地方黄鸡矮小基因发掘和鉴定
地方黄鸡矮小基因发掘和鉴定[20200510204445]
摘要：鸡性连锁矮小基因dw对肉鸡、蛋鸡生产性能有着广泛的影响，在提高其综合经济效益上发挥着积极的作用。本实验根据文献报道和已知的正常鸡的GRH序列设计了一对引物，分别对新曹农场正常黄羽鸡和矮小型鸡基因经行了PCR扩增。结果发现正常黄羽鸡扩增片段为2230bp，矮小型鸡为456bp，并通过测序和比对发现T、C、A、G 4种碱基在新曹黄羽矮小鸡中的平均含量为33.0％、23.6％、26.4％、17.0％，A+T含量59.4％，C+G含量40.6％，序列偏好嘧啶碱基。从新曹黄羽矮小鸡dw基因序列中检测到2种单倍型,单倍型多样性指数为 0.33，单倍型2为优势单倍型，单倍型1在129位点有一个C的插入，序列不存在碱基替换变异。新曹黄羽矮小鸡与红原鸡比较在276位点至2056位点存在了1780bp的缺失。
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关键字:性连锁矮基因;PCR;基因测序
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 血样 2
1.1.2主要仪器设备2
1.1.3 主要试剂 2
1.1.4常用溶液及其配制3
1.1.5主要分子生物学软件和分子生物学网站3
1.2方法 3
1.2.1鸡血DNA的提取3
1.2.2引物设计3
1.2.3 PCR及凝胶电泳3
1.2.4测序3
2.结果与分析3
2.1 PCR结果分析3
2.2 测序结果分析4
3.讨论5
致谢5
参考文献6
地方黄鸡矮小基因发掘和鉴定
引言
引言：鸡性连锁矮小基因（dw），从自然的鸡群的个体变异，它是现在发现的鸡的八种矮小基因中的一种，被认为是唯一的鸡本身并不是有害健康，而对于人类十分有价值的隐性突变基因[1-2]。我们在自然的鸡群中，会发现一些变异个体，它比正常鸡明显要矮小些，我们称这种变异个体为矮小型鸡，而这种性状是由相应的遗传基因控制的，这些遗传基因一般可以分为2种[3]。在常染色体分布着2种半致死的矮小基因，基因可导致脚软骨发育的不正常和甲状腺功能的减退，这些都对鸡群有着不利影响。在性染色体分布着显性伴性矮小基因和与隐性伴性矮小基因，这些都是复等位基因。自从该基因被发现后, 世界上许多学者都开始利用经典孟德尔遗传理论就该基因的遗传方式和该基因对于肉鸡、蛋鸡生产性能的影响进行广泛研究, 并慢慢地将研究的成果应用于实际，对鸡的育种实践有极大帮助。九十 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
年代后,随着科技的迅猛发展，分子生物学也得到了极大的发展，这就激起了世界上各个国家对矮小基因的热情，并对其的分子遗传基础和作用机制经行了广泛的研究，该基因成为了研究生长激素及其受体基因的重要靶基因之一[4]。
随着鸡性连锁矮小型基因的研究发展，发现生长激索受体基因的缺陷导致了矮小型基因的分子基础。鸡肝细胞培养实验对这一情况做出了解释：在矮小型鸡的肝细胞中转染介导重组正常的生长激素受体基因后，肝细胞便能够正常地工作，发挥其本身的功能。经过大量研究表明[5-11]，矮小基因对鸡的生长发育和生产性能具有重要影响。矮小基因可使鸡的发育不正常，比较雏鸡，在体重和体型上正常型鸡和矮小型鸡没有什么太大差异，而如果是比较成年鸡，后者母鸡体重降低约30％，公鸡体重降低约40％。在鸡的体内会有脂肪的沉积，处于生长发育期的矮小型鸡在这方面就比正常鸡要强，而成年的矮小型母鸡则在腹脂率方面要比正常型鸡低很多[12]。dw基因在鸡的产蛋率、蛋重和孵化率等方面都有着巨大影响。dw基因对于不同品系的影响效果大有不同。对于中等体型的鸡和轻等体型的鸡引入dw基因，在不经过选育的情况下，产蛋率会有所下降。如果经过选育的话，其产蛋率会提高，接近正常鸡的水平。而对于重型鸡和肉用型鸡，引入dw基因后，其产蛋率的变化基本没有，甚至还有所提高[13]。出现以上情况，分析可能是由于dw基因可影响母鸡正常卵子的排出，可减少卵泡的数量和母鸡体重的下降[14]。矮脚鸡蛋重低于正常鸡的十分之一，但在比较自身的蛋重和体重时，矮脚鸡蛋重和体重的相对值更大。有研究表明，经过选育后，可以避免矮小型鸡蛋重比正常型鸡蛋重低的情况，做到二者基本相同的地步[15]。研究发现矮小型蛋鸡的蛋比重较之正常型蛋鸡要高很多，且蛋壳强度、哈氏单位和蛋黄比例也有很大程度上地提高，蛋壳质量较之正常型要好许多，但蛋壳厚度则基本相同没有什么变化[16]。矮小型鸡的蛋质量很高，基本没有异常鸡蛋的发生，其中出现双黄也少，破碎的蛋、变形的蛋、裂纹的蛋和软壳的蛋较之正常的蛋鸡减少了约一半左右，种蛋合格率和孵化率也较之正常的要高[17]。
由于矮小型鸡的蛋比较小，并且其产蛋率会较之正常型鸡的有所下降，因此dw基因大多应用在肉鸡生产上，而没有多用在蛋鸡的生产上，但由于矮小型鸡有饲料报酬高、适应能力强、蛋的质量高、单位饲养面积需要小和单位饲养成本低等优势，把dw基因应用到蛋鸡生产上也多了几份可行性，并且成功了好多。由中国农大选育的节粮型蛋鸡就把dw基因的优势发挥了出来，使成年鸡的体重明显降低，节省了约25％-30％的饲料，提高饲料转化率近二成，提高了单位面积饲养量，管理成本也大幅度降低，提高了饲养蛋鸡的综合经济效益，从而拓展了矮小基因在蛋鸡饲养应用的前景。并且，矮小的黄羽肉鸡体型圆润、肉质鲜美、矮小可爱美观，很是惹广大消费者的喜欢，因此矮小肉鸡的发展前景也十分广阔。本实验也希望能在通过对矮小基因缺失片段的研究，在不引入外血保持地方黄羽鸡优良性状的条件下筛选dw基因，为培育矮小型地方黄羽鸡提供素材。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 血样 鸡血采自江苏省东台新曹农场种鸡场地方黄羽鸡群。从鸡翅下静脉采血1-2ml，置于盛有0.5mlACD抗凝剂的离心管中，混匀后—20℃冷冻保存。
1.1.2 主要仪器设备 梯度PCR仪 ，低温高速离心机，高压灭菌锅，电泳仪， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
恒温水浴震荡仪，超纯水器，电子天平，冰箱。
1.1.3 主要试剂 琼脂糖（Agrose):Spanish分装; 异戊醇：南京化学试剂有限公司;
Tri-饱和酚：北京化工厂; 蛋白酶K（Proteinase K）：Merck分装;
rTaq mix：Takara; 硼酸：Japan； EDTA-Na2：Japan； DNA Marker：DL2000bp
PCR引物：南京金斯瑞有限责任公司；
其他常规试剂取自本校物资供应科
1.1.4 常用溶液及其配制 20mg/mL蛋白酶K：20mg蛋白酶K溶于1mL灭菌双蒸水，—20℃保存待用。 抗凝剂ACD：柠檬酸0.48g，柠檬酸钠1.32g，葡萄糖1.47，定容于100mL水中，高压灭菌。每6mL新鲜血液中加入1mL的ACD液。 0.5M EDTA （H8.0): 800mL水中加入1.861g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na。2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液pH至8.0，然后定容至1L，高压灭菌。 10×TBE：Tris碱108g，硼酸55g，0.5M EDTA（pH8.0）40mL，加水定容至1000mL。 裂解液：2M尿素、100mM Tris-Cl（pH8.0）、100mL 0.5M EDTA（pH8.0），1%SDS溶解并定容至1000mL，高压灭菌。 TE缓冲液：10mM Tris-Cl（pH8.0）,高压灭菌，室温保存。
121 taacgaggac acttacttca ccacagaaag ccttaccact accggtatca atcttggagc
181 ttcaatggca gaaaccccaa gtatggaaat gcctgtccca gactacactt ctattcatat
241 tgttcactct ccacaaggcc ttgtgctcaa tgcaa↓ctgca ctgcctgtgc cagagaaaga
摘要：鸡性连锁矮小基因dw对肉鸡、蛋鸡生产性能有着广泛的影响，在提高其综合经济效益上发挥着积极的作用。本实验根据文献报道和已知的正常鸡的GRH序列设计了一对引物，分别对新曹农场正常黄羽鸡和矮小型鸡基因经行了PCR扩增。结果发现正常黄羽鸡扩增片段为2230bp，矮小型鸡为456bp，并通过测序和比对发现T、C、A、G 4种碱基在新曹黄羽矮小鸡中的平均含量为33.0％、23.6％、26.4％、17.0％，A+T含量59.4％，C+G含量40.6％，序列偏好嘧啶碱基。从新曹黄羽矮小鸡dw基因序列中检测到2种单倍型,单倍型多样性指数为 0.33，单倍型2为优势单倍型，单倍型1在129位点有一个C的插入，序列不存在碱基替换变异。新曹黄羽矮小鸡与红原鸡比较在276位点至2056位点存在了1780bp的缺失。
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关键字:性连锁矮基因;PCR;基因测序
目录
摘要1
关键词1
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引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1 血样 2
1.1.2主要仪器设备2
1.1.3 主要试剂 2
1.1.4常用溶液及其配制3
1.1.5主要分子生物学软件和分子生物学网站3
1.2方法 3
1.2.1鸡血DNA的提取3
1.2.2引物设计3
1.2.3 PCR及凝胶电泳3
1.2.4测序3
2.结果与分析3
2.1 PCR结果分析3
2.2 测序结果分析4
3.讨论5
致谢5
参考文献6
地方黄鸡矮小基因发掘和鉴定
引言
引言：鸡性连锁矮小基因（dw），从自然的鸡群的个体变异，它是现在发现的鸡的八种矮小基因中的一种，被认为是唯一的鸡本身并不是有害健康，而对于人类十分有价值的隐性突变基因[1-2]。我们在自然的鸡群中，会发现一些变异个体，它比正常鸡明显要矮小些，我们称这种变异个体为矮小型鸡，而这种性状是由相应的遗传基因控制的，这些遗传基因一般可以分为2种[3]。在常染色体分布着2种半致死的矮小基因，基因可导致脚软骨发育的不正常和甲状腺功能的减退，这些都对鸡群有着不利影响。在性染色体分布着显性伴性矮小基因和与隐性伴性矮小基因，这些都是复等位基因。自从该基因被发现后, 世界上许多学者都开始利用经典孟德尔遗传理论就该基因的遗传方式和该基因对于肉鸡、蛋鸡生产性能的影响进行广泛研究, 并慢慢地将研究的成果应用于实际，对鸡的育种实践有极大帮助。九十 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
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随着鸡性连锁矮小型基因的研究发展，发现生长激索受体基因的缺陷导致了矮小型基因的分子基础。鸡肝细胞培养实验对这一情况做出了解释：在矮小型鸡的肝细胞中转染介导重组正常的生长激素受体基因后，肝细胞便能够正常地工作，发挥其本身的功能。经过大量研究表明[5-11]，矮小基因对鸡的生长发育和生产性能具有重要影响。矮小基因可使鸡的发育不正常，比较雏鸡，在体重和体型上正常型鸡和矮小型鸡没有什么太大差异，而如果是比较成年鸡，后者母鸡体重降低约30％，公鸡体重降低约40％。在鸡的体内会有脂肪的沉积，处于生长发育期的矮小型鸡在这方面就比正常鸡要强，而成年的矮小型母鸡则在腹脂率方面要比正常型鸡低很多[12]。dw基因在鸡的产蛋率、蛋重和孵化率等方面都有着巨大影响。dw基因对于不同品系的影响效果大有不同。对于中等体型的鸡和轻等体型的鸡引入dw基因，在不经过选育的情况下，产蛋率会有所下降。如果经过选育的话，其产蛋率会提高，接近正常鸡的水平。而对于重型鸡和肉用型鸡，引入dw基因后，其产蛋率的变化基本没有，甚至还有所提高[13]。出现以上情况，分析可能是由于dw基因可影响母鸡正常卵子的排出，可减少卵泡的数量和母鸡体重的下降[14]。矮脚鸡蛋重低于正常鸡的十分之一，但在比较自身的蛋重和体重时，矮脚鸡蛋重和体重的相对值更大。有研究表明，经过选育后，可以避免矮小型鸡蛋重比正常型鸡蛋重低的情况，做到二者基本相同的地步[15]。研究发现矮小型蛋鸡的蛋比重较之正常型蛋鸡要高很多，且蛋壳强度、哈氏单位和蛋黄比例也有很大程度上地提高，蛋壳质量较之正常型要好许多，但蛋壳厚度则基本相同没有什么变化[16]。矮小型鸡的蛋质量很高，基本没有异常鸡蛋的发生，其中出现双黄也少，破碎的蛋、变形的蛋、裂纹的蛋和软壳的蛋较之正常的蛋鸡减少了约一半左右，种蛋合格率和孵化率也较之正常的要高[17]。
由于矮小型鸡的蛋比较小，并且其产蛋率会较之正常型鸡的有所下降，因此dw基因大多应用在肉鸡生产上，而没有多用在蛋鸡的生产上，但由于矮小型鸡有饲料报酬高、适应能力强、蛋的质量高、单位饲养面积需要小和单位饲养成本低等优势，把dw基因应用到蛋鸡生产上也多了几份可行性，并且成功了好多。由中国农大选育的节粮型蛋鸡就把dw基因的优势发挥了出来，使成年鸡的体重明显降低，节省了约25％-30％的饲料，提高饲料转化率近二成，提高了单位面积饲养量，管理成本也大幅度降低，提高了饲养蛋鸡的综合经济效益，从而拓展了矮小基因在蛋鸡饲养应用的前景。并且，矮小的黄羽肉鸡体型圆润、肉质鲜美、矮小可爱美观，很是惹广大消费者的喜欢，因此矮小肉鸡的发展前景也十分广阔。本实验也希望能在通过对矮小基因缺失片段的研究，在不引入外血保持地方黄羽鸡优良性状的条件下筛选dw基因，为培育矮小型地方黄羽鸡提供素材。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 血样 鸡血采自江苏省东台新曹农场种鸡场地方黄羽鸡群。从鸡翅下静脉采血1-2ml，置于盛有0.5mlACD抗凝剂的离心管中，混匀后—20℃冷冻保存。
1.1.2 主要仪器设备 梯度PCR仪 ，低温高速离心机，高压灭菌锅，电泳仪， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
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121 taacgaggac acttacttca ccacagaaag ccttaccact accggtatca atcttggagc
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