灰树花子实体多糖含量测定方法研究
摘 要灰树花又称之为舞蘑，其子实体中富含氨基酸、多糖以及微量元素等多种有效成分。其中灰树花多糖是主要的生物活性物质。作为一种生物反应调节剂，灰树花多糖具有增强免疫力、抑制肿瘤、抗HIV病毒、稳定血压、降低血糖、改善脂肪代谢等广泛的生理活性。本实验，采用紫外分光光度法测定灰树花子实体中多糖的含量。用超声波辅助热水浴提取灰树花子实体中的多糖，以D-无水葡萄糖为标准品，在490nm处测定其中多糖的含量。测得灰树花子实体中多糖的平均含量为53.14%，平均回收率为100.06%。该实验方法结果准确，操作便捷，具有良好的重复性和稳定性，适合灰树花子实体药材中多糖含量的测定及方法学考察，主要弥补一些实验的空白，为实现灰树花子实体多糖含量指标考察及灰树花的深度开发及研究提供依据，为其以后在工业上的应用提供一定的参考，从而发挥灰树花子实体中多糖的最大功效。
目 录
1 文献综述 1
1.1灰树花的概况 1
1.2灰树花子实体中有效成分的研究 1
1.2.1含糖类的成分 1
1.2.2蛋白质 2
1.2.3其他 2
1.3灰树花多糖的药理作用 2
1.3.1免疫调节作用 2
1.3.2降血糖作用 3
1.3.3抗肿瘤活性 4
1.3.4抗病毒 4
1.3.5其他活性研究 4
1.3.6毒性、安全性 5
1.4多糖的提取工艺 5
1.5多糖含量测定方法研究 6
2 实验部分 7
2.1试药及仪器 7
2.1.1 试药 7
2.1.2 仪器 7
2.2 实验方法 7
2.2.1标准品溶液的配制 7
2.2.2供试品及实验试剂的制备 7
2.2.3最大吸收波长的测定 8
2.2.4标准曲线的制备 8
2.2.5方法学考察 8
2.3 实验结果 9
2.3.1无水葡萄糖标准品溶液光谱扫描结果 9
2.3.2无水葡萄糖标准曲线 9
2.3.3精密度实验 10< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
br /> 2.3.4稳定性试验 11
2.3.5重复性试验 11
2.3.6回收率 12
2.3.7供试品含量测定 12
2.4分析讨论 13
结 论 14
参考文献 15
致 谢 20
1 文献综述
1.1灰树花的概况
灰树 花(Grifola frondosa)为担子 菌层 菌，是一种肉质子实体 真菌，属于多孔 菌属，又名贝 叶多 孔菌(polyporus frondosus)、板栗口蘑、佛 菌、蒿和平菇等以及松口蘑松茸(maitake)等，其子实 体中富含氨基酸(AA)、酵素、碳水化合物以及微 量元素等多 种营养成分。日本学 者通过对灰 树花发 酵液 成分的研究发 现：其中的灰 树花多糖是 主要的生 物活性物质[1]。作为一种生 物反应调 节剂，灰树花多 糖具有增 强免疫力、抑 制癌细胞、抗HIV、稳压降糖、改 善脂质代 谢等广泛 的生理活性。
1.2灰树花子实体中有效成分的研究
灰树花也称之为栗蘑，常于夏秋之 时自生于栗 树附近，是一 种药、食兼 用的菌种。在亚 洲范围内灰树花是一种颇 受人们喜 爱的蘑 菇，这不仅 是因为它可烹 饪及药用而且其中富含大量的蛋白 质、碳水化 合物、纤维素、维 生素、多种微 量元素和生物素，食用该菌有利于人体 健康，并且美味可 口。
随着越来越多人的深入研究，发现在本药材中的有效物质主要包括糖类、蛋白质、脂类等，其中主要的药理活性物质是其子实体中多糖[2,3]。其中糖类主 要是杂 多糖和单 糖。多糖中成分有葡萄 糖、甘露糖、半 乳糖、木糖等，其中主要的是D葡 萄糖，主要含有 D组分（灰树花多糖阻分素）、MD组分（灰树花蛋 白质多糖复 合体）、M Z组分、具14支链的葡聚糖组分及S X 组分。
1.2.1含糖类的成分
灰树花子 实体多糖是一种真菌多糖，其具明显药理活性的成分是由β1,6及β1,3糖苷键组成的。它们具有很明 显的药理活 性，自20世 纪后期以来，国 内外的许 多学者一直在研究灰树花的发展，对其中多糖进 行了大量研 究，并从灰树花子 实体和菌 丝体中提取了数十种具有活性的多 糖。早期的Hishida T和Nanba[4,5]等成功地从灰树花药材中提取纯化得到灰树花多糖阻分素和蛋白糖复合体。其阻分素（D组 分）是一种相对分 子量约为140000且由β1,3支 链的β1,6葡 聚糖和 β1,6支 链的β1,3葡 聚糖组成的蛋 白聚糖是一种酸不 溶、碱溶性的热 水提取物。Grifolan(GRN)是由GRNLE为代表的一个组 分系列，整个组分能在携带肿瘤的ICR小鼠上显示出出抗肿瘤效果[6]。
灰树花中抗肿 瘤糖肽（GFPS1b）组 分是从灰树花菌 丝体中提 取而来，通过结 构分析表 明该组分的结 构与D组 分不同，其主 链含有α（1→4） 和α（1→3）糖 苷键，但其在 MCF7 细胞上也表 现出抑制作用[7]。同时，还从菌 丝中分离出 了三 种EXGFFr有效组分，其中3号组分的含量比重最大，其含量可达总 量的 71.1％。
灰树花中的一些多 糖也是不 溶于水的，当经过特殊的化学修饰时，这些多糖就会有一些显著的化学活 性。Nie[8]等用硫酸化对一些不溶于水的灰树花多糖进行处理，以改善并提高其水溶性，结果获得了含硫元素16.4％相对分子量为28000的SGAPP的化学基团，这种化学基团能够在体外抑制SGC7901细胞的分裂增长，抑制癌细胞生长并增强荷瘤小鼠腹膜巨噬细胞的生理活性。
1.2.2蛋白质
据报道，Kodama[9]和郭予斌[10]等人分离出了一种相对小分子量的新型无糖蛋白，而且已被证明能可有效刺激巨 噬细胞、鳞状上皮细胞和树 突细胞活性，也能抑制荷瘤小鼠的癌细胞分裂增殖。此外，研究表明GFAHP也是一种蛋白质，并具有体外抗1型单纯疱疹病毒的作用[11]。
1.2.3其他
Zhang[12]等人还从其子实体中提取出了一类组合脂肪酸和麦甾醇、麦甾醇衍生物及一种特殊的甘油酯。其中组合脂肪 酸包 括油酸、亚油酸还有棕榈 酸等。在文献中[13]，据报道已经有人从灰树花中纯化得到以下的3种化合物：5α,6β过氧麦甾8,22E二烯3β醇，麦甾醇和 3β,5α,8β三羟基麦甾醇，其中5α,6β过氧麦甾8,22E二烯3β醇对MGF3的增殖有明显的抑制作用，并具有明显的促凋亡能力，而麦甾醇和3β,5α,8β三羟基麦甾醇易于抑制其增殖作用。
1.3灰树花多糖的药理作用
目 录
1 文献综述 1
1.1灰树花的概况 1
1.2灰树花子实体中有效成分的研究 1
1.2.1含糖类的成分 1
1.2.2蛋白质 2
1.2.3其他 2
1.3灰树花多糖的药理作用 2
1.3.1免疫调节作用 2
1.3.2降血糖作用 3
1.3.3抗肿瘤活性 4
1.3.4抗病毒 4
1.3.5其他活性研究 4
1.3.6毒性、安全性 5
1.4多糖的提取工艺 5
1.5多糖含量测定方法研究 6
2 实验部分 7
2.1试药及仪器 7
2.1.1 试药 7
2.1.2 仪器 7
2.2 实验方法 7
2.2.1标准品溶液的配制 7
2.2.2供试品及实验试剂的制备 7
2.2.3最大吸收波长的测定 8
2.2.4标准曲线的制备 8
2.2.5方法学考察 8
2.3 实验结果 9
2.3.1无水葡萄糖标准品溶液光谱扫描结果 9
2.3.2无水葡萄糖标准曲线 9
2.3.3精密度实验 10< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
br /> 2.3.4稳定性试验 11
2.3.5重复性试验 11
2.3.6回收率 12
2.3.7供试品含量测定 12
2.4分析讨论 13
结 论 14
参考文献 15
致 谢 20
1 文献综述
1.1灰树花的概况
灰树 花(Grifola frondosa)为担子 菌层 菌，是一种肉质子实体 真菌，属于多孔 菌属，又名贝 叶多 孔菌(polyporus frondosus)、板栗口蘑、佛 菌、蒿和平菇等以及松口蘑松茸(maitake)等，其子实 体中富含氨基酸(AA)、酵素、碳水化合物以及微 量元素等多 种营养成分。日本学 者通过对灰 树花发 酵液 成分的研究发 现：其中的灰 树花多糖是 主要的生 物活性物质[1]。作为一种生 物反应调 节剂，灰树花多 糖具有增 强免疫力、抑 制癌细胞、抗HIV、稳压降糖、改 善脂质代 谢等广泛 的生理活性。
1.2灰树花子实体中有效成分的研究
灰树花也称之为栗蘑，常于夏秋之 时自生于栗 树附近，是一 种药、食兼 用的菌种。在亚 洲范围内灰树花是一种颇 受人们喜 爱的蘑 菇，这不仅 是因为它可烹 饪及药用而且其中富含大量的蛋白 质、碳水化 合物、纤维素、维 生素、多种微 量元素和生物素，食用该菌有利于人体 健康，并且美味可 口。
随着越来越多人的深入研究，发现在本药材中的有效物质主要包括糖类、蛋白质、脂类等，其中主要的药理活性物质是其子实体中多糖[2,3]。其中糖类主 要是杂 多糖和单 糖。多糖中成分有葡萄 糖、甘露糖、半 乳糖、木糖等，其中主要的是D葡 萄糖，主要含有 D组分（灰树花多糖阻分素）、MD组分（灰树花蛋 白质多糖复 合体）、M Z组分、具14支链的葡聚糖组分及S X 组分。
1.2.1含糖类的成分
灰树花子 实体多糖是一种真菌多糖，其具明显药理活性的成分是由β1,6及β1,3糖苷键组成的。它们具有很明 显的药理活 性，自20世 纪后期以来，国 内外的许 多学者一直在研究灰树花的发展，对其中多糖进 行了大量研 究，并从灰树花子 实体和菌 丝体中提取了数十种具有活性的多 糖。早期的Hishida T和Nanba[4,5]等成功地从灰树花药材中提取纯化得到灰树花多糖阻分素和蛋白糖复合体。其阻分素（D组 分）是一种相对分 子量约为140000且由β1,3支 链的β1,6葡 聚糖和 β1,6支 链的β1,3葡 聚糖组成的蛋 白聚糖是一种酸不 溶、碱溶性的热 水提取物。Grifolan(GRN)是由GRNLE为代表的一个组 分系列，整个组分能在携带肿瘤的ICR小鼠上显示出出抗肿瘤效果[6]。
灰树花中抗肿 瘤糖肽（GFPS1b）组 分是从灰树花菌 丝体中提 取而来，通过结 构分析表 明该组分的结 构与D组 分不同，其主 链含有α（1→4） 和α（1→3）糖 苷键，但其在 MCF7 细胞上也表 现出抑制作用[7]。同时，还从菌 丝中分离出 了三 种EXGFFr有效组分，其中3号组分的含量比重最大，其含量可达总 量的 71.1％。
灰树花中的一些多 糖也是不 溶于水的，当经过特殊的化学修饰时，这些多糖就会有一些显著的化学活 性。Nie[8]等用硫酸化对一些不溶于水的灰树花多糖进行处理，以改善并提高其水溶性，结果获得了含硫元素16.4％相对分子量为28000的SGAPP的化学基团，这种化学基团能够在体外抑制SGC7901细胞的分裂增长，抑制癌细胞生长并增强荷瘤小鼠腹膜巨噬细胞的生理活性。
1.2.2蛋白质
据报道，Kodama[9]和郭予斌[10]等人分离出了一种相对小分子量的新型无糖蛋白，而且已被证明能可有效刺激巨 噬细胞、鳞状上皮细胞和树 突细胞活性，也能抑制荷瘤小鼠的癌细胞分裂增殖。此外，研究表明GFAHP也是一种蛋白质，并具有体外抗1型单纯疱疹病毒的作用[11]。
1.2.3其他
Zhang[12]等人还从其子实体中提取出了一类组合脂肪酸和麦甾醇、麦甾醇衍生物及一种特殊的甘油酯。其中组合脂肪 酸包 括油酸、亚油酸还有棕榈 酸等。在文献中[13]，据报道已经有人从灰树花中纯化得到以下的3种化合物：5α,6β过氧麦甾8,22E二烯3β醇，麦甾醇和 3β,5α,8β三羟基麦甾醇，其中5α,6β过氧麦甾8,22E二烯3β醇对MGF3的增殖有明显的抑制作用，并具有明显的促凋亡能力，而麦甾醇和3β,5α,8β三羟基麦甾醇易于抑制其增殖作用。
1.3灰树花多糖的药理作用
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