柿叶中单宁的超声波提取工艺研究(附件)
摘 要本课题以柿叶资源为研究对象，采用超声波法对其中富含的单宁类物质进行提取研究。在单因素的基础上结合正交试验，对其主要影响因素进行考察，确定的最佳工艺条件为：乙醇浓度45%、提取温度65℃、超声波功率80W、提取时间20min，此条件下单宁的提取率为5.68%，为进一步开发柿叶资源提供参考。目 录
1 概述
1.1 柿叶简介 1
1.2 柿叶研究现状 1
1.2.1柿叶的化学成分 1
1.3 单宁的提取方法 2
1.3.1溶剂浸提法 2
1.3.2微波辅助提取法 2
1.3.3超声波辅助提取法 2
1.3.4超临界 CO2萃取法 3
1.3.5酶转化提取法 3
1.3.6发酵法 3
1.4 单宁的含量测定 4
1.4.1皮粉法 4
1.4.2干酪素法 4
1.4.3高锰酸钾法 4
1.4.4络合滴定法 4
1.5 柿叶的药理作用 5
1.5.1对于心血管系统的作用 5
1.5.2止血作用 5
1.5.3抗菌作用 5
1.5.4 抗癌作用 6
1.5.5其他作用 6
1.6 小结 6
2 单宁的提取工艺研究
2.1 材料与仪器 7
2.1.1材料 7
2.1.2仪器 7
2.2 实验方法 7
2.2.1提取方法 7
2.2.2标准曲线制作 7
2.2.3单宁含量的测定 .8
2.2.4单因素实验 8
2.2.5正交实验 8
2.3 结果与分析 .9
2.3.1单因素实验结果 .9
2.3.2正交实验结果 .. .......11
2.4 验证实验 ...... ....... 13
结论.........................................................................
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实验 8
2.3 结果与分析 .9
2.3.1单因素实验结果 .9
2.3.2正交实验结果 .. .......11
2.4 验证实验 ...... ....... 13
结论............................................................................................................................. 14
参考文献................................................................................................................... .15
致谢....................................................................................................................... ......17
1 概述
1.1 柿叶简介
柿叶为植物柿(Diospyros kaki L.f)的新鲜或干燥叶片，味苦、性寒，在明《滇南本草》中有关于“经霜叶敷臃疮”的记载，在《本草再新》记载柿叶具有止渴生津和治疗咳嗽的功效[1]。目前柿叶已被制成中成药，在保护心脑血管、抗菌消炎、抗癌防癌等方面具有广泛的药用价值[2]。柿科植物在全世界有500多种，主要分布于热带和亚热带，其中柿属有350多种。有柿、君迁子和油柿等，但以柿为最常见，在我国南北各地分布十分广泛，主要产于西南部至东南部，北至辽宁[3]。柿果、柿核、柿蒂、柿霜、柿叶、柿子皮等均可作为药用或有可能成为药物。我国柿叶资源丰富，近年来，柿属植物的研究越来越深入，促进了柿属植物资源的开发力度。
1.2 柿叶研究现状
1.2.1 柿叶的化学成分
1.2.1.1 黄酮类
迄今由柿属植物中分离得到的黄酮类多酚类化合物中，大部分都是黄酮醇及其苷元的结构类型基本都是山萘酚(Kaempferol)和槲皮素(Quercetin)[4]，而糖取代基全部都是连接在昔元的三位。柿叶中富含黄酮类化合物有芦丁、山萘酚、槲皮素、异槲皮素、黄芪苷、山萘酚3OβD葡萄糖苷、山萘酚3OαL鼠李糖苷等[5]。
研究还表明，柿叶中还因含有丰富的多酚类物质如单宁、没食子酸、肉桂酸、咖啡酸、香豆酸、绿原酸、原儿茶酸、阿魏酸、丁香等[6]。
1.2.1.2 萜类
据研究报道，柿叶中萜类主要为三萜类，目前已经分离鉴定的三萜类物质有齐墩果酸、白桦脂酸、19α羟基乌苏酸等[7]。
1.2.1.3 蒽醌类
蒽醌类物质可分为单聚体、二聚体、三聚体和四聚体，基本都含有Plumba结构单位。从柿属植物中分离得到的蒽醌类物质达60多个，其中单聚体和二聚体局多[8]。
1.2.1.4 其他成分
柿叶中还含有丰富香豆素类、有机酸类、甾醇类、鞣质等。还富含Vc、半纤维素、多种氨基酸和微量元素[9]，其中半纤维素含量为7.54 %，木质素含量为11.70 %。此外，柿叶还含有17多种氨基酸及多种微量元素[10]。
1.3 单宁的提取方法
1.3.1 溶剂浸提法
单宁易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，故可采用有机溶剂浸提的方法进行提取。李雪雁等分别以甲醇、乙醇、丙酮为提取剂，从黑叶荔枝果壳中提取单宁，确定丙酮为最佳提取剂，最佳浸提条件为在浸提6h、温度55℃、浸提液为70%丙酮水溶液、料液比为16mL/g 时，浸提率最高为26.862mg/g[11]。任雪峰等采用丙酮为提取剂，通过响应面法优化款冬花总溶质的提取工艺，结果表明：以丙酮浓度31%，提取温度30℃，料液比为1:12，提取时167min为最佳提取工艺，总鞣质得率可达14.97%[12]。苏宁等采用水浴法提取余甘子中低分子水解单宁，并通过正交试验进行优化，结果表明，单宁提取最佳工艺为：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取温度85℃、提取时间1.5h，此条件下余甘子单宁提取率为8.84%[13]。有机溶剂提取法提取工艺简单，易于操作，成本较低，适合工业化生产。
1.3.2 微波辅助提取法
微波辅助提取具有设备简单、适用范围广、萃取效率高、污染小等优点。目前，主要用于实验室样品预处理，对于其能否应用于产业化，有待进一步研究和探索。
曹一波等从白桦树皮中提取单宁，采用微波辅助，得出最佳工艺为：微波功率75W，乙醇浓度33%，提取时间为92s，提取温度为80℃，单宁得率为5.16%
1 概述
1.1 柿叶简介 1
1.2 柿叶研究现状 1
1.2.1柿叶的化学成分 1
1.3 单宁的提取方法 2
1.3.1溶剂浸提法 2
1.3.2微波辅助提取法 2
1.3.3超声波辅助提取法 2
1.3.4超临界 CO2萃取法 3
1.3.5酶转化提取法 3
1.3.6发酵法 3
1.4 单宁的含量测定 4
1.4.1皮粉法 4
1.4.2干酪素法 4
1.4.3高锰酸钾法 4
1.4.4络合滴定法 4
1.5 柿叶的药理作用 5
1.5.1对于心血管系统的作用 5
1.5.2止血作用 5
1.5.3抗菌作用 5
1.5.4 抗癌作用 6
1.5.5其他作用 6
1.6 小结 6
2 单宁的提取工艺研究
2.1 材料与仪器 7
2.1.1材料 7
2.1.2仪器 7
2.2 实验方法 7
2.2.1提取方法 7
2.2.2标准曲线制作 7
2.2.3单宁含量的测定 .8
2.2.4单因素实验 8
2.2.5正交实验 8
2.3 结果与分析 .9
2.3.1单因素实验结果 .9
2.3.2正交实验结果 .. .......11
2.4 验证实验 ...... ....... 13
结论.........................................................................
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实验 8
2.3 结果与分析 .9
2.3.1单因素实验结果 .9
2.3.2正交实验结果 .. .......11
2.4 验证实验 ...... ....... 13
结论............................................................................................................................. 14
参考文献................................................................................................................... .15
致谢....................................................................................................................... ......17
1 概述
1.1 柿叶简介
柿叶为植物柿(Diospyros kaki L.f)的新鲜或干燥叶片，味苦、性寒，在明《滇南本草》中有关于“经霜叶敷臃疮”的记载，在《本草再新》记载柿叶具有止渴生津和治疗咳嗽的功效[1]。目前柿叶已被制成中成药，在保护心脑血管、抗菌消炎、抗癌防癌等方面具有广泛的药用价值[2]。柿科植物在全世界有500多种，主要分布于热带和亚热带，其中柿属有350多种。有柿、君迁子和油柿等，但以柿为最常见，在我国南北各地分布十分广泛，主要产于西南部至东南部，北至辽宁[3]。柿果、柿核、柿蒂、柿霜、柿叶、柿子皮等均可作为药用或有可能成为药物。我国柿叶资源丰富，近年来，柿属植物的研究越来越深入，促进了柿属植物资源的开发力度。
1.2 柿叶研究现状
1.2.1 柿叶的化学成分
1.2.1.1 黄酮类
迄今由柿属植物中分离得到的黄酮类多酚类化合物中，大部分都是黄酮醇及其苷元的结构类型基本都是山萘酚(Kaempferol)和槲皮素(Quercetin)[4]，而糖取代基全部都是连接在昔元的三位。柿叶中富含黄酮类化合物有芦丁、山萘酚、槲皮素、异槲皮素、黄芪苷、山萘酚3OβD葡萄糖苷、山萘酚3OαL鼠李糖苷等[5]。
研究还表明，柿叶中还因含有丰富的多酚类物质如单宁、没食子酸、肉桂酸、咖啡酸、香豆酸、绿原酸、原儿茶酸、阿魏酸、丁香等[6]。
1.2.1.2 萜类
据研究报道，柿叶中萜类主要为三萜类，目前已经分离鉴定的三萜类物质有齐墩果酸、白桦脂酸、19α羟基乌苏酸等[7]。
1.2.1.3 蒽醌类
蒽醌类物质可分为单聚体、二聚体、三聚体和四聚体，基本都含有Plumba结构单位。从柿属植物中分离得到的蒽醌类物质达60多个，其中单聚体和二聚体局多[8]。
1.2.1.4 其他成分
柿叶中还含有丰富香豆素类、有机酸类、甾醇类、鞣质等。还富含Vc、半纤维素、多种氨基酸和微量元素[9]，其中半纤维素含量为7.54 %，木质素含量为11.70 %。此外，柿叶还含有17多种氨基酸及多种微量元素[10]。
1.3 单宁的提取方法
1.3.1 溶剂浸提法
单宁易溶于甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，故可采用有机溶剂浸提的方法进行提取。李雪雁等分别以甲醇、乙醇、丙酮为提取剂，从黑叶荔枝果壳中提取单宁，确定丙酮为最佳提取剂，最佳浸提条件为在浸提6h、温度55℃、浸提液为70%丙酮水溶液、料液比为16mL/g 时，浸提率最高为26.862mg/g[11]。任雪峰等采用丙酮为提取剂，通过响应面法优化款冬花总溶质的提取工艺，结果表明：以丙酮浓度31%，提取温度30℃，料液比为1:12，提取时167min为最佳提取工艺，总鞣质得率可达14.97%[12]。苏宁等采用水浴法提取余甘子中低分子水解单宁，并通过正交试验进行优化，结果表明，单宁提取最佳工艺为：乙醇浓度60%、料液比1:30、提取温度85℃、提取时间1.5h，此条件下余甘子单宁提取率为8.84%[13]。有机溶剂提取法提取工艺简单，易于操作，成本较低，适合工业化生产。
1.3.2 微波辅助提取法
微波辅助提取具有设备简单、适用范围广、萃取效率高、污染小等优点。目前，主要用于实验室样品预处理，对于其能否应用于产业化，有待进一步研究和探索。
曹一波等从白桦树皮中提取单宁，采用微波辅助，得出最佳工艺为：微波功率75W，乙醇浓度33%，提取时间为92s，提取温度为80℃，单宁得率为5.16%
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