丹参中隐丹参酮提取工艺研究(附件)
摘 要对丹参中隐丹参酮的提取工艺进行优化研究，为进一步高效合理地利用丹参资源提供依据。丹参提取工艺中采用醇提来提取丹参脂溶性的丹参酮类和水溶性的酚酸类成分同时用单因素试验考察醇提对水溶性成分的影响，在此基础上设计正交实验建立L9(34)表，最终得到7.0 g隐丹参酮粉末，L9(34)正交试验设计筛选出最佳提取条件A2B1C3，乙醇浓度为80%；提取次数为3次结果发现最佳提取工艺为加乙醇量7倍回流时间2h。以此为含测方法优选出的提取总黄酮最佳工艺，该工艺提取率高，稳定。
目 录
1 绪论 1
1.1研究背景 1
1.2化学成分研究 1
1.2.1脂溶性的酚酸类化合物 1
1.3丹参的功效及应用 2
1.4药理作用研究 3
1.4.1对心肌的保护作用 3
1.4.2 抗动脉粥样硬化 3
1.4.3 促进组织修复和再生 4
1.4.4 保肝作用 4
1.4.7抗肿瘤作用 4
1.4.9抗氧化作用 5
1.4.10对中枢神经系统的作用 5
1.4.11性激素样作用 5
1.5临床应用 5
1.5.1治疗冠心病 5
1.5.2治疗血栓闭塞性脉管炎 6
1.5.3治疗晚期血吸虫病肝脾肿大 6
1.5.4治疗冠心病 6
2实验部分 7
2.1实验仪器及试剂 7
2.2药材的处理 7
2.3实验方法 7
2.3.1隐丹参酮含量测定 7
表2.1固定相测定 7
2.3.2供试品的制备 7
2.3.8加样回收率试验 10
2.3.10含量测定 10
2.4.1溶剂倍数 11
2.4.2提取次数 11
2.4.3提取时间 12
2.5正交实验 12
结 论 15
参考文献 16
致 谢 18
1 绪论
1.1研究背景
丹参资源状况、产地迁移在 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
我国应用历史悠久。在历代王朝对其真正生产领域的描述上有许多不同之处。按郭宝林[1]考证，《名医别录》述：“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带)；《图经本草》：“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北，河东随州皆有之”《本草品汇精 要》:“道地随州”现代研究表明，丹参分布在湖南、四川、山东、陕西。
1997年复方丹参滴丸成为第一个向美国FDA以治疗药身份申报的品种，意味着丹参将成为首例用国际标准进行评价的传统中药。此后丹参的研究又形成了一个新的热潮。本文就丹参各方面的研究概况进行综述。
丹参生于山坡、草地、林下、溪旁等外主要分布于温热带地区，如地中海和中西亚地区等。野生丹参主要生长于山坡、草丛、林下、溪旁等阳光充足的地方，且生长海拔跨度较大，从1000m以下的低山、丘陵和平原地带到 2000 m ～3500 m的高山均有分布。丹参喜温暖和湿润环境，适宜砂质土壤，过旱或过黏的土壤都不利其生长。丹参抗寒力较强，据调查茎叶能经受短期低12种质资源正品丹参来源于唇形科鼠尾草属植物丹参的干燥根及根茎，但许多同属植物的根也被用作丹参入药。本次实验药材购自陕西商洛，经西安交通大学医学院药学系郭增军副教授鉴定为唇形科植物丹参的干燥根及根茎丹参酮参酮(批号 8529903)对照品(购自中国药品生物制品检定所)；硅胶G 、柱层析硅胶(青岛海洋化工厂)。提取用乙醇为工业乙醇；高效液相用甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；蒸馏水自制。
本课题主要是对丹参的性状、来源、含有的化学成分及药理作用和现代研究做综述。在此基础上，通过L9(34)正交试验设计，以HPLC法测定隐丹参酮的含量为评价指标，考察溶剂倍数、提取时间和提取次数对隐丹参酮成分提取效率的影响，优选出隐丹参酮成分的最佳提取工艺条件并进行优化、验证。为中药金银花的质量标准提供依据，对其开发利用和安全监测打下基础。
1.2化学成分研究
1.2.1脂溶性的酚酸类化合物
脂溶性成分丹参酮类化合物在丹参中含量较高,生理活性较强，是丹参主要的有效成分之一，主要有丹参酮、丹参酮、隐丹参酮、异丹参酮、异丹参酮、异隐丹参酮、丹参螺旋内醋、新隐丹参酮等汇。根据我国药典规定，丹参以丹参酮含量为质量评价标准，含量大于者为合格品。丹参酮化学结构式见图一，具有抗肿瘤、抗氧化、抗凝血及抗血栓等作用，是治疗冠心病的主要有效成分之一，制成丹参酮磺酸钠后，可增加其水溶性以提高药理活性。从丹参中分离得到的丹参酮及丹参酮对体外培养的人体肿瘤细胞有显著的细胞毒性（隐丹参酮，化学结构式见图一，其抗菌活性比小聚碱强数倍，常作为抗菌消炎类丹参制剂的质量控制指标成分。
1.2.2水溶性的酚酸类化合物
酚性酸化合物有：丹参酸A、B、C，丹参酸A又称丹参素，其结构为D(+)β(34二羟基苯基)乳酸，丹参酸B是由3分子的丹参素和1分子的咖啡酸缩合形成的，就是丹参酚酸B；丹参酸C是2分子丹参素的缩合物；酸 A、B、C丹参水溶性成分丹参酚酸A、B、C迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸单甲酯紫草酸二甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸B，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。还含黄芩甙，异欧前胡内酯，熊果酸，β谷甾醇，胡萝卜甙，5（3羟丙基）7 甲氧基2（3’甲氧基4’羟苯基)3苯并b呋喃甲醛，替告皂甙元。
1.3丹参的功效及应用
丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎性苦，微寒，归心、肝经，主要功能为祛瘀止痛、活血通经、清心除烦，用于月经不调、经闭通经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、心烦不眠;肝脾肿大、心绞痛等的治疗。随着对丹参研究的逐步深入，以丹参为主药的各种制剂以其良好的治疗效果和较高的安全性，在临床上被广泛应用。目前，对于丹参提取物的脂溶性部分研究中，大多数是以丹参酮Ⅱ A作为质量控制的标准或以丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ A及隐丹参酮等多种脂溶性成分作为含量测定的指标。
现代研究表明，丹参的脂溶性提取物中，以隐丹参酮的抗菌活性强、含量高、毒性小，具有明显的药理活性与较高的临床应用价值。笔者利用正交试验设计法优化提取工艺，并采用高效液相色谱法测定隐丹参酮含量作为检测指标，综合评价，确定了最佳的隐丹参酮提取工艺，为隐丹参酮的进一步研究提供参考，也为丹参的研究提供新的思路。
1.4药理作用研究
1.4.1对心肌的保护作用
减少心肌梗死面积、左冠状动脉前降支结扎心肌梗死模型，静脉注射1ds。结果梗死面积狭窄，疗效明显。冠脉给药后心肌梗死面积明显减少，且有潘生丁的作用。降低心肌耗氧量，降低心肌耗氧量有利于缺血性冠心病的治疗。冠状动脉血流阻断后，对照组生理盐水与舒张压的增加而增加，但的1DS组明显下降。提示通过降低心肌张力和体积可以降低心肌耗氧量[6]。
丹参不仅可以降低心肌梗死面积，降低心肌耗氧量，而且阻断L型钙通道。丹参酮对心肌的间接效应主要表现在扩张血管的方面，改善微循环，抑制血小板聚集和抗血栓形成。对于血压和血管：丹参汤，丹参注射液，复方丹参注射液，如静脉注射兔或狗，都有不同程度的血压。复方丹参滴丸不仅舒张冠状动脉,增加心肌供氧,而且不加快心率,具有双重作用。该降压效应可被阿托品阻断,但不影响肾上腺素或异丙肾上腺素的效果。丹参酮磺酸钠对高血压有轻微的影响。丹参可显著增加肾动脉血流。丹参饮对兔耳血管和血管的影响显著增加[7]。为了提高丹参外周和内脏微循环的改善是原丹参扮演重要角色在血液循环、提高血浆蛋白、纤维、红细胞变形有明显的抑制作用，可降低血液高凝、高粘度、改善微循环、减少脂质沉积及血栓形成。抗血栓：丹参素能明显抑制血栓形成，丹参中丹参素具有明显的溶栓和抗凝抗血小板聚集和促进纤溶活性，提高cAMP水平，血小板血栓素和前列腺素抑制缩血管物质的合成。改善微循环：外周和内脏微循环丹参有效成分对血液循环的改善，血液和血浆复方丹参、丹参酸可以活血化瘀、调节血脂，抑制血小板聚集；三七总皂苷能明显缩短凝血时间[8]。
目 录
1 绪论 1
1.1研究背景 1
1.2化学成分研究 1
1.2.1脂溶性的酚酸类化合物 1
1.3丹参的功效及应用 2
1.4药理作用研究 3
1.4.1对心肌的保护作用 3
1.4.2 抗动脉粥样硬化 3
1.4.3 促进组织修复和再生 4
1.4.4 保肝作用 4
1.4.7抗肿瘤作用 4
1.4.9抗氧化作用 5
1.4.10对中枢神经系统的作用 5
1.4.11性激素样作用 5
1.5临床应用 5
1.5.1治疗冠心病 5
1.5.2治疗血栓闭塞性脉管炎 6
1.5.3治疗晚期血吸虫病肝脾肿大 6
1.5.4治疗冠心病 6
2实验部分 7
2.1实验仪器及试剂 7
2.2药材的处理 7
2.3实验方法 7
2.3.1隐丹参酮含量测定 7
表2.1固定相测定 7
2.3.2供试品的制备 7
2.3.8加样回收率试验 10
2.3.10含量测定 10
2.4.1溶剂倍数 11
2.4.2提取次数 11
2.4.3提取时间 12
2.5正交实验 12
结 论 15
参考文献 16
致 谢 18
1 绪论
1.1研究背景
丹参资源状况、产地迁移在 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
我国应用历史悠久。在历代王朝对其真正生产领域的描述上有许多不同之处。按郭宝林[1]考证，《名医别录》述：“生桐柏山谷及太山”(今河南和湖北交界及山东泰山一带)；《图经本草》：“今陕西河东州郡及随州皆有之”(今山西、湖北，河东随州皆有之”《本草品汇精 要》:“道地随州”现代研究表明，丹参分布在湖南、四川、山东、陕西。
1997年复方丹参滴丸成为第一个向美国FDA以治疗药身份申报的品种，意味着丹参将成为首例用国际标准进行评价的传统中药。此后丹参的研究又形成了一个新的热潮。本文就丹参各方面的研究概况进行综述。
丹参生于山坡、草地、林下、溪旁等外主要分布于温热带地区，如地中海和中西亚地区等。野生丹参主要生长于山坡、草丛、林下、溪旁等阳光充足的地方，且生长海拔跨度较大，从1000m以下的低山、丘陵和平原地带到 2000 m ～3500 m的高山均有分布。丹参喜温暖和湿润环境，适宜砂质土壤，过旱或过黏的土壤都不利其生长。丹参抗寒力较强，据调查茎叶能经受短期低12种质资源正品丹参来源于唇形科鼠尾草属植物丹参的干燥根及根茎，但许多同属植物的根也被用作丹参入药。本次实验药材购自陕西商洛，经西安交通大学医学院药学系郭增军副教授鉴定为唇形科植物丹参的干燥根及根茎丹参酮参酮(批号 8529903)对照品(购自中国药品生物制品检定所)；硅胶G 、柱层析硅胶(青岛海洋化工厂)。提取用乙醇为工业乙醇；高效液相用甲醇为色谱纯；其它试剂均为分析纯；蒸馏水自制。
本课题主要是对丹参的性状、来源、含有的化学成分及药理作用和现代研究做综述。在此基础上，通过L9(34)正交试验设计，以HPLC法测定隐丹参酮的含量为评价指标，考察溶剂倍数、提取时间和提取次数对隐丹参酮成分提取效率的影响，优选出隐丹参酮成分的最佳提取工艺条件并进行优化、验证。为中药金银花的质量标准提供依据，对其开发利用和安全监测打下基础。
1.2化学成分研究
1.2.1脂溶性的酚酸类化合物
脂溶性成分丹参酮类化合物在丹参中含量较高,生理活性较强，是丹参主要的有效成分之一，主要有丹参酮、丹参酮、隐丹参酮、异丹参酮、异丹参酮、异隐丹参酮、丹参螺旋内醋、新隐丹参酮等汇。根据我国药典规定，丹参以丹参酮含量为质量评价标准，含量大于者为合格品。丹参酮化学结构式见图一，具有抗肿瘤、抗氧化、抗凝血及抗血栓等作用，是治疗冠心病的主要有效成分之一，制成丹参酮磺酸钠后，可增加其水溶性以提高药理活性。从丹参中分离得到的丹参酮及丹参酮对体外培养的人体肿瘤细胞有显著的细胞毒性（隐丹参酮，化学结构式见图一，其抗菌活性比小聚碱强数倍，常作为抗菌消炎类丹参制剂的质量控制指标成分。
1.2.2水溶性的酚酸类化合物
酚性酸化合物有：丹参酸A、B、C，丹参酸A又称丹参素，其结构为D(+)β(34二羟基苯基)乳酸，丹参酸B是由3分子的丹参素和1分子的咖啡酸缩合形成的，就是丹参酚酸B；丹参酸C是2分子丹参素的缩合物；酸 A、B、C丹参水溶性成分丹参酚酸A、B、C迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸单甲酯紫草酸二甲酯，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸B，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。还含黄芩甙，异欧前胡内酯，熊果酸，β谷甾醇，胡萝卜甙，5（3羟丙基）7 甲氧基2（3’甲氧基4’羟苯基)3苯并b呋喃甲醛，替告皂甙元。
1.3丹参的功效及应用
丹参为唇形科植物丹参的干燥根及根茎性苦，微寒，归心、肝经，主要功能为祛瘀止痛、活血通经、清心除烦，用于月经不调、经闭通经、癥瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、心烦不眠;肝脾肿大、心绞痛等的治疗。随着对丹参研究的逐步深入，以丹参为主药的各种制剂以其良好的治疗效果和较高的安全性，在临床上被广泛应用。目前，对于丹参提取物的脂溶性部分研究中，大多数是以丹参酮Ⅱ A作为质量控制的标准或以丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ A及隐丹参酮等多种脂溶性成分作为含量测定的指标。
现代研究表明，丹参的脂溶性提取物中，以隐丹参酮的抗菌活性强、含量高、毒性小，具有明显的药理活性与较高的临床应用价值。笔者利用正交试验设计法优化提取工艺，并采用高效液相色谱法测定隐丹参酮含量作为检测指标，综合评价，确定了最佳的隐丹参酮提取工艺，为隐丹参酮的进一步研究提供参考，也为丹参的研究提供新的思路。
1.4药理作用研究
1.4.1对心肌的保护作用
减少心肌梗死面积、左冠状动脉前降支结扎心肌梗死模型，静脉注射1ds。结果梗死面积狭窄，疗效明显。冠脉给药后心肌梗死面积明显减少，且有潘生丁的作用。降低心肌耗氧量，降低心肌耗氧量有利于缺血性冠心病的治疗。冠状动脉血流阻断后，对照组生理盐水与舒张压的增加而增加，但的1DS组明显下降。提示通过降低心肌张力和体积可以降低心肌耗氧量[6]。
丹参不仅可以降低心肌梗死面积，降低心肌耗氧量，而且阻断L型钙通道。丹参酮对心肌的间接效应主要表现在扩张血管的方面，改善微循环，抑制血小板聚集和抗血栓形成。对于血压和血管：丹参汤，丹参注射液，复方丹参注射液，如静脉注射兔或狗，都有不同程度的血压。复方丹参滴丸不仅舒张冠状动脉,增加心肌供氧,而且不加快心率,具有双重作用。该降压效应可被阿托品阻断,但不影响肾上腺素或异丙肾上腺素的效果。丹参酮磺酸钠对高血压有轻微的影响。丹参可显著增加肾动脉血流。丹参饮对兔耳血管和血管的影响显著增加[7]。为了提高丹参外周和内脏微循环的改善是原丹参扮演重要角色在血液循环、提高血浆蛋白、纤维、红细胞变形有明显的抑制作用，可降低血液高凝、高粘度、改善微循环、减少脂质沉积及血栓形成。抗血栓：丹参素能明显抑制血栓形成，丹参中丹参素具有明显的溶栓和抗凝抗血小板聚集和促进纤溶活性，提高cAMP水平，血小板血栓素和前列腺素抑制缩血管物质的合成。改善微循环：外周和内脏微循环丹参有效成分对血液循环的改善，血液和血浆复方丹参、丹参酸可以活血化瘀、调节血脂，抑制血小板聚集；三七总皂苷能明显缩短凝血时间[8]。
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