用 4
2.2.2 抗肿瘤作用 4
2.2.3 其它作用 5
2.3 中药铁筷子多糖的研究进展 5
2.4 多糖的提取和含量测定方法 5
2.5 前景展望 6
3 实验研究
3.1 仪器和药品 7
3.1.1 仪器 7
3.1.2 药品 7
3.2 方法与结果 7
3.2.1 铁筷子地上部分多糖的提取分离 7
3.2.3 5％苯酚溶液的制备 8
3.2.4 铁筷子多糖溶液的配置 8
3.2.5 葡萄糖标准品测定条件的选择 8
3.2.6 标准曲线的绘制 8
3.2.7 正交试验设计 9
3.2.8 换算因子的计算 10
3.2.9 铁筷子地上部分多糖含量测定 10
3.3 方法学考察 11
3.3.1 精密度试验 11
3.3.2 稳定性试验 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
3.2.5 葡萄糖标准品测定条件的选择 8
3.2.6 标准曲线的绘制 8
3.2.7 正交试验设计 9
3.2.8 换算因子的计算 10
3.2.9 铁筷子地上部分多糖含量测定 10
3.3 方法学考察 11
3.3.1 精密度试验 11
3.3.2 稳定性试验 12
3.3.3 加样回收率试验 12
3.4 结果与讨论 13
结论 14
参考文献 15
致谢 17
1 引言
随着科技的发展，人们对植物多糖的不断提取应用研究中，科学家们认识到到从植物中提取的植物多糖对人们的身体健康具有非常重要的作用。从目前已有的研究中可以看出植物多糖具有调节免疫力、抗肿瘤、降血糖血脂、抗辐射、抗病毒、抗炎、抗疲劳、抗衰老等生物活性功能。目前人们已成功地将从近百种植物中提取出的多糖广泛地应用于保健及医疗事业中。随着植物多糖的广泛应用，铁筷子多糖以他显著的效果也受到了人们的高度重视。铁筷子多糖的作用不仅可以减慢癌细胞在身体内外快速增殖的速度，还可以减少癌细胞克隆集落形成，使体内肿瘤生长速度明显减慢，抑瘤率达53.41%，由于它能很好的加强人体免疫力对外界的抵抗功能所以对癌细胞才有以上提到的如此良好的抑制作用。并且铁筷子多糖可同时明显诱导细胞合成IL2，IL3[12]。
陕西作为铁筷子的产地横跨多个气候带，陕南北亚热带候与关中北部暖温带气候、中温带气候南北气候差异较大。从大体上看，春生季节虽降水量少但气温回升温暖干燥。时常会有风沙天气，夏长季节气候较热雨量较多，偶尔会有伏旱天气，秋收季节气温回降气候凉爽，湿润较大。冬藏季节气温降至最低由于雨雪量减少所以气候变的寒冷且干燥。但全年平均气温比较适宜为13.7℃，从东南向西北逐渐递减。陕西生态环境条件多样，植物资源非常丰富，种类繁多。据全国第六次森林资源连续清查成果数据中得知陕西现有林地670.39万公顷其中天然林467.59万公顷。其中秦巴山区、关山、黄龙山和桥山为主要的森林覆盖区。森林覆盖率达到了32.6%。特别是素有“生物基因库”之称的秦岭巴山，包含野生种子植物珍贵资源为3300多种，约占全国的10%。珍稀植物30种，药用植物800种左右[3]。拥有许多我全国珍惜药用植物。例如：铁筷子、天麻、杜仲、苦杏仁、甘草等。这些药用植物在全国都具有非常重要的地位。
目前铁筷子多以野生为主，且以根茎入药，随着铁筷子不断的开发使用，铁筷子的用量日渐增大,每年的消耗远远超出了野生铁筷子的生长量,使铁筷子资源日趋枯竭。因此，对铁筷子的资源保护及合理利用尤为重要，本课题主要利用水提醇沉法对设备没有特殊要求，生产成本较低等优点，对陕产铁筷子地上部分多糖进行提取。另采用紫外分光光度法结法合苯酚—硫酸测定陕产铁筷子多糖含量[4]。
通过对陕产铁快子地上部分多糖含量的测定，本着对药物的保护及优选优质资源和合理的开发利用，提供科学的依据，以保证其可持续发展。
2 文献研究
2.1 铁筷子简介
铁筷子属毛莨科植物全世界约有25种，主要分布于欧洲东南部和亚洲西部[5]，其中铁筷子为我国特有单种属植物，主要分布在陕西西南部秦岭地区如太白县山区、眉县红河谷山区；甘肃南部如成县、陇南、天水、甘南等地，青海以及四川西部。多年生草本植物，是陕西太白著名的“七药”之一，别名有黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、见春花、钻石风、嚏根草等。是以根及根茎入药，是陕西民间的一种中草药，疗效确切显著。其性凉味苦,有小毒,具有清热解毒、活血散瘀、消肿止痛之功效。为多年生草本植物，生长于海拔1100～3700的山地林或灌木丛中，主要以根状茎及根入药[6]。但中药铁筷子也有以茎叶入药的，具有清热解毒，活血散瘀，消肿止痛的作用。用于膀胱炎，尿道炎，疮疡肿毒，跌打损伤等。铁筷子含有多糖、皂苷、黄酮类、酚类、挥发油等多种成分[7]。
照片如下所示：
图1.1 幼年时的铁筷子
图1.2 铁筷子的叶子
2.2 陕产铁筷子的药理作用
2.2.1 强心作用
铁筷子的强心作用[8]中的成份对猪和猫的试验中，测得其生物活性：猪最低致死量0.516±0.0211 mg/kg (I)，0.213±0.0108 mg/kg (II)，0.234±0.0072 mg/kg(III)，描最低致死量0.102±0.0047 mg/kg(I)，0.079±0.0024 mg/kg(II)，0.096±0.0042 mg/kg(III)，试验表明此类强心类物质具有良好的强心活性[9]。
吕富华[10]等对国产铁筷子苷的强心作用做了研究，测得其生物活性：猫最低致死量79±11.14 μg/kg，鸽最低致死量66±9
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