四个玉米杂交品种种子纯度的鉴定
种子纯度和真实性是优良品种得以保护和农业生产中品种保持增产潜力的的关键因素，因此对种子纯度和真实性进行鉴定对种子质量具有重要意义。玉米蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）具有准确、快速、经济、实验室较易实现等优点。本实验对市场上常见的中江种业的四个玉米杂交品种中江1号，苏玉10号苏玉19和雷奥四个品种运用PAGE蛋白电泳法进行品种纯度鉴定，并发现四个品种中苏玉10号，苏玉19和雷奥种子纯度均为100%，中江一号的条带存在个别不一致，纯度不纯，种子质量较纯度良好的差，混杂率为7.3％。
目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法4
1.1 实验材料 4
1.2 实验方法 4
2 结果与分析5
2.1 种子总蛋白提取5
2.2 SDSPAGE电泳5
2.3 种子纯度分析6
3 讨论 6
致谢7
参考文献8
四个玉米杂交品种种子纯度的鉴定
引言
引言
种子是农业生产最基本的资料，种子质量优劣直接影响到农业生产。种子品种纯度是指品种在特征特性方面典型一致的程度，即在供检样品中本品种的种子数占供检种子数的百分率。在种子质量中，纯度的高度是衡量种子质量优劣的主要指标，纯度的降低会显著降低作物的产量和品质。而玉米是粮食、饲料、加工、能源多用途作物，是二十一世纪的“谷中之王”[1]，玉米是全球第一大作物。在中国，玉米的种质面积占作物播种面积第一位，产量也仅此于水稻。玉米杂交种纯度与大田产量显显著正相关，纯度高的种子大田产量也高，玉米杂交品种纯度为96.5%和95.6%的种子比纯度为98.6%的种子分别减产10.5%和11.1%[2]。当前杂交玉米良种市场空间广阔，生产经营玉米杂交种子成为种子产业的重头戏，但也滋长了一些不良商家，将假冒伪劣的玉米种子打进市场，这对育种家积极性和企业及玉米种子的生产销售产生极大的危害。加强种子质量管理和检测，严防假冒伪劣玉米种子进入田间地头，确保农业生产安全用种是种子管理工作的重要内容，同时优质种子的质量保证也成为原
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种生产和销售过程中一个极为重要的环节，随着新育种方法的广泛应用和种子市场的扩大，国内外很多学者将研究重点放在种子质量鉴定技术上，尤其是种子的纯度和真实性鉴定。
长期以来，品种的真实性和纯度鉴定以传统的大田小区种植为主，虽然结果准确可靠但费工费时，周期长、花费高、易受自然条件影响，有时难以达到质量预控的目的。而种子形态鉴定法虽有简单、方便、直观成本低的有点，但可靠性差，使用范围也小。DNA分子水平技术是基于PCR技术的分子标记，由William[3]和Welsh[4]等人于1990年实现。法国Faye等[5]用AFLP引物在玉米的两个自交系中发现30个普代，进一步证实该技术适合玉米基因型的指纹鉴定。在DNA和RNA分子水平上的RAPD技术、SSR技术、AFLP技术、RFLP技术鉴定品种虽具准确性高、可靠、快速等优点[6]，却因为技术设备要求高，检测过程的准备过于复杂和费用昂贵而无法成为首选的鉴定方法。贮藏蛋白是基因表达的产物，多存在于种子或籽粒中。具有特异性、容易分离和提取的特点[7]。可以利用电泳中贮藏蛋白谱带的多态性来鉴定品种的真实性和纯度。玉米种子中所含蛋白通常分为四类，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。玉米种的醇溶蛋白较为丰富，水稻则谷蛋白含量丰富，球蛋白主要存在于豆类作物中[8]。
贮藏蛋白电泳技术相对于同工酶电泳具有易提取、无需在低温条件下操作、贮藏蛋白成分和数量稳定且丰富，不宜受外界条件影响等优点。电泳结果具有较好的稳定性和重复性。在种子真实性鉴定额纯度分析中，常用的贮藏蛋白电泳方法主要有SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳SDS PAGE[9]和超薄等电聚焦电泳UTL IEF PAGE两种方法[10]。
电泳法鉴定是用种子蛋白或过氧化酶同工酶进行鉴定，是目前品种纯度和真实性测定中较为快速准确的方法，操作也较DNA或RNA分子水平简单方便，也可在一天内鉴定出结果。总而言之，蛋白质电泳技术由于其用种量少，时间短，结果稳定行好且重复性高，技术简单和费用大连等优点被广泛应用于品种鉴定。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 品种来源
苏玉10号，苏玉19号，中江1号，雷奥四个品种种子购自中江种业。
1.1.2 SDSPAGE相关试剂配方
试剂名称
Name of reagent
配制方法
Prescription of reagent
30%单体贮备液
30 g丙烯酰胺，0.8 g N，N(甲叉丙烯酰胺，溶解后加水定容至100 mL，过滤，4℃保存
4×分离胶缓冲液
18.17 g Tris，0.4 g SDS，加水溶解后用1 M HCI调整pH至8.8，定容至100 mL
4℃保存
4×浓缩胶缓冲液
6.06 g Tris，0.4 g SDS，加水溶解后用1 M HCl调整pH至6.8，定容至100 mL
4℃保存
10%过硫酸铵
0.1 g过硫酸铵，1 mL水，现配现用
10%TEMED
0.1 mL TEMED，0.9 mL水，4℃保存
蛋白提取液
50 Mm TrisHCl，0.01 M 2巯基乙醇，pH 8.0，4℃保存
4×样品缓冲液
0.6g Tris，1 SDS，12.5 mL甘油，加水溶解后用1 M HCl调整pH至8.0，再加0.05 g溴酚蓝,2.5 mL (巯基乙醇，定容至50mL，分装至20℃保存
电极缓冲液
3.03 g Tris，1.0g SDS，14.4g甘氨酸，加水溶解后用1 M HCl调整pH至8.3，定容至1000 mL
固定液
40%甲醇，10%乙酸，50%水
G250染色液
0.4 g考马斯亮蓝G250，40 g硫酸铵，8 mL磷酸，100 mL甲醇，定容至500 mL
R250染色液
125 mL甲醇，50 mL乙酸，0.5 g考马斯亮蓝R250，溶解一夜后定容至500 mL
快速脱色液
100 mL乙酸，300 mL甲醇，600 mL水混匀
慢速脱色液
100 mL乙酸，100 mL甲醇，800 mL水混匀
12.5% SDSPAGE
分离胶
15 mL分离胶缓冲液，25mL ArcBis，19 mL蒸馏水，1 mL 10%过硫酸铵，20 uL TEMED
5% DSDPAGE
浓缩胶
1.5 mL浓缩胶缓冲液，2.5 mL ArcBis，5 mL蒸馏水，0.5 mL 10%过硫酸铵，20 uL TEMED
目录
摘要1
关键词1
Abstract2
Key words2
引言2
1 材料与方法4
1.1 实验材料 4
1.2 实验方法 4
2 结果与分析5
2.1 种子总蛋白提取5
2.2 SDSPAGE电泳5
2.3 种子纯度分析6
3 讨论 6
致谢7
参考文献8
四个玉米杂交品种种子纯度的鉴定
引言
引言
种子是农业生产最基本的资料，种子质量优劣直接影响到农业生产。种子品种纯度是指品种在特征特性方面典型一致的程度，即在供检样品中本品种的种子数占供检种子数的百分率。在种子质量中，纯度的高度是衡量种子质量优劣的主要指标，纯度的降低会显著降低作物的产量和品质。而玉米是粮食、饲料、加工、能源多用途作物，是二十一世纪的“谷中之王”[1]，玉米是全球第一大作物。在中国，玉米的种质面积占作物播种面积第一位，产量也仅此于水稻。玉米杂交种纯度与大田产量显显著正相关，纯度高的种子大田产量也高，玉米杂交品种纯度为96.5%和95.6%的种子比纯度为98.6%的种子分别减产10.5%和11.1%[2]。当前杂交玉米良种市场空间广阔，生产经营玉米杂交种子成为种子产业的重头戏，但也滋长了一些不良商家，将假冒伪劣的玉米种子打进市场，这对育种家积极性和企业及玉米种子的生产销售产生极大的危害。加强种子质量管理和检测，严防假冒伪劣玉米种子进入田间地头，确保农业生产安全用种是种子管理工作的重要内容，同时优质种子的质量保证也成为原
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
种生产和销售过程中一个极为重要的环节，随着新育种方法的广泛应用和种子市场的扩大，国内外很多学者将研究重点放在种子质量鉴定技术上，尤其是种子的纯度和真实性鉴定。
长期以来，品种的真实性和纯度鉴定以传统的大田小区种植为主，虽然结果准确可靠但费工费时，周期长、花费高、易受自然条件影响，有时难以达到质量预控的目的。而种子形态鉴定法虽有简单、方便、直观成本低的有点，但可靠性差，使用范围也小。DNA分子水平技术是基于PCR技术的分子标记，由William[3]和Welsh[4]等人于1990年实现。法国Faye等[5]用AFLP引物在玉米的两个自交系中发现30个普代，进一步证实该技术适合玉米基因型的指纹鉴定。在DNA和RNA分子水平上的RAPD技术、SSR技术、AFLP技术、RFLP技术鉴定品种虽具准确性高、可靠、快速等优点[6]，却因为技术设备要求高，检测过程的准备过于复杂和费用昂贵而无法成为首选的鉴定方法。贮藏蛋白是基因表达的产物，多存在于种子或籽粒中。具有特异性、容易分离和提取的特点[7]。可以利用电泳中贮藏蛋白谱带的多态性来鉴定品种的真实性和纯度。玉米种子中所含蛋白通常分为四类，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。玉米种的醇溶蛋白较为丰富，水稻则谷蛋白含量丰富，球蛋白主要存在于豆类作物中[8]。
贮藏蛋白电泳技术相对于同工酶电泳具有易提取、无需在低温条件下操作、贮藏蛋白成分和数量稳定且丰富，不宜受外界条件影响等优点。电泳结果具有较好的稳定性和重复性。在种子真实性鉴定额纯度分析中，常用的贮藏蛋白电泳方法主要有SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳SDS PAGE[9]和超薄等电聚焦电泳UTL IEF PAGE两种方法[10]。
电泳法鉴定是用种子蛋白或过氧化酶同工酶进行鉴定，是目前品种纯度和真实性测定中较为快速准确的方法，操作也较DNA或RNA分子水平简单方便，也可在一天内鉴定出结果。总而言之，蛋白质电泳技术由于其用种量少，时间短，结果稳定行好且重复性高，技术简单和费用大连等优点被广泛应用于品种鉴定。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 品种来源
苏玉10号，苏玉19号，中江1号，雷奥四个品种种子购自中江种业。
1.1.2 SDSPAGE相关试剂配方
试剂名称
Name of reagent
配制方法
Prescription of reagent
30%单体贮备液
30 g丙烯酰胺，0.8 g N，N(甲叉丙烯酰胺，溶解后加水定容至100 mL，过滤，4℃保存
4×分离胶缓冲液
18.17 g Tris，0.4 g SDS，加水溶解后用1 M HCI调整pH至8.8，定容至100 mL
4℃保存
4×浓缩胶缓冲液
6.06 g Tris，0.4 g SDS，加水溶解后用1 M HCl调整pH至6.8，定容至100 mL
4℃保存
10%过硫酸铵
0.1 g过硫酸铵，1 mL水，现配现用
10%TEMED
0.1 mL TEMED，0.9 mL水，4℃保存
蛋白提取液
50 Mm TrisHCl，0.01 M 2巯基乙醇，pH 8.0，4℃保存
4×样品缓冲液
0.6g Tris，1 SDS，12.5 mL甘油，加水溶解后用1 M HCl调整pH至8.0，再加0.05 g溴酚蓝,2.5 mL (巯基乙醇，定容至50mL，分装至20℃保存
电极缓冲液
3.03 g Tris，1.0g SDS，14.4g甘氨酸，加水溶解后用1 M HCl调整pH至8.3，定容至1000 mL
固定液
40%甲醇，10%乙酸，50%水
G250染色液
0.4 g考马斯亮蓝G250，40 g硫酸铵，8 mL磷酸，100 mL甲醇，定容至500 mL
R250染色液
125 mL甲醇，50 mL乙酸，0.5 g考马斯亮蓝R250，溶解一夜后定容至500 mL
快速脱色液
100 mL乙酸，300 mL甲醇，600 mL水混匀
慢速脱色液
100 mL乙酸，100 mL甲醇，800 mL水混匀
12.5% SDSPAGE
分离胶
15 mL分离胶缓冲液，25mL ArcBis，19 mL蒸馏水，1 mL 10%过硫酸铵，20 uL TEMED
5% DSDPAGE
浓缩胶
1.5 mL浓缩胶缓冲液，2.5 mL ArcBis，5 mL蒸馏水，0.5 mL 10%过硫酸铵，20 uL TEMED
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