猪链球菌2型丝氨酸蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

【目的】克隆猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2, SS2）强毒株SS2-1的丝氨酸蛋白酶（Extracellular serine protease, ESP）编码基因并进行原核表达，纯化重组蛋白，制备多克隆抗体，为后续研究丝氨酸蛋白酶的功能研究奠定基础。【方法】利用PCR方法扩增SS2-1的ESP胞内区（不含信号肽）及不含功能结构域的截短ESP’，构建重组表达质粒pET32a-ESP和pET28a- ESP’，转化到大肠杆菌BL21（DE3），SDS-PAGE鉴定表达产物，通过亲和层析法纯化重组蛋白。纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备兔多克隆抗体血清，ELISA方法检测多克隆抗体的效价。【结果】PCR扩增得到621 bp 的ESP胞内区和456 bp的截短ESP’的片段，成功构建重组表达质粒pET32a-ESP和pET28a- ESP’，重组蛋白rESP和rESP’的分子量分别为47kDa和15kDa。利用重组蛋白ESP作为抗原所制备的重组蛋白兔多抗血清抗体效价为1 51 200 以上。【结论】在大肠杆菌中成功地表达了ESP及ESP’，并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清，为进一步研究ESP的功能奠定了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言1
1 材料与方法 2
1.1 试验材料2
1.1.1 质粒和菌株 2
1.1.2 材料和试剂 2
1.2 方法2
1.2.1 目的基因的分子克隆和重组表达载体的构建 2
1.2.2 重组蛋白的的表达和纯化 2
1.2.3 兔多抗血清的制备3
1.2.4 兔多抗血清的ELISA检测3
2 结果 3
2.1 PCR扩增目的基因 3
2.2 重组表达载体的构建和鉴定 3
2.3 重组蛋白的诱导表达及纯化4
2.4 ESP重组蛋白兔多抗血清抗体滴度检测 5
3 讨论 5
致谢 6
参考文献 6
猪链球菌2型
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丝氨酸蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备

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