莲子心乙醇提取物利尿活性的研究
目 录
1 绪论 1
1.1 莲子心的研究概况 1
1.1.1 化学成分的研究 1
1.1.2 提取方法 2
1.1.3 药理作用研究进展 4
1.2 中药及有效成分的利尿活性研究进展 7
1.3 研究内容 7
2 实验 7
2.1 材料 8
2.1.1 实验动物 8
2.1.2 药品及试剂 8
2.2 仪器及设备 8
2.3 方法 8
2.3.1 分组及给药 8
2.3.2 尿量的测定 9
2.3.3 尿液中离子浓度、pH及电导率的测定 9
2.3.4 统计学方法 9
2.4 结果 9
2.4.1 尿量和pH值 9
2.4.2 Na+、K+、Cl-和电导率 10
2.5 讨论 11
结 论 13
致 谢 14
参 考 文 献 15
1 绪论
莲子心为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的成熟种子中间绿色胚根，始载于《本草纲目》，具有广泛的药用价值。主产地有湖南、湖北、江西、福建、江苏、浙江等地[1]，是从莲子中剥取晒干制得。莲子心其味清苦，但却具有极好的降压去脂之效。《温病条辨》:“莲心，由心走肾，能使心火下通于肾，又回环上升，能使肾水上潮于心。”故民间常用以泡茶饮，有清心火，止遗精的作用，对心肾不交、阴虚火旺的失眠患者，食之最宜。
本实验主要探究莲子心乙醇、正丁醇提取物对小鼠的利尿作用，通过给药前与给药后的对比，分析其是否 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
具有利尿活性。探究推测其利尿机制，为临床应用和开发研究提供参考。
1.1 莲子心的研究概况
莲子心的主要成分为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱、荷叶碱等生物碱及木犀黄酮苷、金丝桃苷、芸香苷等黄酮类物质[2]。莲子心中还含有水溶性多糖、棕榈酸、β-谷甾醇等化合物以及锌、铜、铁、钙、镁、镍、镉等微量元素[3]。莲子心具有广泛的药理作用。具有降血压、抗心律失常、抑制血小板聚集、抗氧化及清除活性自由基、抗心肌缺血、松弛平滑肌、强心、抗癌、对脑缺血损伤的保护、改善急性肺损伤及肺纤维化、中枢抑制、降血糖等药理作用[2]。其作为我国一种具悠久历史中药，作用早在《本草纲目》就有记载。在对莲子心研究中，莲心生物碱功能被探究得最为明确。
1.1.1 化学成分的研究
(1)生物碱类化合物
莲子心主要含莲心碱等多种生物碱、莲心多糖、木犀草素、芦丁等黄酮类化合物，生物碱为其最主要的活性成分。莲子心生物碱研究开始于19世纪末，后来，国内外学者进一步将莲子心所含生物碱分为非酚性生物碱和酚性生物碱。最初是由日本的富田真雄等人从荷叶中分离出荷叶碱(Nuciferine)、莲碱(Roemenne)及O-去甲荷叶碱(O-Nomuciferine)3个单体成分。赵志远等人也在上世纪60年代分离得莲心碱。潘白川等用化学降解方法推测了其结构。迄今为止，从植物莲中分离出生物碱类化合物已多达20个之多，且均为异喹啉生物碱[4]。现在对莲心生物碱分离及分析主要采用的方法有高效液相色谱法和薄层扫描法。
莲子心含有多种生物碱成分，已确定的有莲心碱C37H42O6N2(Liensinine)、异莲心碱C37H42O6N2(Isoliendinine)、甲基莲心碱C38H44O6N2(Neferine)[5]、莲心季铵碱C18H24O3N+(Lotusine)、荷叶碱C19H21O2N(Nuciferine)、前荷叶碱C19H21O3N (Pronuciferine)[6]、甲基紫堇杷灵C12H17O2N(Methylcorypalline)、莲子碱(nelumbine)、亚美罂粟碱(armepavine)、dl-去甲基衡州乌药碱C16H17O3N (dl-demethylcoclaurine)、鹅掌楸碱C17H9O3N(Liriodenine)。其中，莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱属于双苄基异喹啉类生物碱，莲心季铵碱为单苄基异喹啉类生物碱，该化合物是各单体成分分离提取过程的中间品，也是莲子心中具有药理作用的主要有效部分莲心生物碱，被认为是莲子心中含量较多、且最具广泛药理活性的有效部位[7]。荷叶碱为阿朴啡生物碱，前荷叶碱为原阿朴啡生物碱，甲基紫堇杷灵为简单异喹啉类生物碱，dl-去甲基衡州乌药碱为单苄基异喹啉类生物碱，鹅掌楸碱为氧化阿朴啡生物碱。
(2)黄酮类化合物
早在20世纪60年代，就有报道莲子心含有芸香苷、金丝桃苷、木犀草素等黄酮类物质。近年来随着人们对黄酮类物质认识的加深，莲子心黄酮类物质也越来越引起人们的关注。目前关于莲子心黄酮类物质的研究主要在于其提取工艺及检测方法的研究。如蔡定建等[8]采用碱溶酸析法和微波间歇加热提取法，成功地提取了莲子心中黄酮类物质，且黄酮得率分别为4.135 mg/g和6.266 mg/g。再如杨明等[9]以乙醇为溶剂，研究莲子心黄酮类物质的微波、超声波提取工艺，确定其工艺参数分别是超声波法乙醇浓度为80%，pH值为6.5，辐射时间为40 min；微波法的pH值为9，微波功率406 W，微波处理时间为20 s。此外亦有相关报道出一系列适用于莲子心黄酮物质的检测方法，如张丽珍等[10]研究发现以聚酰胺柱色谱分离，用分光光度法测定莲子心总黄酮含量，可有效排除叶绿素的干扰，是一种简便、准确、灵敏度高的检测方法。
1.1.2 提取方法
(1)生物碱提取方法
生物碱的提取按所采用的溶剂不同可分为水提取法和有机溶剂提取法，其中水提取法包括纯水提取法、酸水提取法、碱水提取法。按提取条件不同分为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法及连续回流提取法等。对于非水溶性生物碱提取，常采用甲醇溶剂冷浸法，即将干燥莲子心碾成粗粉，加适量甲醇浸泡，回收甲醇，残留液用3% 盐酸调pH 2~3，过滤，滤液以乙醚脱脂，浓氨水调pH 9以上，乙醚萃取，自醚层得非水溶性总碱[11]。该法根据莲心碱的性质将其分离出来，但甲醇有毒性，工艺路线较为烦琐，莲心碱提取率低。乙醇冷浸法与甲醇类似，只是甲醇的极性强于乙醇，而乙醇较甲醇更为安全。
溶剂回流提取法：取莲子心10 g，加95%乙醇80 mL，回流提取3次，每次1 h，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，加水溶解，以浓盐酸调节至pH 1~2，过滤。以浓氨水碱化至pH 9~10，氯仿萃取2次，每次50 mL，合并氯仿层，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液浓缩即得[12]。
这些中药利尿活性的研究都是通过动物实验，单次或长期给药，观察小鼠的尿量等观测指标，确定其利尿活性。虽然发现了许多中药材的利尿作用，但是其具体的利尿成分还不明确，利尿机制也不明确，还需要进一步探究。
1.3 研究内容
本实验以生理盐水水负荷小鼠为实验动物，设立呋塞米组(10.0 mg/kg)，氢氯噻嗪组(10.0 mg/kg)，乙醇提取物高、低剂量组(90.6 mg/kg，22.6 mg/kg)，正丁醇提取物高、低剂量组(62.5 mg/kg，15.6 mg/kg)。采用滤纸法测定小鼠尿量，原子吸收分光度计测定小鼠尿液中Na+、K+离子浓度，电位滴定法测定小鼠尿液中Cl-浓度。以小鼠尿量，尿液中离子浓度(Na+、K+、Cl-)、pH、电导率为指标，研究其利尿活性。
1 绪论 1
1.1 莲子心的研究概况 1
1.1.1 化学成分的研究 1
1.1.2 提取方法 2
1.1.3 药理作用研究进展 4
1.2 中药及有效成分的利尿活性研究进展 7
1.3 研究内容 7
2 实验 7
2.1 材料 8
2.1.1 实验动物 8
2.1.2 药品及试剂 8
2.2 仪器及设备 8
2.3 方法 8
2.3.1 分组及给药 8
2.3.2 尿量的测定 9
2.3.3 尿液中离子浓度、pH及电导率的测定 9
2.3.4 统计学方法 9
2.4 结果 9
2.4.1 尿量和pH值 9
2.4.2 Na+、K+、Cl-和电导率 10
2.5 讨论 11
结 论 13
致 谢 14
参 考 文 献 15
1 绪论
莲子心为睡莲科植物莲(Nelumbo nucifera Gaertn)的成熟种子中间绿色胚根，始载于《本草纲目》，具有广泛的药用价值。主产地有湖南、湖北、江西、福建、江苏、浙江等地[1]，是从莲子中剥取晒干制得。莲子心其味清苦，但却具有极好的降压去脂之效。《温病条辨》:“莲心，由心走肾，能使心火下通于肾，又回环上升，能使肾水上潮于心。”故民间常用以泡茶饮，有清心火，止遗精的作用，对心肾不交、阴虚火旺的失眠患者，食之最宜。
本实验主要探究莲子心乙醇、正丁醇提取物对小鼠的利尿作用，通过给药前与给药后的对比，分析其是否 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
具有利尿活性。探究推测其利尿机制，为临床应用和开发研究提供参考。
1.1 莲子心的研究概况
莲子心的主要成分为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱、荷叶碱等生物碱及木犀黄酮苷、金丝桃苷、芸香苷等黄酮类物质[2]。莲子心中还含有水溶性多糖、棕榈酸、β-谷甾醇等化合物以及锌、铜、铁、钙、镁、镍、镉等微量元素[3]。莲子心具有广泛的药理作用。具有降血压、抗心律失常、抑制血小板聚集、抗氧化及清除活性自由基、抗心肌缺血、松弛平滑肌、强心、抗癌、对脑缺血损伤的保护、改善急性肺损伤及肺纤维化、中枢抑制、降血糖等药理作用[2]。其作为我国一种具悠久历史中药，作用早在《本草纲目》就有记载。在对莲子心研究中，莲心生物碱功能被探究得最为明确。
1.1.1 化学成分的研究
(1)生物碱类化合物
莲子心主要含莲心碱等多种生物碱、莲心多糖、木犀草素、芦丁等黄酮类化合物，生物碱为其最主要的活性成分。莲子心生物碱研究开始于19世纪末，后来，国内外学者进一步将莲子心所含生物碱分为非酚性生物碱和酚性生物碱。最初是由日本的富田真雄等人从荷叶中分离出荷叶碱(Nuciferine)、莲碱(Roemenne)及O-去甲荷叶碱(O-Nomuciferine)3个单体成分。赵志远等人也在上世纪60年代分离得莲心碱。潘白川等用化学降解方法推测了其结构。迄今为止，从植物莲中分离出生物碱类化合物已多达20个之多，且均为异喹啉生物碱[4]。现在对莲心生物碱分离及分析主要采用的方法有高效液相色谱法和薄层扫描法。
莲子心含有多种生物碱成分，已确定的有莲心碱C37H42O6N2(Liensinine)、异莲心碱C37H42O6N2(Isoliendinine)、甲基莲心碱C38H44O6N2(Neferine)[5]、莲心季铵碱C18H24O3N+(Lotusine)、荷叶碱C19H21O2N(Nuciferine)、前荷叶碱C19H21O3N (Pronuciferine)[6]、甲基紫堇杷灵C12H17O2N(Methylcorypalline)、莲子碱(nelumbine)、亚美罂粟碱(armepavine)、dl-去甲基衡州乌药碱C16H17O3N (dl-demethylcoclaurine)、鹅掌楸碱C17H9O3N(Liriodenine)。其中，莲心碱、甲基莲心碱、异莲心碱属于双苄基异喹啉类生物碱，莲心季铵碱为单苄基异喹啉类生物碱，该化合物是各单体成分分离提取过程的中间品，也是莲子心中具有药理作用的主要有效部分莲心生物碱，被认为是莲子心中含量较多、且最具广泛药理活性的有效部位[7]。荷叶碱为阿朴啡生物碱，前荷叶碱为原阿朴啡生物碱，甲基紫堇杷灵为简单异喹啉类生物碱，dl-去甲基衡州乌药碱为单苄基异喹啉类生物碱，鹅掌楸碱为氧化阿朴啡生物碱。
(2)黄酮类化合物
早在20世纪60年代，就有报道莲子心含有芸香苷、金丝桃苷、木犀草素等黄酮类物质。近年来随着人们对黄酮类物质认识的加深，莲子心黄酮类物质也越来越引起人们的关注。目前关于莲子心黄酮类物质的研究主要在于其提取工艺及检测方法的研究。如蔡定建等[8]采用碱溶酸析法和微波间歇加热提取法，成功地提取了莲子心中黄酮类物质，且黄酮得率分别为4.135 mg/g和6.266 mg/g。再如杨明等[9]以乙醇为溶剂，研究莲子心黄酮类物质的微波、超声波提取工艺，确定其工艺参数分别是超声波法乙醇浓度为80%，pH值为6.5，辐射时间为40 min；微波法的pH值为9，微波功率406 W，微波处理时间为20 s。此外亦有相关报道出一系列适用于莲子心黄酮物质的检测方法，如张丽珍等[10]研究发现以聚酰胺柱色谱分离，用分光光度法测定莲子心总黄酮含量，可有效排除叶绿素的干扰，是一种简便、准确、灵敏度高的检测方法。
1.1.2 提取方法
(1)生物碱提取方法
生物碱的提取按所采用的溶剂不同可分为水提取法和有机溶剂提取法，其中水提取法包括纯水提取法、酸水提取法、碱水提取法。按提取条件不同分为浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法及连续回流提取法等。对于非水溶性生物碱提取，常采用甲醇溶剂冷浸法，即将干燥莲子心碾成粗粉，加适量甲醇浸泡，回收甲醇，残留液用3% 盐酸调pH 2~3，过滤，滤液以乙醚脱脂，浓氨水调pH 9以上，乙醚萃取，自醚层得非水溶性总碱[11]。该法根据莲心碱的性质将其分离出来，但甲醇有毒性，工艺路线较为烦琐，莲心碱提取率低。乙醇冷浸法与甲醇类似，只是甲醇的极性强于乙醇，而乙醇较甲醇更为安全。
溶剂回流提取法：取莲子心10 g，加95%乙醇80 mL，回流提取3次，每次1 h，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏，加水溶解，以浓盐酸调节至pH 1~2，过滤。以浓氨水碱化至pH 9~10，氯仿萃取2次，每次50 mL，合并氯仿层，用无水硫酸钠脱水，过滤，滤液浓缩即得[12]。
这些中药利尿活性的研究都是通过动物实验，单次或长期给药，观察小鼠的尿量等观测指标，确定其利尿活性。虽然发现了许多中药材的利尿作用，但是其具体的利尿成分还不明确，利尿机制也不明确，还需要进一步探究。
1.3 研究内容
本实验以生理盐水水负荷小鼠为实验动物，设立呋塞米组(10.0 mg/kg)，氢氯噻嗪组(10.0 mg/kg)，乙醇提取物高、低剂量组(90.6 mg/kg，22.6 mg/kg)，正丁醇提取物高、低剂量组(62.5 mg/kg，15.6 mg/kg)。采用滤纸法测定小鼠尿量，原子吸收分光度计测定小鼠尿液中Na+、K+离子浓度，电位滴定法测定小鼠尿液中Cl-浓度。以小鼠尿量，尿液中离子浓度(Na+、K+、Cl-)、pH、电导率为指标，研究其利尿活性。
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